一种鉴定南高丛蓝莓品种的PCR试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开一种鉴定南高丛蓝莓品种的PCR试剂盒及其应用，属于分子标记开发及应用技术领域。本发明专利技术首次利用常绿越桔蓝莓品种(Vaccinium darrowii)基因组数据，自主开发SSR(Simple Sequence Repeats)分子标记，并结合之前利用蓝莓品种德雷帕(Drapper)基因组数据自主开发的SSR分子标记，获得用于鉴定南高丛蓝莓品种的PCR试剂盒，所述的PCR试剂盒包括SSR引物组，即SSR1

【技术实现步骤摘要】
一种鉴定南高丛蓝莓品种的PCR试剂盒及其应用


[0001]本专利技术属于分子标记开发及应用
，具体涉及一种鉴定南高丛蓝莓品种的PCR试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]蓝莓(Blueberry)原产于北美洲，杜鹃花科(Ericaceae)越桔属(Vaccinium L.)植物。由于其果实具有很高的营养价值，自20世纪初期被驯化栽培以来，已在世界范围内被广泛种植。近百年来，我国随着栽培技术不断提高，蓝莓产业发展迅猛，形成了东北地区、山东半岛、长江流域和云贵高原等4个主产区。
[0003]蓝莓栽培种根据树体大小和需冷量的多少可划分为北高丛蓝莓、南高丛蓝莓、半高丛蓝莓、矮丛蓝莓和兔眼蓝莓5个类型。蓝莓品种的正确识别和亲缘关系分析是蓝莓产业健康发展、科学开发及合理利用的重要前提，但我国蓝莓引种途径多，品种信息管理混乱；在生产过程中存在品种名音译、意译和自拟商品名同时存在的现象，导致种苗混乱，常出现以假乱真或以次充好的现象，使得蓝莓种植企业和种植户遭受重大经济损失。
[0004]传统的品种鉴别是基于蓝莓叶、花、果实和树姿进行的，但由于不同学者对形态性状的判断标准不一样，品种间性状交叉、重叠及在不同环境中具有很强的可塑性，造成此种鉴别方法准确度很低且非常困难，从而造成品种名混淆，同物异名、异物同名等鉴别错误的情况常常出现。
[0005]植物品种遗传多样性主要通过遗传标记的多态性来反映，分子标记是以核酸的多态性为基础的遗传标记。其不受组织类别、发育时期、环境条件等干扰，具有数量极多、多态性高等优点，是理想的遗传标记。分子标记已广泛应用于种质资源研究、杂种鉴定、遗传图谱构建、目的基因定位、遗传多样性、亲缘关系研究以及标记辅助选择育种。其中，微卫星(Microsatellite)，即简单重复序列(Simple Sequence Repeat，SSR)，是由2
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6个核苷酸串联重复片段构成的均匀分布于基因组中的简单重复序列；具有多态性高、稳定性好、多等位基因、共显性、数量丰富、基因组覆盖性好和操作简单等优点。已应用于中国李(Prunus salicina)、桃(Prunus persica)、黑果枸杞(Lycium ruthenicum)和枇杷(Eriobotrya japonica)等植物的亲缘关系、遗传多样性分析、品种指纹图谱绘制、品种鉴定和DNA指纹图谱构建等研究中。本研究组前期利用从Drapper基因组数据中开发出的3对SSR分子标记成功鉴定出48个北高丛蓝莓品种，仅仅利用三对引物就能鉴别48种蓝莓品种，已经取得了重大进步，但是蓝莓种类繁多，由于采用的引物数量较少，分辨率相对不足，仍有部分蓝莓品种无法区分开。

技术实现思路

[0006]为了解决
技术介绍
中存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种鉴定南高丛蓝莓品种的PCR试剂盒及其应用。针对目前南高丛蓝莓尚无高效的SSR标记的技术体系、品种尚待鉴定的现状，采集的常见的48个南高丛蓝莓品种材料进行遗传多样性研究，利用常绿越桔
蓝莓品种(Vaccinium darrowii)基因组数据，自主开发SSR分子标记，并结合之前利用蓝莓品种德雷帕(Drapper)基因组数据自主开发的SSR分子标记以及筛选出的多态性引物，对这48个南高丛蓝莓品种进行鉴定，筛选最优的品种鉴定引物组合，并构建蓝莓品种SSR特征指纹，为蓝莓品种鉴定以及分子标记辅助育种提供重要依据。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0008]本专利技术的第一个目的是提供一种蓝莓SSR分子标记引物组，所述的引物组包括4对SSR分子标记引物对，所述引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.1
‑
8所示。
[0009]本专利技术的第二个目的是提供一种鉴定南高丛蓝莓品种的PCR试剂盒，包括上述的蓝莓SSR分子标记引物组。
[0010]基于上述技术方案，进一步地，所述的PCR试剂盒还包括Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应增强剂和优化剂以及稳定剂、去离子水。
[0011]本专利技术的第三个目的是提供一种鉴定南高丛蓝莓品种的方法，包括以下步骤：
[0012](1)提取已知品种的南高丛蓝莓的基因组DNA；
[0013](2)使用所述的引物对对步骤(1)所获基因组DNA进行PCR扩增；
[0014](3)使用聚丙烯酰胺凝胶电泳对步骤(2)所获PCR扩增产物进行检测，读取、分析数据；
[0015](4)构建南高丛蓝莓品种SSR特征指纹图谱；
[0016](5)采用步骤(1)～(3)获得待检测南高丛蓝莓品种的相应位点的扩增结果，若扩增结果与已知南高丛蓝莓品种指纹图谱中的碱基大小完全一致，即获得该未知南高丛蓝莓的品种。
[0017]基于上述技术方案，进一步地，所述的方法能够鉴定的品种包括布莱登(Bladen)、珠宝
[0018](Jewel)、久比利(Jubilee)、奥尼尔(O
′
Neal)、晨号(Reveille)、夏普蓝(Sharpblue)、明星(Star)、脆蓝
[0019](Bluecrisp)、蓝脊(BlueRidge)、海岸(Gulfcoast)、艾文蓝(Avonblue)、杜珀林(Duplin)、苏西蓝(Suziblue)、兰宝石(Sapphire)、佐治宝石(Georgiagem)、珍珠河(PearlRiver)、南月(Southmoon)、顶级(Summit)、玉兰(Magnolia)、奥扎克蓝(Ozarkblue)、瑞宝(Rebel)、克雷文(Craven)、利诺(Lenoir)、阿林(Arlen)、上蓝(TopblueSX
トップブルー
)、戴安娜(SX
ブルージュエル
)、爱蓝(AiblueSX
アイ
[0020]ブルー
)、绿宝石(Emerald)、盖普顿(Guputon)、土著蓝(Naitive Blue)、迪克西蓝(Dixieblue)、卡特里特(Carteret)、博福特(Beaufort)、天后(Primadonna)、云雀(Meadowlark)、法新(Farthing)、诺曼(Norman)、优瑞卡(Eureka)、茱莉叶(EB9
‑
12 Magnifica)、阳光蓝(SunshineBlue)、蓝雨(Bluerain)、火花(Scintilla)、春宽(Springwide)、丰富(Abundance)、闪烁(Flicher)、棕榈(Palmetto)、瑞圆、茱莉塔(EB8
‑
42 Julieta)。
[0021]基于上述技术方案，进一步地，步骤(2)中的PCR扩增体系的体积为10μL，包含正反向引物(10μmol/L)各0.5μl、2*Taq PCR Master Mix 4μl、模板100ng，余量为去离子水。
[0022]基于上述技术方案，进一步地，步骤(2)中的PCR扩增程序为：94本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种蓝莓SSR分子标记引物组，其特征在于，所述的引物组包括4对SSR分子标记引物对，所述引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.1
‑
8所示。2.一种鉴定南高丛蓝莓品种的PCR试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的蓝莓SSR分子标记引物组。3.根据权利要求2所述的PCR试剂盒，其特征在于，所述的PCR试剂盒还包括Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应增强剂和优化剂以及稳定剂、去离子水。4.一种鉴定南高丛蓝莓品种的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取已知品种的南高丛蓝莓的基因组DNA；(2)使用权利要求1所述的引物对对步骤(1)所获的基因组DNA进行PCR扩增；(3)使用聚丙烯酰胺凝胶电泳对步骤(2)所获PCR扩增产物进行检测，读取、分析数据；(4)构建南高丛蓝莓品种SSR特征指纹图谱；(5)采用步骤(1)～(3)获得待检测南高丛蓝莓品种的相应位点的扩增结果，若扩增结果与已知南高丛蓝莓品种指纹图谱中的碱基大小完全一致，即获得该未知南高丛蓝莓的品种。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的方法能够鉴定的品种包括布莱登(Bladen)、珠宝(Jewel)、久比利(Jubilee)、奥尼尔(O
′
Neal)、晨号(Reveille)、夏普蓝(Sharpblue)、明星(Star)、脆蓝(Bluecrisp)、蓝脊(BlueRidge)、海岸(Gulfcoast)、艾文蓝(Avonblue)、杜珀林(Duplin)、苏西蓝(Suziblue)、兰宝石(Sapphire)、佐治宝石(Georgiagem)、珍珠河(PearlRiver)、南月(Southmoon)、顶级(Summit)、玉兰(Magnolia)、奥扎克蓝(Ozarkblue)、瑞宝(Rebel)、克雷文(Craven)、利诺(Lenoir)、阿林(Arlen)、上蓝(TopblueSX
トップブルー
)、戴安娜(SX
ブルージュエル
)、爱蓝(AiblueSX
アイブルー
)、绿宝石(Emerald)、盖普顿(Guputon)、土著蓝(Naitive Blue)、迪克西蓝(Dixieblue)、卡特里特(Carteret)、博福特(Beaufort)、天后...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐国辉，李逸斐，楚立威，王贺新，温立柱，崔青青，赵倩，刘桂婷，卢雅妮，邓艳琼，
申请(专利权)人：大连大学，
类型：发明
国别省市：