一种胚胎体外培养液及其在提高胚胎耐热性方面的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种胚胎体外培养液及其在提高胚胎耐热性方面的应用，属于细胞培养技术、胚胎工程与发育生物学领域。其技术方案包括以常规培养液为基质，还包括橄榄苦苷和丹酚酸B；所述常规培养液选自CZB培养液或人工合成输卵管液；所述基质中的所述橄榄苦苷的含量为50

【技术实现步骤摘要】
一种胚胎体外培养液及其在提高胚胎耐热性方面的应用


[0001]本专利技术属于细胞培养技术、胚胎工程与发育生物学领域，尤其涉及一种胚胎体外培养液及其在提高胚胎耐热性方面的应用。

技术介绍

[0002]随着全球变暖，温度升高，高温对人类和动物的影响越专利技术显，夏季高温以及某些热性(使体温升高的)疾病，都会使动物产生热应激，导致孕畜胚胎死亡，使其繁殖力降低，甚至是不孕，给畜牧业生产造成很大损失。传统的培养液是模拟胚胎在输卵管发育时的离子环境配制的，在温度适宜的条件下进行胚胎体外培养，效果良好。但热应激条件下，用传统的培养液培养胚胎，其发育率会随着培养温度升高而显著降低，因为当温度升高时，培养液中的某些成分会发生变化，可能会影响胚胎的生长；另外，当培养的温度升高时，胚胎本身代谢会发生变化、对营养的需求也会增加，因此，传统的培养液不能满足高温时胚胎良好的发育。
[0003]胚胎正常的培养温度为：牛胚胎38
‑
39℃、小鼠胚胎37℃。在正常培养温度下牛胚胎发育至囊胚的百分率是16.88
±
5.41，孵出率是4.32
±
3.48；小鼠胚胎发育至囊胚的百分率是81.35
±
1.07，孵出率是61.88
±
0.72。目前，提高小鼠胚胎耐热性的培养液有TCZB，其优点是可以提高小鼠早期胚胎在41℃热应激条件下的发育率，用TCZB培养的胚胎，其囊胚发育率及孵出率(81.3
±
4.5和76.5
±
7.6)显著高于CZB组(80.2
±
5.4和73.4
±
6.2)，提高小鼠胚胎的热耐受性。
[0004]然而，TCZB并不能提高39℃培养小鼠胚胎发育至囊胚率及囊胚孵出率，此外，TCZB培养液需要利用原核表达法得到TAT蛋白和小鼠Hsp70的串联表达体—Tat
‑
Hsp70，此法技术要求高，操作复杂，且不易成功。

技术实现思路

[0005]针对现有技术存在的不足之处，本专利技术所要解决的技术问题是克服当温度升高时，使用传统的培养液培养胚胎，其发育率以及囊胚孵出率均会随温度升高而降低的缺陷，提出一种可有效提高胚胎耐热性的胚胎体外培养液及其在提高胚胎耐热性方面的应用。
[0006]为解决所述技术问题，本专利技术采用的技术方案为：
[0007]本专利技术一方面提供一种胚胎体外培养液，用于胚胎体外培养，以常规培养液为基质，还包括橄榄苦苷和丹酚酸B；所述常规培养液选自CZB培养液或人工合成输卵管液；所述基质中的所述橄榄苦苷的含量为50
‑
100μg/mL；所述基质中的所述丹酚酸B的含量为100
‑
300μg/mL。
[0008]优选的，所述基质中的所述橄榄苦苷的含量为100μg/mL；所述基质中的所述丹酚酸B的含量为300μg/mL。
[0009]优选的，所述胚胎体外培养液通过提高胚胎的抗氧化水平来提高胚胎的耐热性。
[0010]优选的，所述胚胎为小鼠胚胎或牛胚胎；当所述胚胎为小鼠胚胎时，所述常规培养
液选自CZB培养液；当所述胚胎为牛胚胎时，所述常规培养液选自人工合成输卵管液。
[0011]优选的，所述小鼠胚胎来自昆明系小鼠输卵管冲取的胚胎；所述牛胚胎由奶牛卵母细胞体外成熟培养、体外受精获得。
[0012]本专利技术另一方面还提供上述任一技术方案所述的胚胎体外培养液在提高胚胎耐热性方面的应用。
[0013]优选的，所述胚胎体外培养液通过提高胚胎的抗氧化水平来提升胚胎受热应激时的发育率和囊胚孵出率，从而提高胚胎的耐热性。
[0014]优选的，采用所述胚胎体外培养液对所述胚胎进行体外培养时，所述橄榄苦苷和所述丹酚酸B通过促进胚胎产生更多的SOD且减少MDA来提升胚胎受热应激时的发育率和囊胚孵出率，从而提高胚胎的耐热性。
[0015]优选的，当所述胚胎为小鼠胚胎时，包括以下步骤：
[0016]以CZB培养液为基础培养液，向基础培养液中添加橄榄苦苷和丹酚酸B，得到小鼠胚胎体外培养液，将上述小鼠胚胎体外培养液在培养皿中做60μl/滴的培养微滴，覆盖矿物油后置39℃含有5％CO2饱和湿度的培养箱平衡4h以上；获取小鼠胚胎，除去胚胎周围颗粒细胞后放入培养微滴中，在39℃含5％CO2的CO2培养箱中培养，在胚胎发育至4细胞时移入含有1％葡萄糖的培养液中，每24h换液一次，直至胚胎发育至囊胚期。
[0017]优选的，当所述胚胎为牛胚胎时，包括以下步骤：
[0018]以SOF培养液为基础培养液，向基础培养液中添加橄榄苦苷和丹酚酸B，得到牛胚胎体外培养液，于培养前2h，在培养皿中，用上述牛胚胎体外培养液做成60μL的培养微滴，覆盖矿物油后置41℃含有5％CO2饱和湿度的CO2培养箱中平衡，将体外受精获得的早期牛胚胎移入含有200μL培养液的1.5mL离心管中，震荡45s，去除颗粒细胞，再用牛胚胎体外培养液充分洗涤，之后进行培养，向每个培养微滴中移入25个早期胚胎，将培养皿置于41℃含5％CO2的CO2培养箱中培养，每隔48h半量更换牛胚胎体外培养液。
[0019]与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
[0020]本专利技术提供一种胚胎体外培养液，该胚胎体外培养液中添加的橄榄苦苷和丹酚酸B发挥协同作用，通过提高胚胎的抗氧化水平来大幅度提升胚胎受热应激时的发育率和囊胚孵出率，具有经济成本低、配制方法简单方便的特点。
附图说明
[0021]图1为本专利技术实施例所提供的小鼠囊胚氧化损伤指标变化图；
[0022]图2为本专利技术实施例所提供的另一小鼠囊胚氧化损伤指标变化图；
[0023]图3为本专利技术实施例所提供的牛囊胚氧化损伤指标变化图；
[0024]图4为本专利技术实施例所提供的另一牛囊胚氧化损伤指标变化图。
具体实施方式
[0025]下面将对本专利技术具体实施例中的技术方案进行详细、完整的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术总的技术方案的部分具体实施方式，而非全部的实施方式。基于本专利技术的总的构思，本领域普通技术人员所获得的所有其他实施例，都落于本专利技术保护的范围。
[0026]本专利技术一方面提供一种胚胎体外培养液，用于胚胎体外培养，以常规培养液为基
质，还包括橄榄苦苷和丹酚酸B；所述常规培养液选自CZB培养液或人工合成输卵管液；所述基质中的所述橄榄苦苷的含量为50
‑
100μg/mL；所述基质中的所述丹酚酸B的含量为100
‑
300μg/mL。在一优选实施例中，所述基质中的所述橄榄苦苷的含量为100μg/mL；所述基质中的所述丹酚酸B的含量为300μg/mL。所述胚胎体外培养液通过提高胚胎的抗氧化水平来提高胚胎的耐热性。需要说明的是，橄榄苦苷(oleuropein)是从天然橄榄油或橄榄叶中提取分离出来的一种裂环烯醚萜苷类苯酚化合物，具有多种药理活性(如抗氧化、降血糖、降血压、降本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种胚胎体外培养液，用于胚胎体外培养，以常规培养液为基质，其特征在于，还包括橄榄苦苷和丹酚酸B；所述常规培养液选自CZB培养液或人工合成输卵管液；所述基质中的所述橄榄苦苷的含量为50
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100μg/mL；所述基质中的所述丹酚酸B的含量为100
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300μg/mL。2.根据权利要求1所述的胚胎体外培养液，其特征在于，所述基质中的所述橄榄苦苷的含量为100μg/mL；所述基质中的所述丹酚酸B的含量为300μg/mL。3.根据权利要求1所述的胚胎体外培养液，其特征在于，所述胚胎体外培养液通过提高胚胎的抗氧化水平来提高胚胎的耐热性。4.根据权利要求3所述的胚胎体外培养液，其特征在于，所述胚胎为小鼠胚胎或牛胚胎；当所述胚胎为小鼠胚胎时，所述常规培养液选自CZB培养液；当所述胚胎为牛胚胎时，所述常规培养液选自人工合成输卵管液。5.根据权利要求4所述的胚胎体外培养液，其特征在于，所述小鼠胚胎来自昆明系小鼠输卵管冲取的胚胎；所述牛胚胎由奶牛卵母细胞体外成熟培养、体外受精获得。6.根据权利要求1
‑
5任一项所述的胚胎体外培养液在提高胚胎耐热性方面的应用。7.根据权利要求6所述的胚胎体外培养液在提高胚胎耐热性方面的应用，其特征在于，所述胚胎体外培养液通过提高胚胎的抗氧化水平来提升胚胎受热应激时的发育率和囊胚孵出率，从而提高胚胎的耐热性。8.根据权利要求7所述的胚胎体外培养液在提高胚胎耐热性方面的应用，其特征在于，采用所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：李华涛，戴光明，范冲，丰艳妮，付开强，刘锡武，高磊，曹荣峰，朱士勇，姜忠玲，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：