使用了酶解处理的活细胞分离系统技术方案

目的在于提供从来自生物体的组织中简便且稳定地分离各种活细胞的系统。通过提供用于从来自生物体的组织中分离活细胞的系统，从而解决了上述课题，所述系统具备：悬浮部，其基于参数向来自生物体的组织中添加蛋白质降解酶溶液并振荡，由此制作悬浮液；测定部，其取得与悬浮液有关的信息；和分析部，其根据由测定部取得的信息，确定活细胞的位置。确定活细胞的位置。确定活细胞的位置。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用了酶解处理的活细胞分离系统


[0001]本专利技术涉及使用了酶解处理的用于从来自生物体的组织中分离活细胞的系统。

技术介绍

[0002]近年来，为了修复损伤的组织等，进行了移植各种细胞的尝试。例如，为了修复因心绞痛、心肌梗塞等缺血性心脏病而损伤的心肌组织，尝试了利用胎儿心肌细胞、骨骼肌成肌细胞、间充质干细胞、心脏干细胞、ES细胞、iPS细胞等(非专利文献1)。
[0003]作为上述尝试的一环，开发了：利用支架而形成的细胞结构物；将细胞形成为片状而得的片状细胞培养物(非专利文献2)。
[0004]关于片状细胞培养物在治疗中的应用，进行了下述研究：培养表皮片在由烧伤等引起的皮肤损伤中的利用、角膜上皮片状细胞培养物在角膜损伤中的利用、口腔黏膜片状细胞培养物在食道癌的内镜下的切除中的利用等，其中一部分已进入临床应用的阶段。
[0005]这样的治疗中使用的骨骼肌成肌细胞通常从要移植的对象的骨骼肌组织中分离骨骼肌成肌细胞及肌卫星细胞等CD56阳性细胞而得到，作为使从骨骼肌组织分离的细胞中包含的CD56阳性细胞的比例提高的策略，例如，已知下述方法等：将骨骼肌组织在蛋白质降解酶溶液中浸渍规定的时间来进行酶处理，将得到的酶处理液废弃后，再次在蛋白质降解酶溶液中浸渍规定的时间来进行酶处理，将得到的酶处理液中包含的细胞回收(专利文献1)。
[0006]现有技术文献
[0007]专利文献
[0008]专利文献1：日本特开2007
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89442号公报
[0009]非专利文献1：Haraguchi等人，StemCells Transl Med.2012Feb；1(2):136
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41
[0010]非专利文献2：Sawa等人，Surg Today.2012Jan；42(2):181
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技术实现思路

[0011]专利技术所要解决的课题
[0012]如此，为了从来自生物体的组织中分离活细胞，设计了各种分离方法、分离条件。然而，构成各种生物体组织的细胞多种多样，其中干细胞、前体细胞在生物体组织中所占的比例低，很多存在于特殊的生态位(niche)中。例如，骨骼肌组织由肌纤维构成，肌纤维实质上是被质膜包围的多核细胞，但作为其前体细胞的骨骼肌成肌细胞等CD56阳性细胞仅局部存在于肌纤维的基底膜与质膜之间，因此为了从作为对象的骨骼肌组织中分离这些CD56阳性细胞，需要使肌纤维的基底膜的结合松弛，同时以不破坏CD56阳性细胞的程度将骨骼肌组织破碎。
[0013]迄今为止，CD56阳性细胞从骨骼肌组织的分离主要通过手工操作进行细切处理和酶解处理。通过酶解处理使骨骼肌成肌细胞分离的操作复杂且需要较长时间，另外，由于酶处理液中回收的细胞部分的辨别也依赖于操作者的熟练度，因此操作者之间的回收活细胞
数存在偏差。如此，尚未发现从各种来自生物体的组织中简便且稳定地分离各种活细胞的方法。
[0014]用于解决课题的手段
[0015]本申请的专利技术人为了解决上述的问题而进行了深入研究，结果发现，通过在酶解处理期间，取得与使来自生物体的组织悬浮于蛋白质降解酶溶液而得的悬浮液有关的信息，并在悬浮液中检测含有目标活细胞的区域与除此以外的区域的边界，从而能够从来自生物体的组织中稳定地分离活细胞。然后，基于这样的见解进一步反复进行研究，结果发现，能够机械地检测这些区域的边界，能够使全部操作或其一部分自动化，从而完成了本专利技术。
[0016]即本专利技术涉及以下的内容。
[0017][1]用于从来自生物体的组织中分离活细胞的系统，其具备：
[0018]悬浮部，其基于参数向来自生物体的组织中添加蛋白质降解酶溶液并振荡，由此制作悬浮液；
[0019]测定部，其取得与悬浮液有关的信息；和
[0020]分析部，其根据由测定部取得的信息，确定活细胞的位置。
[0021][2]如[1]所述的系统，其还具备学习部，所述学习部基于来自分析部的信息对参数的过与不足进行提取。
[0022][3]如[2]所述的系统，其包括利用细胞的沉降速度来进行基于学习部的参数的过与不足的提取。
[0023][4]如[2]或[3]所述的系统，其还具备更新部，所述更新部基于由学习部提取到的参数的过与不足来更新参数。
[0024][5]如[1]～[4]中任一项所述的系统，其还具备回收部，所述回收部基于来自分析部的信息，从悬浮液中回收含有活细胞的溶液。
[0025][6]如[5]所述的系统，其还具备：
[0026]第二测定部，其取得与所回收的含有活细胞的溶液有关的信息；以及
[0027]第二分析部，其根据由第二测定部取得的信息对活细胞的量进行评价。
[0028][7]如[6]所述的系统，其中，学习部基于来自第二分析部的信息，进一步对参数的过与不足进行提取。
[0029][8]如[1]～[7]中任一项所述的系统，其中，参数包含蛋白质降解酶溶液的添加量、振荡次数、振荡速度、及静置时间中的至少一者。
[0030][9]如[1]～[8]中任一项所述的系统，其中，与悬浮液有关的信息包含悬浮液的浊度。
[0031][10]如[6]～[9]中任一项所述的系统，其中，与所回收的含有活细胞的溶液有关的信息包含所回收的含有活细胞的溶液的浊度。
[0032][11]如[1]～[10]中任一项所述的系统，其中，活细胞为成肌细胞。
[0033]专利技术的效果
[0034]根据本专利技术的系统，能够在酶解处理时简便
·
可靠且自动地进行从来自生物体的组织中分离活细胞的操作，不仅能够消除操作者之间的回收活细胞数的偏差，而且能够大幅削减操作者的劳力。
附图说明
[0035][图1]图1示出本专利技术的系统的一个方式的流程图。
[0036][图2]图2示出本专利技术的系统的另一方式的流程图。
具体实施方式
[0037]本专利技术涉及用于从来自生物体的组织中分离活细胞的系统，其具备：悬浮部，其基于参数向来自生物体的组织中添加蛋白质降解酶溶液并悬浮，制作悬浮液；测定部，其取得与悬浮液有关的信息；分析部，其根据由测定部取得的信息来算出悬浮液的浊度，确定活细胞的位置。
[0038]本专利技术中，来自生物体的组织只要来自生物体即可，没有特别限定，例如为肌肉组织、脂肪组织、皮肤组织、软骨组织、肌腱组织、韧带组织、间柔组织(日文：間柔組織)、血管组织、脑组织、循环系统组织、消化系统组织、代谢系统组织、淋巴系统组织、骨髓组织、血液等，优选为肌肉组织、脂肪组织、骨髓组织、血液，进一步优选为骨骼肌组织。本专利技术中，来自生物体的组织可以为经历细切处理后的组织。
[0039]本专利技术中的活细胞可以包含从来自生物体的组织中分离而得的任意活细胞。可以非限定性地举出心肌细胞、成纤维细胞、上皮细胞、内皮细胞、肝细胞、胰腺细胞、肾细胞、肾上腺细胞、牙周膜细胞、牙龈细胞、骨膜细胞、皮肤细胞、滑膜细本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.用于从来自生物体的组织中分离活细胞的系统，其具备：悬浮部，其基于参数向来自生物体的组织中添加蛋白质降解酶溶液并振荡，由此制作悬浮液；测定部，其取得与悬浮液有关的信息；和分析部，其根据由测定部取得的信息，确定活细胞的位置。2.如权利要求1所述的系统，其还具备学习部，所述学习部基于来自分析部的信息来对参数的过与不足进行提取。3.如权利要求2所述的系统，其包括利用细胞的沉降速度来进行基于学习部的参数的过与不足的提取。4.如权利要求2或3所述的系统，其还具备更新部，所述更新部基于由学习部提取到的参数的过与不足来更新参数。5.如权利要求1～4中任一项所述的系统，其还具备回收部，所述回收部基于来自分析部的信息，从悬浮液中回收含有活细胞的溶液。6.如权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：野口枝莉，松村匡记，
申请(专利权)人：泰尔茂株式会社，
类型：发明
国别省市：