用于检测分析物的侧向流测定装置及其检测方法制造方法及图纸

本发明专利技术涉及一种用于检测样品中分析物的侧向流测定装置及其检测方法。本发明专利技术提供了用于检测样品中分析物的定量测定。本发明专利技术还提供了一种缀合物。本发明专利技术提供了一种诊断患者COVID 19的方法。19的方法。19的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于检测分析物的侧向流测定装置及其检测方法


[0001]本专利技术涉及一种用于检测样品中分析物的侧向流测定装置及其检测方法。

技术介绍

[0002]为了制定有效的治疗模式，早期识别和检测作为致病原因的病毒很重要，特别是对于高风险人群，如患有并发症的人、怀孕妇女、免疫功能低下的人等。适当且准确的诊断可以确保进行适当的监测，制定合适的管控措施(特别是在传染病和流行病期间)以防止疾病在人群中的进一步传播。
[0003]目前的分析生物传感器需要处理样品，并需要将捕捉抗体结合到样品中的特定分析物，然后添加另一检测抗体以检测分析物。例如，其他系统使用与辣根过氧化物酶(HRP)或生物素缀合的抗体对分析物进行化学发光检测或比色检测。
[0004]用于蛋白质分析物的常规技术例如酶联免疫吸附测定法(ELISA)既耗时又昂贵。其他基于表面等离子体共振(SPR)和压电设备的无标签技术(例如，无放射性、显色、荧光等标签)通常是快速的，但是需要具有复杂检测技术的昂贵且高端的基础设施。
[0005]近期，已经研发了金纳米颗粒聚集引起的比色变化。金纳米颗粒以受控的方式聚集，被Mirkin等人用作为传感器，使用DNA杂交诱导与单链DNA缀合的颗粒的组装。例如参照Storhoff等人，“One
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Pot colorimetric Differentiation of Polynucleotides with single base imperfections using gold nanoparticle probes，”1998年Journal of The American Chemical Society，120，1959页至1964页。可以看出，需要快速、简单、特异和廉价的生物测定法和传感器。由于金纳米颗粒的等离子特性，金纳米颗粒具有高消光系数。金纳米颗粒的聚集会导致悬浮液的消光光谱发生巨大变化，表现为颜色从红色变为紫色，从而使金纳米颗粒适合作为检测分析物的简单传感器。
[0006]然而，20nm至100nm的更大纳米颗粒已经具有浅紫色到深紫色的颜色变化，因此当用于检测系统时可能不会显示出颜色的变化。
[0007]目前全部的侧向流测定系统都使用尺寸为40nm至100nm的大尺寸金纳米颗粒，所述金纳米颗粒由于尺寸的原因已经是紫色的。这是由于它们使用抗体作为生物传感器，而抗体的尺寸很大，平均分子量为150千道尔顿。使用与大的金纳米颗粒缀合的抗体在与分析物结合时会产生颜色。然而，这不是颜色从红变为紫且不够敏感。侧向流测定的平均灵敏度为约65％至70％。因此，需要研发将金纳米颗粒与生物传感器使用的方法，这可以制造出更加灵敏的侧向流测定或其他定量比色测定。

技术实现思路

[0008]本专利技术涉及一种侧向流测定装置(100)，其包含安装在固体支持体(10)上的多孔膜(20)。所述多孔膜在第一端具有用于接收包含目标分析物的液体样品(12)的样品垫(14)，在第二端具有吸收垫(28)。所述固体支持体(10)允许包含目标分析物的液体样品从样品垫(14)至吸收垫(28)的毛细管流。其特征在于：多孔膜(20)包含含有金纳米颗粒传感
器缀合物(18)的缀合物垫(16)。所述金纳米颗粒传感器缀合物包含粒径为10nm至20nm的与特异性结合目标分析物中的蛋白质的肽缀合的金纳米颗粒，或者所述金纳米颗粒传感器缀合物包含粒径为10nm至20nm的与针对目标分析物中蛋白质的抗体缀合的金纳米颗粒。提供了包含固定化捕捉分子(24)的测试区域(22)。所述捕捉分子是能够与目标分析物中的蛋白质特异性结合的肽或是针对目标分析物中蛋白质的抗体。任选地提供包含固定在多孔膜(20)上的目标分析物中的蛋白质对照区域(26)。
[0009]金纳米颗粒缀合到能够特异性结合液体样品(12)中的蛋白质的肽，并且捕捉分子包含针对液体样品(12)中的蛋白质的固定化抗体。
[0010]金纳米颗粒缀合到针对液体样品(12)中的蛋白质的抗体，并且捕捉分子包含能够特异性结合液体样品(12)中的蛋白质的肽。
[0011]金纳米颗粒缀合到能够特异性缀合到刺突蛋白或目标分析物的蛋白质的肽，或缀合到目标分析物的核衣壳蛋白抗体。金纳米颗粒包含30μg至50μg的肽，或0.5μg至1μg的抗体。
[0012]本专利技术提供了一种侧向流测定装置(100)，其中捕捉分子(24)是能够与刺突蛋白或目标分析物的蛋白质特异性结合的肽或是针对目标分析物的核衣壳蛋白的抗体。所述捕捉分子(24)包含0.75μg至1μg的肽或0.75μg至1μg的抗体。
[0013]本专利技术提供了一种侧向流测定装置(100)，其中对照区域(26)包含0.5μg至1μg的刺突蛋白或目标分析物的核衣壳蛋白。
[0014]本专利技术提供了一种侧向流测定装置(100)，其中目标分析物是选自SARS
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CoV1、SARS
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CoV2、MERS
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CoV、流感病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒和埃博拉病毒的包膜病毒。
[0015]本专利技术提供了一种侧向流测定装置(100)，包含安装在固体支持体(10)上的多孔膜(20)。所述多孔膜在第一端具有用于接收包含SARS CoV2病毒的液体样品(12)的样品垫(14)，在第二端具有吸收垫(28)。所述固体支持体(10)允许含有目标分析物的液体样品从样品垫(14)至吸收垫(28)的毛细管流。其特征在于多孔膜(20)包含含有金纳米颗粒传感器缀合物(18)的缀合物垫(16)。所述缀合物包含粒径为10nm至20nm的与能够结合所述SARS CoV2的S1刺突蛋白的肽缀合的金纳米颗粒且具有SEQ ID NO:1，或者所述缀合物包含粒径为10nm至20nm的与SARS CoV2的抗S1mAB或抗NmAB缀合的金纳米颗粒。提供了包含固定化捕捉分子(24)的测试区域(22)的多孔膜(20)。所述捕捉分子是能够与SARS CoV2的S1刺突蛋白结合的肽，且具有SEQ ID NO:1，或是SARS CoV2的抗S1mAB或抗NmAB。任选地，提供了包含固定在多孔膜(20)上的SARS CoV2的S1刺突蛋白的对照区域(26)。
[0016]本专利技术涉及一种用于检测样品中的目标分析物的侧向流测定方法，包括在本专利技术的装置(100)的样品垫(14)上施加含有目标分析物的样品(12)。所述样品可以从样品垫(14)通过缀合物垫(16)流至测试区域(22)。通过在约60秒至约300秒内颜色由红变紫的变化检测测试区域(22)是否存在目标分析物。
[0017]本专利技术的方法还包括允许样品进一步流至对照区域(26)。在约60秒至约300秒，在对照区域中观察颜色由红变紫的变化。颜色的变化确定了测试区域(22)内是否存在目标分析物。
[0018]本专利技术提供了一种方法，其中所述样品(12)是口腔拭子、鼻拭子、痰液或唾液。
[0019]本专利技术提供了一种方法，其中所述样品(12)在选自磷酸盐缓冲盐水的缓冲液中稀...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种侧向流测定装置(100)，其包含：安装在固体支持体(10)上的多孔膜(20)；所述多孔膜在第一端具有用于接收包含目标分析物的液体样品(12)的样品垫(14)，在第二端具有吸收垫(28)，所述固体支持体允许所述包含目标分析物的液体样品从所述样品垫(14)至所述吸收垫(28)的毛细管流；其特征在于：a.所述多孔膜(20)包含含有金纳米颗粒传感器缀合物(18)的缀合物垫(16)，所述缀合物包含粒径为10nm至20nm的与特异性结合所述目标分析物中的蛋白质的肽缀合的金纳米颗粒，或者所述缀合物包含粒径为10nm至20nm的与针对所述目标分析物中蛋白质的抗体缀合的金纳米颗粒；b.包含固定化捕捉分子(24)的测试区域(22)；所述捕捉分子是能够与所述目标分析物中的蛋白质特异性结合的肽或是针对所述目标分析物中的蛋白质的抗体；和c.任选地，包含固定在所述多孔膜(20)上的所述目标分析物中的蛋白质的对照区域(26)。2.如权利要求1所述的侧向流测定装置(100)，其中，所述金纳米颗粒缀合到能够特异性结合所述液体样品(12)中的蛋白质的肽，并且所述捕捉分子包含针对所述液体样品(12)中的蛋白质的固定化抗体。3.如权利要求1所述的侧向流测定装置(100)，其中，所述金纳米颗粒缀合到针对所述液体样品(12)中的蛋白质的抗体，并且所述捕捉分子包含能够特异性结合所述液体样品(12)中的蛋白质的肽。4.如权利要求1所述的侧向流测定装置(100)，其中，所述金纳米颗粒缀合到能够特异性缀合到刺突蛋白或所述目标分析物的蛋白质的肽，或缀合到针对所述目标分析物的核衣壳蛋白的抗体。5.如权利要求4所述的侧向流测定装置(100)，其中，所述金纳米颗粒包含30μg至50μg的所述肽，或0.5μg至1μg的所述抗体。6.如权利要求1所述的侧向流测定装置(100)，其中，所述捕捉分子(24)是能够与刺突蛋白或所述目标分析物的蛋白质特异性结合的肽，或是针对所述目标分析物的核衣壳蛋白的抗体。7.如权利要求1至6中任一项所述的侧向流测定装置(100)，其中，所述捕捉分子(24)包含0.75μg至1μg的所述肽或0.75μg至1μg的所述抗体。8.如权利要求1所述的侧向流测定装置(100)，其中，所述对照区域(26)包含0.5μg至1μg的刺突蛋白或目标分析物的核衣壳蛋白。9.如权利要求1至8中任一项所述的侧向流测定装置(100)，其中，所述目标分析物是选自SARS
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CoV1、SARS
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CoV2、MERS
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CoV、流感病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒和埃博拉病毒的包膜病毒。10.如权利要求1所述的侧向流测定装置(100)，其包含：安装在固体支持体(10)上的多孔膜(20)；所述多孔膜在第一端具有用于接收包含SARS CoV2病毒的液体样品(12)的样品垫(14)，在第二端具有吸收垫(28)，所述固体支持体允许含有目标分析物的液体样品从所述样品垫(14)至所述吸收垫(28)的毛细管流；其特征在于：
a.所述多孔膜(20)包含含有金纳米颗粒传感器缀合物(18)的缀合物垫(16)；所述缀合物包含粒径为10nm至20nm的与能够结合所述SARS CoV2的S1刺突蛋白的肽缀合的金纳米颗粒，且具有SEQ ID NO:1，或者所述缀合物包含粒径为10nm至20nm的与所述SARS CoV2的抗S1mAB或抗NmAB缀合的金纳米颗粒；b.包含固定化捕捉分子(24)的测试区域(22)；所述捕捉分子是能够与所述SARS CoV2的S1刺突蛋白结合的肽，且具有SEQ ID NO:1，或是所述SARS CoV2的抗S1mAB或抗NmAB；和c.任选地，包含固定在所述多孔膜(20)上的所述SARS CoV2的S1刺突蛋白的对照区域(26)。11.一种用于检测样品中的目标分析物的侧向流测定方法，其包括：a.在权利要求1至10所述的装置(100)的样品垫(14)上施加含有所述目标分析物的样品(12)；b.允许所述样品从所述样品垫(14)通过所述缀合物垫(16)流至所述测试区域(22)；和c.通过在约60秒至约300秒内颜色由红变紫的变化，检测所述测试区域(22)是否存在所述目标分析物。12.如权利要求11所述的方法，其中，还包括允许所述样品进一步流至所述对照区域(26)；在约60秒至约300秒，观察所述对照区域中颜色由红变紫的变化；并确定所述测试区域(22)内...

【专利技术属性】
技术研发人员：R，
申请(专利权)人：纽奥姆肽私人有限公司，
类型：发明
国别省市：