一种匙羮藤总皂苷的制备方法及其提高肠道产丁酸菌群丰度的用途技术

本发明专利技术公开了一种匙羮藤总皂苷的制备方法及将其用于提高肠道产丁酸菌群丰度的用途，该提取物的制备流程主要包括：

【技术实现步骤摘要】
一种匙羮藤总皂苷的制备方法及其提高肠道产丁酸菌群丰度的用途


[0001]本专利技术属于植物提取物
，具体涉及一种匙羮藤总皂苷的制备方法及将其用于提高肠道产丁酸菌群丰度的用途。

技术介绍

[0002]短链脂肪酸(SCFAs)由结肠内的厌氧菌酵解肠道中未被消化吸收的碳水化合物产生，主要包括乙酸、丙酸、丁酸等。其中，丁酸是结肠保持完整性和健康的关键调节物质，与增强肠道屏障有关。作为结肠细胞的主要和首选能量底物，丁酸的细胞代谢优先于葡萄糖或谷氨酰胺，占结肠黏膜总能量需求的70％。丁酸能刺激表皮生长因子和抗炎细胞因子的产生，减少炎性细胞因子的产生，并具有抑制NF
‑
κB活化的能力。据报道，消化道中发现的已知丁酸盐生产者大多数属于毛螺菌科和瘤胃球菌科，且大肠产丁酸的菌种主要是梭菌属XIVa和IV族，以及真杆菌属和梭杆菌属。当肠道中产丁酸菌群丰度下降时，丁酸等SCFAs含量降低，有害菌群丰度升高、肠黏膜通透性增加以及血液循环中LPS等炎症因子的增加，肠道黏膜屏障功能下降、炎症和免疫力下降，引发肠道内肠毒素、细胞毒素、病原体等侵入人体产生危害，导致糖尿病(DM)、肥胖、肠炎代谢性疾病的发生。因此产丁酸菌群对宿主的影响受到越来越多的关注，有实力成为防治DM等代谢性疾病的重要潜在靶点。
[0003]匙羹藤(Gymnema sylvestre(Retz)Schult)属萝藦科(Asclepiadaceae)植物，是我国南方地区传统的常用药材之一，其根或嫩枝叶均可入药，以“gurmar”(糖分杀手)而闻名。现代研究表明，匙羹藤总皂苷是其主要功效成分，在降糖、降脂和减轻体重方面效果显著，被广泛应用于食品、保健品、化妆品等行业，然而目前对其在通过调节肠道菌群进而缓解DM鲜有报道。
[0004]亚临界萃取是利用亚临界流体作为萃取剂，在密闭、无氧、低压的压力容器内，依据有机物相似相溶的原理，通过物料与萃取剂在浸泡过程中的分子扩散过程，使固体物料中目的成分快速转移到液态萃取剂中的一种新型萃取与分离技术。该技术提取速度快、效率高、有效成分提取充分，并且溶媒耗量少、出液系数小、浸出液浓度高，节省溶剂，节省后道工序生产成本，非常适合从复杂中药化学成分中直接大量提取皂苷类成分。

技术实现思路

[0005]针对上述存在的问题，本专利技术提供了一种匙羹藤总皂苷提取物的制备方法并将其用于改善肠道产丁酸菌群丰度的用途，有助于DM和肥胖的治疗。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0007]匙羮藤总皂苷提取物的制备方法，包括以下步骤：
[0008]①
取匙羮藤叶或根干燥后粉碎，加入60％
‑
70％乙醇进行亚临界萃取，萃取液经过滤后减压浓缩，得第一产物；
[0009]②
将上述第一产物分散于水中，加正丁醇萃取，并将萃取液进行减压浓缩，得第二
产物；
[0010]③
将上述第二产物经乙醇溶解后，加入至D101大孔树脂吸附柱进行层析，然后收集洗脱液，减压浓缩并冷冻干燥，得匙羮藤总皂苷提取物。
[0011]优选地，所述步骤
①
中亚临界萃取时间为1h，萃取2次。
[0012]优选地，所述步骤
③
中洗脱过程为先用水洗脱，再用60％
‑
70％乙醇洗脱。
[0013]匙羮藤总皂苷提取物在调节动物肠道中产丁酸菌群丰度中的应用：动物实验研究表明匙羮藤总皂苷提取物可显著升高肠道内产丁酸菌群丰度，在本专利技术的具体实施例中，给药剂量≥125mg/kg
·
d时，大鼠肠道中产丁酸菌群的丰度有显著提升。
[0014]匙羮藤总皂苷提取物在制备提高肠道中产丁酸菌群丰度的药物或添加剂中的应用。进一步地，产丁酸菌群包括毛螺菌科及瘤胃球菌科的菌种，尤其是梭状芽孢杆菌属、粪杆菌属、粪球菌属与罗氏菌属的菌种。
[0015]本专利技术具有如下优点和有益效果：
[0016](1)本专利技术采用的亚临界萃取设备，依据有机物相似相溶的原理，通过萃取物料与萃取剂在浸泡过程中的分子扩散，以液化的亚临界溶剂对物料进行逆流萃取，最终得到目的产物，这种新型萃取与分离技术具有无毒、无污染、易于和产物分离等优点。
[0017](2)本专利技术提供的匙羹藤总皂苷富集流程，结合特征性萃取剂和吸附柱对匙羹藤中特异性功效成分进行两次富集，可最大程度提高匙羹藤提取物中活性成分含量。
[0018](3)丁酸在抑制有害菌群维持肠道微生态平衡、保护肠道黏膜屏障和降低炎性反应中起着重要作用。本专利技术制备的匙羹藤总皂苷提取物可显著提高动物肠道中产丁酸菌群丰度，因此对DM、肥胖、肠炎代谢性疾病的治疗具有重要意义。
附图说明
[0019]图1为本专利技术的整体步骤流程图。
[0020]图2为实施例1中负离子模式下匙羹藤总皂苷提取物的质谱监测图(总离子流图)。
[0021]图3为实施例1中负离子模式下匙羹藤总皂苷提取物总离子流图峰8(匙羹藤酸，Gymnemic acid A)的二级碎片谱图。
[0022]图4为实施例1中负离子模式下匙羹藤总皂苷提取物总离子流图峰21(羟基积雪草酸，Madecassic acid)的二级碎片谱图。
[0023]图5为实施例1中负离子模式下匙羹藤总皂苷提取物总离子流图峰22(Alternoside XVIII)的二级碎片谱图。
[0024]图6为实施例3中匙羹藤总皂苷提取物对2型DM大鼠肠道产丁酸毛螺菌科(Lachnospiraceae)丰度的影响。*p<0.05具有显著性差异，**p<0.01具有极显著性差异，以下相同。
[0025]图7为实施例3中匙羹藤总皂苷提取物对2型DM大鼠肠道产丁酸瘤胃球菌科(Ruminococcaceae)丰度的影响。
[0026]图8为实施例3中匙羹藤总皂苷提取物对2型DM大鼠肠道产丁酸梭状芽孢杆菌属(Clostridium spp.)丰度的影响。
[0027]图9为实施例3中匙羹藤总皂苷提取物对2型DM大鼠肠道产丁酸粪杆菌属(Faecalibacterium spp.)丰度的影响。
[0028]图10为实施例3中匙羹藤总皂苷提取物对2型DM大鼠肠道产丁酸粪球菌属(Coprococcus spp.)丰度的影响。
[0029]图11为实施例3中匙羹藤总皂苷提取物对2型DM大鼠肠道产丁酸罗氏菌属(Roseburia spp.)丰度的影响。
具体实施方式
[0030]实施例1：亚临界萃取技术用于匙羮藤总皂苷提取物的制备
[0031]匙羮藤总皂苷提取物的制备流程包括如下步骤：
[0032]①
取匙羮藤(Gymnema sylvestre(Retz)Schult)叶片，晒干后粉碎，加入10倍量的60％乙醇浸泡后进行亚临界萃取2次，每次1h；合并提取液，减压抽滤后经旋转蒸发仪减压浓缩，得第一产物(粗提取物)。<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.匙羮藤总皂苷提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
①
取匙羮藤叶或根干燥后粉碎，加入60%
‑
70%乙醇进行亚临界萃取，萃取液经过滤后减压浓缩，得第一产物；
②
将上述第一产物分散于水中，加正丁醇萃取，并将萃取液进行减压浓缩，得第二产物；
③
将上述第二产物经乙醇溶解后，加入至D101大孔树脂吸附柱进行层析，然后收集洗脱液，减压浓缩并冷冻干燥，得匙羮藤总皂苷提取物。2.根据权利要求1所述的匙羮藤总皂苷提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤
①

【专利技术属性】
技术研发人员：陈桂林，郭明全，徐勇兵，
申请(专利权)人：中国科学院武汉植物园，
类型：发明
国别省市：