一种洗消方案的可行性评估方法及选择方法技术

本发明专利技术公开了一种洗消方案的可行性评估方法及选择方法，属于畜牧养殖技术领域，该可行性评估方法通过选取理化性质稳定，且制备成本低廉的微生物进行改造，获得工程菌；将工程菌进行病原布点，再通过洗消方案进行清洗消毒；对病原布点处采样进行蓝白斑筛选试验，判断洗消方案的可行性。该选择方法在病原布点后，通过控制变量法，采用变量的洗消方案进行清洗消毒，选取蓝白斑筛选试验结果为未产生白色菌落的洗消方案，并根据洗消方案的成本、效率、安全性，选择最佳的洗消方案。本申请的工程菌确保了田间应用的安全性，建立了科学的感染性评估标准，精简生物安全防控流程，可判断洗消方案的可行性，筛选低廉有效的洗消方案。筛选低廉有效的洗消方案。筛选低廉有效的洗消方案。

【技术实现步骤摘要】
一种洗消方案的可行性评估方法及选择方法


[0001]本专利技术涉及畜牧养殖
，特别涉及一种洗消方案的可行性评估方法及选择方法。

技术介绍

[0002]迄今为止非洲猪瘟(ASF)仍然是严重危害养猪业的重要传染病，面对缺乏安全有效的疫苗现状，生物安全措施仍然是防控非洲猪瘟的唯一有效方法，其中彻底清除传染源是最为关键的环节。因而清洗消毒流程是否科学，清洗消毒执行是否到位十分重要。
[0003]由于目前缺乏田间科学的量化评估方法和标准，导致非洲猪瘟不可控的现状仍然没有根本性的改变。通过前期调研和实验结果表明，生物安全体系发展已进入瓶颈期，当前面对的主要问题包括:(1)生物安全防控环节的洗消方案是否有效，许多猪场自认为在洗消环节做到极致，如多级洗消，多次烘干，多次检测，多次转运等，但事实上仍停留在形式阶段，这些方案是否真的有效，也无人知晓；(2)生物安全防控环节清洗消毒执行是否到位，为此一些猪场采用智能化的视频识别系统，甚至一人操作一人监督的方式，实际上多流于形式，成效甚微。
[0004]现有技术尝试直接应用非洲猪瘟病毒(ASFV)开展洗消方案的可行性评估和选择，但由于直接应用存在散毒风险和种毒制备限制，以及高成本的ASFV制备和评估方法，只允许极少数国家认证的实验室内开展，且实验室技术要求高，评估成本高，评估周期长，无法满足频繁的田间评估工作和猪场快速成功复产的需求。

技术实现思路

[0005]基于此，本专利技术提供一种洗消方案的可行性评估方法及选择方法，该可行性评估方法选取比ASFV理化性质更稳定，且制备成本低廉的微生物进行改造，获得工程菌，将工程菌进行病原布点，再通过洗消方案进行清洗消毒；对病原布点处采样进行蓝白斑筛选试验，判断洗消方案的可行性。该选择方法在病原布点后，通过控制变量法，采用变量的洗消方案进行清洗消毒，选取蓝白斑筛选试验结果为未产生白色菌落的洗消方案，并根据洗消方案的成本、效率、安全性，选择最佳的洗消方案。该工程菌确保了田间应用的安全性，建立了科学的感染性评估标准，在保证防控效果的基础上降低成本，同时精简生物安全防控流程，可筛选低廉有效的洗消方案，优化车辆、物资、人员等清洗消毒方案，重塑高效低成本的生物安全防控体系。
[0006]本专利技术采用的技术方案是：
[0007]一种洗消方案的可行性评估方法，包括如下步骤：
[0008]步骤S1.构建工程菌，将目的基因插入载体构建重组质粒，再转入感受态细菌，获得工程菌；
[0009]步骤S2.病原布点，培养工程菌以获得菌液；将菌液用布点溶液稀释后，对待洗消场所进行病原布点；
[0010]步骤S3.清洗消毒，通过洗消方案对病原布点后的场所进行清洗消毒；
[0011]步骤S4.可行性评估，洗消后，对病原布点处取样，进行蓝白斑筛选试验，评估洗消方案的可行性；当蓝白斑筛选试验结果为产生白色菌落，表明该洗消方案不能用于该场所病原布点处的清洗消毒；当蓝白斑筛选试验结果为未产生白色菌落，表明该洗消方案可以用于该场所病原布点处的清洗消毒。
[0012]在本申请公开的可行性评估方法中，所述步骤S1中，目的基因为一种或多种病原微生物的致病基因。
[0013]在本申请公开的可行性评估方法中，所述步骤S3中，所述洗消方案包括消毒方式和执行方式。
[0014]在本申请公开的可行性评估方法中，所述消毒方式包括物理消毒、化学消毒、生物消毒。
[0015]在本申请公开的可行性评估方法中，所述执行方式包括洗消操作方式、洗消顺序、洗消次数、洗消角度。
[0016]在本申请公开的可行性评估方法中，所述步骤S2中，培养工程菌以获得菌液的具体步骤为：
[0017]步骤S21.取复苏后的菌液，在含有抗生素的LB
‑
琼脂平板培养基上均匀涂开，平板倒置，置于37℃恒温箱中培养12h；
[0018]步骤S22.挑取平板上的单个菌落放入含抗生素的LB液体培养基中，于37℃，200rpm的摇床上，培养2h进行增菌；
附图说明
[0019]步骤S23.将增菌的菌液转移至含抗生素的LB液体培养基中，置于37℃，200rpm的摇床上，培养10～15h进行增菌，得到菌液。
[0020]在本申请公开的可行性评估方法中，所述步骤S2中，布点溶液为生理盐水、PBS、脱脂奶粉、血清、血浆、粪便、蛋白质、脂质中的一种或多种。
具体实施方式
[0021]在本申请公开的可行性评估方法中，所述步骤S2中，病原布点的方法为：对场所的多个位置进行病原布点，位置选择重点为人员接触区域；每个位置使用喷壶进行布点，布点面积大于0.5m2，所选位置根据五点分布法至少采集5个样。
[0022]在本申请公开的可行性评估方法中，所述步骤S4中，蓝白斑筛选试验的具体步骤为：
[0023]步骤S41.将抗生素溶液加入LB固体培养基中，倒平板；在x
‑
gal溶液中加入IPTG溶液，并在无菌条件下涂布于平板上，平板置于37℃培养箱中2～3h；
[0024]步骤S42.将20μL取样样本、20μL野生大肠杆菌、20μL工程菌在无菌条件下接种涂布于平板中，正面朝上放置30min，37℃倒置培养12～18h。
[0025]基于同样的专利技术构思，本申请还提供了一种洗消方案的选择方法，包括如下步骤：
[0026]步骤S1.选择上述可行性评估方法中评估为可行的洗消方案；
[0027]步骤S2.培养工程菌以获得菌液；将菌液用布点溶液稀释后，对待洗消场所进行病
原布点；
[0028]步骤S3.通过控制变量法，采用变量的洗消方案对病原布点后的场所进行清洗消毒；
[0029]步骤S4.洗消后，对病原布点处取样，进行蓝白斑筛选试验，选取蓝白斑筛选试验结果为未产生白色菌落的洗消方案，并根据洗消方案的成本、效率、安全性，选择最佳的洗消方案。
[0030]专利技术的有益效果是：
[0031](1)本申请构建了包含目的基因的工程菌，该工程菌比ASFV理化性质更稳定，且制备成本低廉，确保了田间应用的安全性，建立了科学的感染性评估标准。
[0032](2)本申请通过布点细菌，进行洗消方案的可行性评估和选择，其实验室技术要求较低，评估成本低，评估周期短，可用于频繁的田间评估工作，满足猪场快速成功复产的需求，并且由于细菌的稳定性远远高于病毒，通过细菌替代病毒进行洗消方案的选择，可提高畜牧养殖行业的洗消标准，大大缩短复产时间。
[0033](3)本申请在保证防控效果的基础上降低成本，同时精简生物安全防控流程，可筛选低廉有效的洗消方案，优化车辆、物资、人员等清洗消毒方案，重塑高效低成本的生物安全防控体系。
[0034]为了更清楚地说明本申请实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种洗消方案的可行性评估方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤S1. 构建工程菌，将目的基因插入载体构建重组质粒，再转入感受态细菌，获得工程菌；步骤S2. 病原布点，培养工程菌以获得菌液；将菌液用布点溶液稀释后，对待洗消场所进行病原布点；步骤S3. 清洗消毒，通过洗消方案对病原布点后的场所进行清洗消毒；步骤S4. 可行性评估，洗消后，对病原布点处取样，进行蓝白斑筛选试验，评估洗消方案的可行性；当蓝白斑筛选试验结果为产生白色菌落，表明该洗消方案不能用于该场所病原布点处的清洗消毒；当蓝白斑筛选试验结果为未产生白色菌落，表明该洗消方案可以用于该场所病原布点处的清洗消毒。2.根据权利要求1所述的洗消方案的可行性评估方法，其特征在于，所述步骤S1中，目的基因为一种或多种病原微生物的致病基因。3.根据权利要求1所述的洗消方案的可行性评估方法，其特征在于，所述步骤S3中，所述洗消方案包括消毒方式和执行方式。4.根据权利要求3所述的洗消方案的可行性评估方法，其特征在于，所述消毒方式包括物理消毒、化学消毒、生物消毒。5.根据权利要求3所述的洗消方案的可行性评估方法，其特征在于，所述执行方式包括洗消操作方式、洗消顺序、洗消次数、洗消角度。6.根据权利要求1所述的洗消方案的可行性评估方法，其特征在于，所述步骤S2中，培养工程菌以获得菌液的具体步骤为：步骤S21. 取复苏后的菌液，在含有抗生素的LB
‑
琼脂平板培养基上均匀涂开，平板倒置，置于37 ℃恒温箱中培养12h；步骤S22. 挑取平板上的单个菌落放入含抗生素的LB液体培养基中，于37 ℃，200 rpm的摇床上，培养2h进行增菌；步骤S23. 将增菌的菌液...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾南方，李晏，颜其贵，刘佳宇，程陈凯，唐娜娜，闵湘菱，宁茂，
申请(专利权)人：巨星农牧有限公司，
类型：发明
国别省市：