一种非洲爪蟾卵母细胞表达载体pGXBG制造技术

本发明专利技术涉及一种非洲爪蟾卵母细胞表达载体pGXBG。X.lavies卵母细胞广泛用于结构生物学、发育生物学、电生理学和神经生物学的蛋白质表达和离子转运蛋白鉴定。然而，现有的限制性酶切连接或Gateway克隆方法的载体cRNA翻译效率不够稳定，无法严格重复实验。本发明专利技术通过更新载体pGEMHE中的Kozak序列并创建了新的X.lavies卵母细胞表达载体pGXBG系列来提高翻译效率。在X.lavies卵母细胞中的进一步TEVC实验证明，本发明专利技术载体通过在X.lavies卵母细胞中表达通道蛋白记录更大和稳定的电流幅度，提供更稳定和更高的cRNA翻译效率。更稳定和更高的cRNA翻译效率。更稳定和更高的cRNA翻译效率。

【技术实现步骤摘要】
一种非洲爪蟾卵母细胞表达载体pGXBG


[0001]本专利技术属于基因工程领域
，具体涉及一种非洲爪蟾卵母细胞表达载体pGXBG及所述表达载体的构建方法。

技术介绍

[0002]公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
[0003]X.lavies卵母细胞是研究离子通道和转运蛋白、水通道蛋白、蛋白质表达、mRNA定位、基因组编辑、细胞骨架、细胞生长和减数分裂的重要工具。它于1971年首次被证明具有翻译外源mRNA的能力。之后的研究表明，该细胞具有单细胞体积大、能量和蛋白质储存量大、合成蛋白质的能力强、背景活性小、信噪比非常高的优势，因此特别适用于蛋白质异源表达和电生理分析。而这些功能借助从目的基因的cDNA体外转录产生的靶基因cRNA的注射和翻译才能实现。卵母细胞表达载体pGEMHE是用于cRNA产生和卵母细胞表达的最广泛使用的载体之一，其首次构建用于卵母细胞表达和K
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通道KV1.1的电生理分析。在本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种非洲爪蟾卵母细胞表达载体pGXBG，其特征在于，所述表达载体由pGEMHE载体骨架改造而来，相比于改造前载体，pGXBG中内切酶KpnⅠ和BsmFⅠ位点之间的序列被替换，替换后的序列中，至少包括如下的非洲爪蟾珠蛋白5
’‑
UTR、STP及非洲爪蟾珠蛋白3
’‑
UTR序列；上述非洲爪蟾珠蛋白5'
‑
UTR序列如SEQ ID NO:1所示，STP序列如SEQ ID NO:2所示，非洲爪蟾珠蛋白3'
‑
UTR如SEQ ID NO:3.。2.如权利要求1所述非洲爪蟾卵母细胞表达载体pGXBG，其特征在于，所述表达载体pGXBG中，STP序列与非洲爪蟾珠蛋白3'
‑
UTR之间还具有功能性分子，所述功能性分子包括但不限于可检测标记物、细胞毒素、放射性同位素、生物活性蛋白质、靶向分子或其组合。3.如权利要求2所述非洲爪蟾卵母细胞表达载体pGXBG，其特征在于，所述功能性分子为标记蛋白基因，所述标记蛋白为荧光蛋白，进一步的，为绿色荧光蛋白或黄色荧光蛋白。4.如权利要求3所述非洲爪蟾卵母细胞表达载体pGXBG，其特征在于，所述标记蛋白基因与STP序列之间还具有linker，序列如如SEQ ID NO:4所示。5.如权利要求1所述非洲爪蟾卵母细胞表达载体pGXBG，其特征在于，所述表达载体pGXBG采用双酶切方式导入目的基因，其限制性核酸内切酶为XholⅠ和BglⅡ。6.如权利要求5所述非洲爪蟾卵母细胞表达载体pGXBG，其特征在于，所述表达载体pGXBG导入目的基因的方式为gibson组装法，将目的基因与XholⅠ/BglⅡ消化的pGXBG表达载体通过gibson组装法组装。7.如权利要求1所述非洲爪蟾卵母细胞表达载体pGXBG，其特征在于，所述表达载体pGXBG替换后的序列为非洲爪蟾珠蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：龙雨，林萍，周慧，冯翠珠，
申请(专利权)人：河南大学，
类型：发明
国别省市：