本发明专利技术涉及植物多肽的制备和应用领域，具体属于一种红芸豆抗炎活性肽制备方法和应用。具体制备方法是将红芸豆研磨破碎，采用热水浸提法得到红芸豆蛋白，将红芸豆蛋白溶液在合适PH和温度下，加入适量胃蛋白酶酶解，酶解完后沸水浴中灭酶，离心得到红芸豆酶解液，再利用10KD和3KD超滤离心管分离组分，冷冻干燥，得到不同组分红芸豆抗炎活性肽，再将不同组分红芸豆抗炎活性肽作用于RAW264.7细胞。不同组分的红芸豆抗炎活性肽可明显抑制LPS诱导的RAW264.7细胞的炎症反应，且低分子量的多肽抑制效果最强，可以在制备抗炎药物中应用。可以在制备抗炎药物中应用。可以在制备抗炎药物中应用。
【技术实现步骤摘要】
一种红芸豆抗炎活性肽的制备方法和应用
[0001]本专利技术涉及植物多肽的制备和应用领域，具体属于一种红芸豆抗炎活性肽的制备方法和应用。
技术介绍
[0002]红芸豆(Phaseolusvulgaris)，为豆科菜豆属草本植物，学名红菜豆。红芸豆含有丰富的钾、氨基酸、膳食纤维等，具有非常高的营养价值。在中医学中，红芸豆味甘平、性温，能温中下气、利肠胃、止呃逆、益肾补元气等。红芸豆的果壳、籽、根均可入药，有非常好的药用价值。现代医学研究表明，红芸豆是一种的高钾、高镁、低钠食品，尤其适合患有心脏病、动脉硬化、高血脂、低血钾症的患者食用。红芸豆含有尿毒酶、多种球蛋白及清蛋白等，能够提高人体免疫力，提高皮肤的新陈代谢，同时也具有减肥、降脂、利肠胃的作用。红芸豆中含有的皂苷能够缓解关节痛、神经痛，有明显的抗炎作用。
[0003]炎症是机体对外界刺激做出的防御反应，当炎症在一定时间内以规律的方式激活，它对机体是有益处的，但是当过度的炎症发生时，则会引起各种严重的疾病如心血管疾病、癌症、糖尿病等。
[0004]随着社会经济的发展，人民的生活水平也随之提高，逐渐从吃得饱变成吃得好，健康饮食也成为时代的主流。食源性抗炎肽由于其安全性高、易吸收等优点而成为研究热点。到目前为止，国内外对红芸豆抗炎肽的化学和药理研究不够系统和深入，并且国内外关于红芸豆抗炎活性肽的研究报道较少。
技术实现思路
[0005]针对上述问题本专利技术的目的在于提供一种红芸豆抗炎活性肽的制备方法，以及该活性肽在制备抗炎药物中的应用。<br/>[0006]为了达到上述目的，本专利技术采用了下列技术方案：
[0007]本专利技术提供一种红芸豆抗炎活性肽的制备方法，包括以下步骤：
[0008]步骤1，取红芸豆，研磨破碎，加入蒸馏水搅拌30min，然后加热至60℃浸泡2～4h，离心后取上清液，滤渣可重复提取1～2次，所得上清液冷冻干燥，得到红芸豆蛋白；
[0009]步骤2，取步骤1的红芸豆蛋白粉末加入蒸馏水溶解，得到混合液，并调整混合液的蛋白浓度，加入胃蛋白酶，进行酶解，反应结束后，酶解液置于沸水浴中反应，冷却至室温；4℃、4500r/min离心15min，收集上清液，冷冻干燥，得到红芸豆酶解产物；
[0010]步骤3，取步骤2中的红芸豆酶解产物粉末加蒸馏水溶解，采用超滤管离心进行分级分离，获得不同组分液体，冷冻干燥。
[0011]进一步，所述步骤1中红芸豆和蒸馏水的质量体积比为1:20～35。
[0012]优选的，所述步骤1中红芸豆和蒸馏水的质量体积比为1:30，然后加热至60℃浸泡3h。
[0013]更进一步，所述步骤2中加入胃蛋白酶1000U/g～4000U/g，在PH为2～3，温度为35
～45℃条件下进行酶解。
[0014]优选的，所述步骤2中加入胃蛋白酶2000U/g，在PH为2，温度为40℃条件下进行酶解。
[0015]进一步，所述步骤2中酶解时间为20～30min。
[0016]更进一步，所述步骤2中酶解液置于沸水浴中反应10～30min。
[0017]优选的，所述步骤2中酶解时间为30min，所述步骤2中酶解液置于沸水浴中反应15min。
[0018]更进一步，所述步骤3中超滤管截留分子量为10KD和3KD。
[0019]优选的，所述步骤3中超滤管截留分子量3KD
[0020]本专利技术还提供了上述制备方法制得的红芸豆抗炎活性肽在制备抗炎药物中的应用。
[0021]与现有技术相比本专利技术具有以下优点：
[0022]本专利技术获得的红芸豆抗炎活性肽经体外抗炎活性检测，该活性肽各组分对RAW264.7无明显毒副作用，可明显的抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO释放量，具有良好的抗炎活性，可以在制备抗炎药物中应用。
附图说明
[0023]图1红芸豆抗炎活性肽各组分对RAW264.7细胞活力的影响；
[0024]图2红芸豆抗炎活性肽对LPS诱导的RAW264.7细胞NO释放量的影响。图中*代表P<0.05，**代表P<0.01。
具体实施方式
[0025]下面结合本专利技术实施例和附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行具体、详细的说明。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术原理的前提下，还可以做出若干变型和改进，这些也应视为属于本专利技术的保护范围。
[0026]实施例1
[0027]红芸豆抗炎活性肽的制备，包括如下步骤：
[0028]第一步：取红芸豆4g，研磨机研磨破碎，加入120mL的蒸馏水，搅拌30min，60℃下浸泡3h，4℃，4500rpm离心20min后取上清液，滤渣可重复提取1～2次，将得到的上清液冷冻干燥，得到红芸豆蛋白。
[0029]第二步：取第一步得到的红芸豆蛋白粉末0.5g加入500mL蒸馏水，边加边搅拌，将其置于70℃水浴锅中加热搅拌，调整溶液PH为2，温度为40℃，加入2000U/g胃蛋白酶，酶解30min，置于沸水浴中加热10min，4℃，4500rpm离心15min，收集上清液，冷冻干燥，获得红芸豆酶解物。
[0030]第三步：将第二步中得到的红芸豆酶解液加入蒸馏水溶解，使用10KD和3KD的超滤离心管分级分离，收集各组分冷冻干燥。
[0031]实施例2
[0032]红芸豆抗炎活性肽的制备，包括如下步骤：
[0033]第一步：取红芸豆4g，研磨机研磨破碎，加入110mL的蒸馏水，搅拌30min，60℃下浸
泡3h，4℃，4500rpm离心20min后取上清液，滤渣可重复提取1～2次，将得到的上清液冷冻干燥，得到红芸豆蛋白。
[0034]第二步：取第一步得到的红芸豆蛋白粉末0.5g加入500mL蒸馏水，边加边搅拌，将其置于70℃水浴锅中加热搅拌，调整溶液PH为2，温度为45℃，加入2500U/g胃蛋白酶，酶解25min，置于沸水浴中加热15min，4℃，4500rpm离心15min，收集上清液，冷冻干燥，获得红芸豆酶解物。
[0035]第三步：将第二步中得到的红芸豆酶解液加入蒸馏水溶解，使用10KD和3KD的超滤离心管分级分离，收集各组分冷冻干燥。
[0036]实施例3
[0037]红芸豆抗炎活性肽的制备，包括如下步骤：
[0038]第一步：取红芸豆4g，研磨机研磨破碎，加入120mL的蒸馏水，搅拌30min，60℃下浸泡2h，4℃，4500rpm离心20min后取上清液，滤渣可重复提取1～2次，将得到的上清液冷冻干燥，得到红芸豆蛋白。
[0039]第二步：取第一步得到的红芸豆蛋白粉末0.5g加入500mL蒸馏水，边加边搅拌，将其置于70℃水浴锅中加热搅拌，调整溶液PH为3，温度为35℃，加入3000U/g胃蛋白酶，酶解20min，置于沸水浴中加热20min，4℃，4500rpm离心15min，收集上清液，冷冻干燥，获得红芸豆酶解物。本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种红芸豆抗炎活性肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，取红芸豆，研磨破碎，加入蒸馏水搅拌30min，然后加热至60℃浸泡2～4h，离心后取上清液，滤渣可重复提取1～2次，所得上清液冷冻干燥，得到红芸豆蛋白；步骤2，取步骤1的红芸豆蛋白粉末加入蒸馏水溶解，得到混合液，并调整混合液的蛋白浓度，加入胃蛋白酶，进行酶解，反应结束后，酶解液置于沸水浴中反应，冷却至室温；4℃、4500r/min离心15min，收集上清液，冷冻干燥，得到红芸豆酶解产物；步骤3，取步骤2中的红芸豆酶解产物粉末加蒸馏水溶解，采用超滤管离心进行分级分离，获得不同组分液体，冷冻干燥。2.根据权利要求1所述的一种红芸豆抗炎活性肽的制备方法，其特征在于，所述步骤1中红芸豆和蒸馏水的质量体积比为1:20～35。3.根据权利要求1所述的一种红芸豆抗炎活性肽的制备方法，其特征在于，所述步骤1中红芸豆和蒸馏水的质量体积比为1:30，然后加热至60℃浸泡3h。4.根据权利要求1所述的一种红芸豆抗炎活性肽的...
【专利技术属性】
技术研发人员：宋莉，闫力，付月君，
申请(专利权)人：山西大学，
类型：发明
国别省市：
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