冠状病毒增殖方法技术

本发明专利技术提供一种使成为疫苗的材料的冠状病毒在宿主中高效地增殖的方法。一种在宿主中增殖冠状病毒的方法，其中，所述方法包括抑制宿主细胞的Bax向线粒体内膜转移的工序。宿主细胞的Bax向线粒体内膜转移的工序。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术实现思路

[0012]本专利技术涉及以下的1)～6)。
[0013]1)一种在宿主中增殖冠状病毒的方法，其中，所述方法包括抑制宿主细胞的Bax向线粒体内膜转移的工序。
[0014]2)一种冠状病毒颗粒的制备方法，其中，通过1)的方法使冠状病毒增殖，从宿主回收病毒颗粒。
[0015]3)一种冠状病毒疫苗的制造方法，其中，使用通过2)的方法制备的冠状病毒颗粒制造疫苗。
[0016]4)一种冠状病毒增殖促进剂，其中，以Bax抑制剂为有效成分。
[0017]5)Bax抑制剂在用于促进冠状病毒的增殖中的用途。
[0018]6)Bax抑制剂在用于制造冠状病毒增殖促进剂中的用途。
附图说明
[0019]图1显示Bax抑制肽的添加所产生的冠状病毒(HCoV
‑
OC43)增殖促进效果。
[0020]图2显示Bax抑制化合物的添加所产生的冠状病毒(HCoV
‑
OC43)增殖促进效果。
[0021]图3显示Bax抑制化合物的添加所产生的冠状病毒(SARS
‑
CoV
‑
2)增殖促进效果。
具体实施方式
[0022]本专利技术涉及一种使成为疫苗的材料的冠状病毒在宿主中更高效地增殖的方法。
[0023]本专利技术人等反复进行了深入研究，结果发现，在感染冠状病毒的宿主中，在抑制作为细胞凋亡促进蛋白质而已知的Bax向线粒体内膜转移从而抑制细胞凋亡的情况下，病毒的增殖性比稳定状态(感染病毒的对照)提高，病毒的产生量增加。
[0024]根据本专利技术的方法，能够高效地增殖冠状病毒，能够大量生产用于疫苗制备的冠状病毒。
[0025]在本专利技术中，作为冠状病毒，可以是α型、β型、γ型和δ型中的任意种基因型，但可以优选例示β型。作为β型冠状病毒，可以举出MERS冠状病毒(MERS
‑
CoV)、SARS冠状病毒(SARS
‑
CoV)、SARS冠状病毒
‑
2(SARS
‑
CoV
‑
2)、人冠状病毒OC43(HCoV
‑
OC43)、人冠状病毒HKU1(HCoV
‑
HKU1)。另外，作为α型冠状病毒，可以举出人冠状病毒229E(HCoV
‑
229)、人冠状病毒NL63(HCoV
‑
NL63)。
[0026]另外，成为对象的病毒株只要能够感染作为宿主的人即可，除此以外，只要是能够向作为灵长类、家畜、家禽、宠物饲养的动物感染的病毒株即可，没有特别限定，除了迄今为止进行过分离报告的冠状病毒以外，还包含将来分离
·
鉴定的亚型和序列的一部分突变的突变病毒株。
[0027]另外，本专利技术的冠状病毒可以是从感染动物或患者等感染个体分离的毒株，也可以是基因工程上由培养细胞树立的重组病毒。
[0028]在本专利技术中，“Bax”是指属于Bcl
‑
2家族的细胞凋亡促进蛋白质。属于Bcl
‑
2家族的蛋白质具有1个以上称为BH(Bcl
‑
2同源性)结构域的氨基酸序列。另外，由于在C末端侧具有疏水性高的TM(跨膜(transmembrane))区域，因此转移到线粒体膜上，能够控制细胞凋亡。
[0029]Bcl
‑
2家族蛋白质的主要功能是通过调节线粒体的透过性而进行的细胞凋亡的控
制。抗细胞凋亡蛋白质Bcl
‑
2和Bcl
‑
xL存在于线粒体的外壁上，抑制细胞色素c的释放。作为细胞凋亡促进蛋白质的Bad、Bid、Bax和Bim存在于细胞质中，通过细胞死亡信号向线粒体内膜移动，从而促进细胞色素c的释放。Bax与Ku70蛋白质结合而被向线粒体外膜附近诱导。Bid被胱天蛋白酶
‑
9(Caspase
‑
9)切断而成为激活体tBit(截短型bid(truncated Bid))，其与被向线粒体外膜附近诱导的Bax结合，由此诱导Bax向线粒体内膜的贯通。可以认为，向细胞外流出的细胞色素c与Apaf
‑
1形成复合体，使胱天蛋白酶9活性化，进而使胱天蛋白酶3、6、7活性化，由此引起细胞凋亡(Annu Rev Genet(2009)43:95
‑
118)。
[0030]在本专利技术中，“抑制Bax向线粒体内膜转移”是指抑制在从病毒感染释放的过程中在细胞内产生的信号传递引起的Bax的从细胞质向线粒体内膜转移。
[0031]作为抑制手段，只要能够抑制存在于宿主的细胞质中的Bax向线粒体内膜转移，就没有特别限定。例如可以举出：将与Bax相互作用、抑制Bax向线粒体转移的分子、或对促进Bax向线粒体转移的Bax以外的分子进行抑制的分子(称为“Bax抑制剂”)应用于该细胞；基因工程地降低存在于细胞质内的Bax等，但优选使用Bax抑制剂。即，在本专利技术中，Bax抑制剂被认为是用于通过宿主的培养使冠状病毒增殖的冠状病毒增殖促进剂，可以用于通过宿主的培养使冠状病毒增殖。另外，Bax抑制剂也可以在用于制造冠状病毒增殖促进剂中使用。
[0032]作为Bax抑制剂，优选可以举出抑制Bax向线粒体内膜转移所需的Ku70蛋白质与Bax的结合的肽或化合物，例如可以举出Biochem Biophys Res Commun(2004)321:961
‑
966)或Nat Cell Biol(2003)5:352
‑
357)中记载的肽。
[0033]具体而言，可以举出Val
‑
Pro
‑
Met
‑
Leu
‑
Lys(序列号1)、Pro
‑
Met
‑
Leu
‑
Lys
‑
Glu(序列号2)、Val
‑
Pro
‑
Thr
‑
Leu
‑
Lys(序列号3)、以及Val
‑
Pro
‑
Ala
‑
Leu
‑
Arg(序列号4)，但除此之外还可以举出Val
‑
Pro
‑
Ala
‑
Leu
‑
Lys(序列号5)、Pro
‑
Ala
‑
Leu
‑
Lys
‑
Asp(序列号6)、Val
‑
Ser
‑
Ala
‑
Leu
‑
Lys(序列号7)和Ser
‑
Ala
‑
Leu
‑
Lys
‑
Asp(序列号8)等。
[0034]该Bax抑制剂中的Bax抑制效果例如可以通本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种在宿主中增殖冠状病毒的方法，其中，所述方法包括抑制宿主细胞的Bax向线粒体内膜转移的工序。2.根据权利要求1所述的方法，其中，抑制Bax向线粒体内膜转移的工序是将Bax抑制剂添加至所述宿主中的工序。3.根据权利要求2所述的方法，其中，Bax抑制剂为选自由Val
‑
Pro
‑
Met
‑
Leu
‑
Lys(序列号1)、Pro
‑
Met
‑
Leu
‑
Lys
‑
Glu(序列号2)、Val
‑
Pro
‑
Thr
‑
Leu
‑
Lys(序列号3)、Val
‑
Pro
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Ala
‑
Leu
‑
Arg(序列号4)、Val
‑
Pro
‑
Ala
‑
Leu
‑
Lys(序列号5)、Pro
‑
Ala
‑
Leu
‑
Lys
‑
Asp(序列号6)、Val
‑
Ser
‑
Ala
‑
Leu
‑
Lys(序列号7)和Ser
‑
Ala
‑
Leu
‑
Lys
‑
Asp(序列号8)组成的肽组、以及由下述(a)～(s)表示的化合物组中的1种以上，
4.一种冠状病毒颗粒的制备方法，其中，通过权利要求1～3中任一项所述的方法使冠状病毒增殖，从培养上清液回收病毒颗粒。5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述病毒颗粒在用于预防起因于冠状病毒的疾病的疫苗制造中使用。6.如权利要求5所述的方法，其中，冠状病毒为MERS冠...

【专利技术属性】
技术研发人员：大西慎太郎，平间结衣，森卓也，
申请(专利权)人：花王株式会社，
类型：发明
国别省市：