一种奶绵羊精液冷冻保存用稀释液的制备方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种奶绵羊精液冷冻保存用稀释液的制备方法，该方法为：向3.1g葡萄糖、4.6g乳糖和1.5g柠檬酸钠的混合物中加50mL超纯水溶解，调节pH至7后，用超纯水定容至100mL，用0.22μm滤器过滤，得到A液；向5万单位青霉素、5万单位链霉素和15mL卵黄的混合物中加入50mL的A液溶解，调节pH至7后定容至100mL，得到B液；向0.001g～0.004g矢车菊素

【技术实现步骤摘要】
一种奶绵羊精液冷冻保存用稀释液的制备方法及其应用


[0001]本专利技术属于冷冻精液
，具体涉及一种奶绵羊精液冷冻保存用稀释液的制备方法及其应用。

技术介绍

[0002]精液冷冻保存是动物生物技术体系中的关键环节之一，主要解决精液长期稳定保存的问题。精液冷冻保存技术可以打破时间和空间的障碍长期保存精液，提高优良种公羊的利用率，加快品种改良的进程，是人工授精技术的关键环节之一。
[0003]绵羊精子本身对温度特别敏感，在冷冻过程中极易受到低温损伤。首先，绵羊精子质膜中不饱和脂肪酸含量很高，而胆固醇含量则较低，无法将脂肪酸凝结在一起，导致绵羊精子质膜的结构更加开放、稳定性和粘合力更低，使得绵羊精子在低温和冷冻过程中更难抵御冰晶造成的结构的损伤。其次，精液在冷冻保存过程中会产生活性氧，当活性氧过量时，会破坏精子的氧化还原平衡，引起精子的过度氧化应激，造成DNA片段化、线粒体损伤、脂质过氧化以及蛋白质损伤等，这些损伤导致精子运动性能降低、质膜功能受损以及受精率降低。目前在奶绵羊精液冷冻试验中，大多数冷冻精液解冻后活率不能稳定在50％以上。绵羊冷冻精液距离实现商业化生产、销售还有一定差距。

技术实现思路

[0004]本专利技术所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种奶绵羊精液冷冻保存用稀释液的制备方法及其应用，该奶绵羊精液冷冻保存用稀释液利用矢车菊素
‑3‑
芸香糖苷能够抵抗携带有自由基的活性氧族(ROS)的特点，在奶绵羊精液冷冻过程中添加矢车菊素
‑3‑r/>芸香糖苷，降低活性氧族对奶绵羊精子造成的过氧化损伤的作用，有效保护奶绵羊精子冷冻、解冻过程中精子生理机能，从而提高解冻后精子活力和延长了精子存活时间，达到受精受胎的目的。
[0005]为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是：一种奶绵羊精液冷冻保存用稀释液的制备方法，该方法为：
[0006]S1、配制A液：向3.1g葡萄糖、4.6g乳糖和1.5g柠檬酸钠的混合物中加50mL超纯水溶解，调节pH至7后，用超纯水定容至100mL，用0.22μm滤器过滤，得到A液；
[0007]S2、配制B液：向5万单位青霉素、5万单位链霉素和15mL卵黄的混合物中加入50mL的S1中得到的A液溶解，调节pH至7后，用所述A液定容至100mL，得到B液；
[0008]S3、配制C液：向0.001g～0.004g矢车菊素
‑3‑
芸香糖苷中加入50mL的S2中得到的B液溶解，调节pH至7后，用所述B液定容至100mL，得到C液；
[0009]S4、配制奶绵羊精液冷冻保存用稀释液：向6mL甘油中加入S3中得到的C液定容至100mL，得到奶绵羊精液冷冻保存用稀释液。
[0010]本专利技术还提供了上述制备方法所制备的奶绵羊精液冷冻保存用稀释液的的应用，所述奶绵羊精液冷冻保存用稀释液保护奶绵羊精子冷冻、解冻过程中精子生理机能。
[0011]本专利技术与现有技术相比具有以下优点：
[0012]本专利技术利用矢车菊素
‑3‑
芸香糖苷能够抵抗携带有自由基的活性氧族(ROS)的特点，在奶绵羊精液冷冻过程中添加矢车菊素
‑3‑
芸香糖苷，降低活性氧族对奶绵羊精子造成的过氧化损伤的作用，有效保护奶绵羊精子冷冻、解冻过程中精子生理机能，从而提高解冻后精子活力和延长了精子存活时间，达到受精受胎的目的。
[0013]下面结合实施例对本专利技术作进一步详细说明。
具体实施方式
[0014]实施例1
[0015]本实施例的奶绵羊精液冷冻保存用稀释液的制备方法，该方法为：
[0016]S1、配制A液：向3.1g葡萄糖、4.6g乳糖和1.5g柠檬酸钠的混合物中加50mL超纯水溶解，调节pH至7后，用超纯水定容至100mL，用0.22μm滤器过滤，得到A液；
[0017]S2、配制B液：向5万单位青霉素、5万单位链霉素和15mL卵黄的混合物中加入50mL的S1中得到的A液溶解，调节pH至7后，用所述A液定容至100mL，得到B液；
[0018]S3、配制C液：向0.001g矢车菊素
‑3‑
芸香糖苷中加入50mL的S2中得到的B液溶解，调节pH至7后，用所述B液定容至100mL，得到C液；
[0019]S4、配制奶绵羊精液冷冻保存用稀释液：向6mL甘油中加入S3中得到的C液定容至100mL，得到奶绵羊精液冷冻保存用稀释液。
[0020]实施例2
[0021]本实施例的奶绵羊精液冷冻保存用稀释液的制备方法，该方法为：
[0022]S1、配制A液：向3.1g葡萄糖、4.6g乳糖和1.5g柠檬酸钠的混合物中加50mL超纯水溶解，调节pH至7后，用超纯水定容至100mL，用0.22μm滤器过滤，得到A液；
[0023]S2、配制B液：向5万单位青霉素、5万单位链霉素和15mL卵黄的混合物中加入50mL的S1中得到的A液溶解，调节pH至7后，用所述A液定容至100mL，得到B液；
[0024]S3、配制C液：向0.002g矢车菊素
‑3‑
芸香糖苷中加入50mL的S2中得到的B液溶解，调节pH至7后，用所述B液定容至100mL，得到C液；
[0025]S4、配制奶绵羊精液冷冻保存用稀释液：向6mL甘油中加入S3中得到的C液定容至100mL，得到奶绵羊精液冷冻保存用稀释液。
[0026]实施例3
[0027]本实施例的奶绵羊精液冷冻保存用稀释液的制备方法，该方法为：
[0028]S1、配制A液：向3.1g葡萄糖、4.6g乳糖和1.5g柠檬酸钠的混合物中加50mL超纯水溶解，调节pH至7后，用超纯水定容至100mL，用0.22μm滤器过滤，得到A液；
[0029]S2、配制B液：向5万单位青霉素、5万单位链霉素和15mL卵黄的混合物中加入50mL的S1中得到的A液溶解，调节pH至7后，用所述A液定容至100mL，得到B液；
[0030]S3、配制C液：向0.004g矢车菊素
‑3‑
芸香糖苷中加入50mL的S2中得到的B液溶解，调节pH至7后，用所述B液定容至100mL，得到C液；
[0031]S4、配制奶绵羊精液冷冻保存用稀释液：向6mL甘油中加入S3中得到的C液定容至100mL，得到奶绵羊精液冷冻保存用稀释液。
[0032]实施例1
‑
3均按以下方法进行试验：
[0033]精液品质检查：
[0034]采精后用移液器移至有刻度的无菌离心管中观察，正常精液呈乳白色或乳黄色，用肉眼可以看到由精子活动所引起的翻腾滚动似云雾状；精子密度越大，活力越强，其云雾状越明显。用移液器从离心管中取适量精液滴在载玻片上，压片后至于显微镜下镜检，活率≥80％即可进行冷冻。
[0035]冷冻精液的制备：
[0036]取C液按照1：1的比例分步稀释至精子终浓度计算所需体积的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种奶绵羊精液冷冻保存用稀释液的制备方法，其特征在于，该方法为：S1、配制A液：向3.1g葡萄糖、4.6g乳糖和1.5g柠檬酸钠的混合物中加50mL超纯水溶解，调节pH至7后，用超纯水定容至100mL，用0.22μm滤器过滤，得到A液；S2、配制B液：向5万单位青霉素、5万单位链霉素和15mL卵黄的混合物中加入50mL的S1中得到的A液溶解，调节pH至7后，用所述A液定容至100mL，得到B液；S3、配制C液：向0.001g～0.00...

【专利技术属性】
技术研发人员：张磊，宋宇轩，姜璐瑶，刘晓瑞，马应天，崔久增，卫梦瑶，李丹妮，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：