ZDHHC21基因突变动物模型的构建方法及其应用技术

本发明专利技术提供了用于通过CRISPR

【技术实现步骤摘要】
ZDHHC21基因突变动物模型的构建方法及其应用


[0001]本专利技术涉及动物基因工程和基因遗传修饰领域，具体地说，涉及基于CRISPR/Cas9技术的ZDHHC21基因突变动物模型的构建方法及其应用。

技术介绍

[0002]阿尔茨海默病(Alzheimer
’
s disease，AD)是一种神经系统退行性疾病，是老年痴呆中最常见的一种类型，其临床表现以记忆障碍为主要特征，通常伴有失语、失用、失认、视空间技能损害、执行功能障碍以及人格和行为改变等表现；其典型病理特征是淀粉样蛋白沉积和神经原纤维缠结。AD疾病的致病机制尚不明确，并且尚无明显延缓或逆转疾病进程的干预和治疗手段。
[0003]动物模型是发病机制研究和新药研发的重要基础。目前，AD疾病的发病机制研究主要采用家族性AD致病基因突变转基因动物，例如，常用的单转基因动物模型Tg2576小鼠、多转基因动物模型APP/PS1小鼠、3
×
Tg小鼠、5
×
FAD小鼠等；这些动物模型所使用的APP、PSEN1基因突变来自家族性AD，这些基本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于通过CRISPR
‑
Cas9系统、特异性靶向ZDHHC21基因的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA对应的DNA序列如SEQ ID NO：1所示。2.一种用于构建ZDHHC21基因突变的细胞或动物模型的CRISPR
‑
Cas9基因打靶系统，其特征在于，所述CRISPR
‑
Cas9基因打靶系统包括如权利要求1所述的特异性靶向ZDHHC21基因的sgRNA、Cas9 mRNA和含有ZDHHC21突变位点的donor DNA序列。3.根据权利要求2所述的CRISPR
‑
Cas9基因打靶系统，其特征在于，所述ZDHHC21基因突变为导致ZDHHC21蛋白第209位氨基酸T
→
S的基因突变；优选地，所述ZDHHC21突变位点为第8号外显子中第4位核苷酸A
→
T的突变；进一步优选地，所述含有ZDHHC21突变位点的donor DNA序列如SEQ ID NO：2所示。4.一种利用CRISPR
‑
Cas9技术向ZDHHC21基因中引入目的突变的方法，其特征在于，所述方法使用如权利要求1所述的特异性靶向ZDHHC21基因的sgRNA，或者如权利要求2或3所述的CRISPR
‑
Cas9基因打靶系统。5.如权利要求1所述的特异性靶向ZDHHC21基因的sgRNA，或者如权利要求2或3所述的CRISPR
‑
Cas9基因打靶系统在制备ZDHHC21基因突变的细胞或动物模型中的应用；优选地，所述动物为小鼠，优选为C57BL/6J小鼠。6.一种构建ZDHHC21基因突变小鼠模型的方法，其特征在于，所述方法包括：(1)构建同源重组载体，所述同源重组载体中包含含有ZDHHC21突变位点的donor DNA序列；(2)将步骤1)所构建的同源重组载体与Cas9 mRNA、如权利要求1所述的sgRNA一起显微注射到小鼠受精卵中，然后将受精卵移植入假孕受体母鼠进行孕育，获得F0代ZDHHC21基因突变小鼠；(3)将F0代ZDHHC21基因突变小鼠与野生型小鼠杂交，获得F1代...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾建平，贾龙飞，魏一平，李欣悦，郭梦梦，李雯雯，王彦，庞亚娜，
申请(专利权)人：首都医科大学宣武医院，
类型：发明
国别省市：