一种少孢节丛孢菌的遗传转化筛选体系的建立方法技术

本发明专利技术提供了一种少孢节丛孢菌的遗传转化筛选体系的建立方法，包括：筛选出NrsR对应的核苷酸序列；将所述NrsR的抗性基因的5

【技术实现步骤摘要】
一种少孢节丛孢菌的遗传转化筛选体系的建立方法


[0001]本专利技术属于微生物基因工程和生物
，特别涉及一种少孢节丛孢菌的遗传转化筛选体系的建立方法。

技术介绍

[0002]少孢节丛孢(Arthrobotrys oligospora)是具有世界分布性典型的捕食线虫真菌的模式种。该菌在普通环境中营腐生生活，当环境中存在线虫时，菌丝可特化形成粘性三维菌网(捕器)捕食线虫。该菌生长力强，在农业生防、环境保护及生物医药等领域展现出了强大的潜力。当前，基于丝状真菌的遗传操作多用潮霉素B抗性基因(hph)作为筛选标记，在具体实践中发现单一的筛选标记严重制约了丝状真菌遗传操作应用的广泛性。因此，建立一种新的筛选标记对于丝状真菌在基因工程中的应用意义重大。
[0003]诺尔斯菌素(Nourseothricin，缩写NrsR)，由诺尔斯氏链霉菌(Streptomyces noursei)代谢产生的一种广谱型抗生素，因结构上具链丝菌素(Streptothricin，STs)化学基团，故归属于此类抗生素亚家族。天然产物提取的诺尔斯菌素一般为ST
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种少孢节丛孢菌的遗传转化筛选体系的建立方法，其特征在于，所述方法包括：结合pFA6a
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natMX6载体图谱，筛选出NrsR抗性基因序列，所述NrsR抗性基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；将所述NrsR抗性基因的5
’
端加上启动子序列Ptef，3
’
端加上终止子序列Ttef，获得Ptef
‑
NrsR
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Ttef的DNA序列，所述Ptef
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NrsR
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Ttef的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；以少孢节丛孢菌基因组为模板，PCR扩增DNA序列5
’
UTR和3
’
UTR，将DNA序列5
’
UTR、Ptef
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NrsR
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Ttef和3
’
UTR序列连接至pUC19载体，获得目标DNA序列模板，所述目标DNA序列模板的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；将所述目标DNA序列模板导入少孢节丛孢菌中，在含有NrsR抗生素的培养基上进行筛选，得到转化子；采用特异性引物对所述转化子进行验证。2.根据权利要求1所述的一种少孢节丛孢菌的遗传转化筛选体系的建立方法，其特征在于，获得的所述目标DNA序列模板转化保存在E.coli DH5α中。3.根据权利要求1所述的一种少孢节丛孢菌的遗传转化筛选体系的建立方法，其特征在于，所述将所述目标DNA序列模板导入少孢节丛...

【专利技术属性】
技术研发人员：王芯，周亮，张克勤，何智伟，
申请(专利权)人：云南大学，
类型：发明
国别省市：