一种抗氧化胶原多肽、制备方法及其应用技术

本发明专利技术提供一种抗氧化胶原多肽、制作方法及其应用，所述胶原多肽的氨基酸序列为氨基酸序列为IDGRPGPIGPA或ISGPHypGPHypGPA。本发明专利技术的胶原多肽具有抗氧化活性，其能够与Keap1结合抑制Nrf2

【技术实现步骤摘要】
一种抗氧化胶原多肽、制备方法及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体而言，本专利技术涉及一种胶原多肽、制备方法及其应用。

技术介绍

[0002]氧化应激是由于细胞内自由基的产生与清除动态失衡所引起的病理性状态，导致细胞、组织和器官的功能紊乱，被认为是导致多种疾病发生的重要诱导因素之一。一些外界因素，如环境污染、饮食和生活方式不规律等均会导致机体内自由基的过度积累，从而造成氧化应激的发生。越来越多的研究表明，氧化应激会随着年龄的增加而逐渐增加，进一步导致了年龄性相关疾病的发生与恶化。
[0003]胶原肽是由胶原蛋白在适宜条件下水解得到的小分子活性物质，具有良好的生物活性，如抗癌、降血压、抗炎和促进矿物元素吸收等。此外，胶原肽还被发现具有良好的抗氧化活性，能够通过对不同类型的自由基良好的清除作用或通过促进机体内抗氧化酶活性的激活和非酶抗氧化剂水平的提升发挥抗氧化效果。研究表明，膳食性抗氧化剂的摄入有助于预防和缓解机体内的氧化应激，从而在一定程度上降低了氧化应激类疾病的发生。
[0004]在中国授权专利CN111334551B中，其公开了一种牛皮胶原蛋白肽的生产工艺，包括S1清理、S2变性、S3酶解、S4离心、S5灭酶、S6除杂、S7成品。本专利技术具有以下优点和效果：本申请采用超声波工艺、变性工艺和酶解工艺共同作用，可以方便适应于多种产地的牛皮；且本申请提供的工艺生产得到的胶原蛋白肽产品具有良好的溶解性和分散性，感官品质佳，收率高，产品中大量的活性多肽使其有着较强的抗氧化能力。然而，该产品中存在大量抗氧化能力较弱的成分，对DPPH自由基清除能力较弱，半抑制浓度在30 mg/mL以上，产品的总体抗氧化活性有限。
[0005]此外，在中国授权专利CN108250291B公开了一种抗氧化骨胶原多肽，其特征是：所述抗氧化骨胶原多肽的氨基酸序列为SSGPPVPGPMGPMGPR，所述抗氧化骨胶原多肽肽链含有两个蛋氨酸残基。然而，该授权专利只公开了该多肽具有抗氧化活性，而未公开其能够与Keap1结合抑制Nrf2
‑
Keap1蛋白相互作用。
[0006]因此，本专利技术的目的是提供一种能够与Keap1结合抑制Nrf2
‑
Keap1蛋白相互作用从而发挥抗氧化活性的小分子胶原多肽。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种能够与Keap1结合抑制Nrf2
‑
Keap1蛋白相互作用从而发挥抗氧化活性的小分子肽、制作工艺及其应用。为了实现本专利技术的目的，拟采用如下技术方案：本专利技术一方面涉及一种胶原多肽，所述胶原多肽的氨基酸序列为氨基酸序列为IDGRPGPIGPA或ISGPHypGPHypGPA，其中，Hyp为羟脯氨酸的缩写。
[0008]本专利技术还涉及一种食品，所述食品中含有上述胶原多肽。对于食品中上述胶原多
肽的用量没有特别的限定，例如，可以是0.5wt%
‑
5wt%之间。
[0009]本专利技术另一方面还涉及一种化妆品，所述化妆品中含有上述胶原多肽。对于化妆品中上述胶原多肽的用量没有特别的限定，例如，可以是0.1wt%
‑
5.0wt%之间。
[0010]本专利技术另一方面还涉及上述胶原多肽的制备方法，所述胶原多肽通过碱性
‑
木瓜蛋白酶对牛骨胶原进行酶解催化，酶解条件为：pH为7
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8，温度为55
‑
65℃，酶解时间为80
‑
160 min，底物浓度为20
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30% (w/v)，总酶用量为6000
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10000 U/g，碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶加酶比例为1:2
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4；对制备得到的胶原水解物通过离子层析色谱及反相高效液相色谱进行分离。
[0011]优选地，所述胶原多肽通过碱性
‑
木瓜蛋白酶对牛骨胶原进行酶解催化，酶解条件为：pH为7.7，温度为59.6℃，酶解时间为120 min，底物浓度为25% (w/v)，总酶用量为8396 U/g，碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶加酶比例为1:3。对制备得到的胶原水解物通过离子层析色谱及反相高效液相色谱进行分离。
[0012]需要说明的是，虽然可以通过海参制备本专利技术胶原多肽，但本专利技术的胶原多肽也可以通过固相合成法制备得到。
[0013]本专利技术另一方面还涉及上述胶原多肽的应用，所述胶原多肽用于制备抗氧化剂，或者用于制备具有抗氧化作用的化妆品。
[0014]本专利技术的有益技术效果在于：本专利技术公开了一种能够与Keap1结合抑制Nrf2
‑
Keap1蛋白相互作用的抗氧化胶原多肽（IDGRPGPIGPA亲和能力 =
ꢀ‑
9.1 kcal/mol，ISGPHypGPHypGPA亲和能力 =
ꢀ‑
9.2 kcal/mol）及其制备方法，通过碱性
‑
木瓜蛋白酶对牛骨胶原进行酶解催化，结合分离、鉴定及分子对接模拟以及化学合成得到能够与Keap1结合抑制Nrf2
‑
Keap1蛋白相互作用的抗氧化胶原多肽，可有效对氧化损伤细胞起到保护作用。本专利技术胶原多肽采用原料为牛骨胶原，具有来源广泛且蛋白质含量较高的优点。
附图说明
[0015]图1： 抗氧化胶原多肽对DPPH和ABTS自由基的清除能力；图2： 抗氧化胶原多肽对H2O2诱导氧化损伤细胞的保护效果。
具体实施方式
[0016]为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，并参照附图，对本专利技术作进一步的详细说明。
[0017]实施例1：制备胶原多肽本专利技术提供的制备方法如下：（1）牛骨胶原水解物的提取取脱脂脱钙的牛骨与去离子水进行混合，使底物浓度为25% (w/v)，体系pH调节为7.7，反应温度为59.6℃，酶解时间为120 min，总酶用量为8396 U/g，碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶加酶比例为1:3。酶解反应结束后，通过离心收集上清液，经过滤和冷冻干燥后得到牛骨胶原水解物。
[0018]（2）酶解产物的分离、纯化和鉴定
将牛骨胶原水解物用DEAE52纤维素阴离子层析色谱进行初步分离，采用含不同浓度（0、0.1、0.2、0.3、0.4和1.0 M）NaCl的缓冲液进行梯度洗脱，流速为1 mL/mim，在280 nm监测下收集同一峰下的分离液，透析脱盐处理。取最佳抗氧化活性组分，利用反相高效液相色谱进一部分离，选用C18色谱柱（10 mm
ꢀ×ꢀ
250 mm），检测波长为280 nm，进样量 50 μL，柱温30℃，流速为1.0 mL/min，流动相A为含0.05% TFA的超滤水，B为含0.05% TFA的乙腈。多肽洗脱程序为：前35 min，5
‑
55%流动相B；35
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40 min，55
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95%流动相B。收集并测定不同洗脱组分的抗氧化活性，取最佳抗本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种胶原多肽，所述胶原多肽的氨基酸序列为IDGRPGPIGPA或ISGPHypGPHypGPA。2.一种食品，所述食品中含有权利要求1所述的胶原多肽中的一种或者两种。3.根据权利要求2所述的食品，所述食品中上述胶原多肽的总用量介于0.5wt%
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5wt%之间。4.一种化妆品，所述化妆品中含有权利要求1所述的胶原多肽中的一种或者两种。5.根据权利要求4所述的化妆品，所述化妆品中上述胶原多肽的总用量介于0.1wt%
‑
5.0wt%之间。6.权利要求1所述的胶原多肽的制备方法，所述胶原多肽通过碱性
‑
木瓜蛋白酶对牛骨胶原进行酶解催化，酶解条...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄雅钦，张超，陈博，
申请(专利权)人：北京华达杰瑞生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：