一种磁珠法无醇核酸提取试剂盒及其提取方法技术

本发明专利技术提供一种基于磁珠法的无醇核酸提取试剂盒及其应用方法，该试剂盒包括裂解液、第一洗涤液、第二洗涤液、第三洗涤液和洗脱液，可用于病毒核酸提取，也可用于全血、细胞、唾液、组织等样本基因组提取，应用范围广。本发明专利技术还提供了采用上述试剂盒提取核酸的方法，首先将样本、磁珠和裂解液混合进行样本裂解液核酸释放的同时，实现磁珠的边捕获结合，然后通过无乙醇、异丙醇等醇类特定的洗涤液进行除蛋白、盐、小分子等杂质，最后将纯的核酸溶解于洗脱液中，用于下游检测。该方法操作简单，整个操作过程不需要使用乙醇、异丙醇等有机试剂。异丙醇等有机试剂。异丙醇等有机试剂。

【技术实现步骤摘要】
一种磁珠法无醇核酸提取试剂盒及其提取方法


[0001]本专利技术涉及医药生物
，尤其涉及一种磁珠法无醇核酸提取试剂盒及其提取方法。

技术介绍

[0002]在分子生物学实验中，核酸提取是一项最基本且最重要的环节，核酸提取的质量直接关系到下游核酸检测、生物学研究或其他新产品开发的成败。目前最常用的核酸提取方法是磁珠法和硅胶膜柱式法。硅胶膜柱式法提取获得的核酸纯度高，但是对小片段DNA或RNA提取效率不高，而且不适用于自动化提取流程。磁珠法核酸提取是以超顺磁性氧化硅纳米微球(简称磁珠)为载体，通过磁珠吸附核酸，经过磁性分离和漂洗杂质后，核酸从磁珠表面释放的原理进行核酸提取的方法。该方法不需离心，操作简单，便于高通量、自动化操作，可以使核酸提取效率显著升高，已成为目前新兴的核酸提取技术。
[0003]目前核酸提取的过程中最常用的促进磁珠和核酸结合的溶剂以及清洗液中多含有异丙醇和乙醇等易挥发有机溶剂，对于乙醇、异丙醇的使用存在如下问题：(1)醇残留抑制反应：乙醇、异丙醇等醇的残留，对下游检测的酶反应具有较大的抑制作用，从而影响检测结果的准确本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种磁珠法无醇核酸提取试剂盒，其特征在于，包括裂解液、第一洗涤液、第二洗涤液、第三洗涤液以及洗脱液；所述裂解液包括以下组分：异硫氰酸胍1～3mol/L、盐酸胍1～6mol/L、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐10～100mmol/L、醋酸钠0.5～2mol/L、月桂醇聚醚
‑
21 1～10％v/v、Tween20 0.5～5％v/v、PEG 1500 5～20％w/v；所述第一洗涤液包括以下组分：异硫氰酸胍1～4mol/L、Triton X
‑
100 0.5～2％v/v、PEG 1500 5～20％w/v；所述第二洗涤液包括以下组分：PEG 1500 5～30％w/v、氯化钠50
‑
500mmol/L、HEPES 10
‑
100mmol/L；所述第三洗涤液包括以下组分：三羟甲基氨基甲烷醋酸盐10～100mmol/L；所述洗脱液包括以下组分：三羟甲基氨基甲烷醋酸盐10～50mmol/L、EDTA 1～10mmol/L。2.基于权利要求1所述磁珠法无醇核酸提取试剂盒的核酸提取方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.一个对全血、血清、血浆、拭子保存液等样本中病毒进行裂解：在1.5ml或2ml离心管中加入200
‑
300μL的样本，再向离心管中加入500μL的裂解液、10
‑
30μL(50mg/ml)磁珠溶液、10
‑
30μL蛋白酶K(10mg/ml)溶液，置于恒温振荡混匀仪上，50
‑
65℃恒温振荡孵育5
‑
15min；S2.去蛋白洗涤步骤：将步骤S1的离心管放置于磁力架上，上下颠倒冲刷管盖和管壁残留磁珠，然后静置30～60秒至磁珠完全吸附，吸弃液体；将离心管从磁力架上取下，向离心管内加入600～800μL第一洗涤液，振荡混匀1～2min，将离心管放置于磁力架上，上下颠倒冲刷管盖和管壁残留磁珠，然后静置30～6...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋莲，孙小爱，翁国武，季昱，
申请(专利权)人：南京中科拜尔医学技术有限公司，
类型：发明
国别省市：