增加环状DNA分子复制的方法技术

本发明专利技术涉及共价闭合的环状重组DNA分子，其包含复制起点和包含均聚区域的插入片段，其中均聚区域在复制方向上位于距离复制起点至少500bp处和/或其中包含均聚区域的插入片段被定向以使得插入片段的转录方向与复制起点的复制方向相同。本发明专利技术进一步涉及共价闭合的环状重组DNA分子在发酵过程中用于增加产量和/或缩短发酵时间的用途。和/或缩短发酵时间的用途。

【技术实现步骤摘要】
增加环状DNA分子复制的方法


[0001]本专利技术涉及共价闭合的环状重组DNA分子，其包含复制起点和包含均聚区域的插入片段，其中均聚区域在复制方向上位于与复制起点至少500bp的距离处和/或其中包含均聚区域的插入片段被定向为使得插入片段的转录方向与复制起点的复制方向相同。本专利技术还涉及共价闭合的环状重组DNA分子用于在发酵过程中增加产量和/或缩短发酵时间的用途。

技术介绍

[0002]在基因治疗和许多其它治疗相关的生物化学和生物技术应用中，用于治疗和诊断目的的核酸的使用是非常重要的。例如，近年来在基因治疗领域出现了快速的发展，并取得了有希望的成果。因此，核酸被认为是用于基因治疗和针对感染性和恶性疾病预防性和治疗性疫苗的重要工具。例如，将从肿瘤细胞扩增的信使RNA转染到树突细胞中以诱导肿瘤免疫(Boczkowski等人(2000)Cancer Research 60,1028
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1034)。
[0003]治疗性核糖核酸(RNA)分子代表着一类有希望的药物。基于RNA的治疗剂包括编码用作疫苗的抗原的mRNA分子(Fot本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种发酵生产共价闭合的重组DNA分子的方法，包括以下步骤：(a)提供包含共价闭合的环状重组DNA分子的细菌，其中所述共价闭合的环状重组DNA分子包含：
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复制起点，其中所述复制起点是细菌来源的并且所述复制起点是高拷贝数起点，
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编码选择标记物的序列，其中所述序列是卡那霉素抗性基因或者所述选择标记物是蔗糖选择性标记物，
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DNA依赖性RNA聚合酶的启动子，其中所述启动子是噬菌体启动子，
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包含均聚区域的插入片段，其中所述均聚区域在复制方向上位于与所述复制起点至少500bp的距离处，其中所述均聚区域包含至少40个相同核苷酸的序列；和(b)使步骤(a)的所述细菌发酵。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述均聚区域包含至少一个多聚(A)序列。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述包含均聚区域的插入片段被定向为使得所述插入片段的转录方向与所述复制起点的所述复制方向相同。4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述共价闭合的环状重组DNA分子选自由质粒、粘粒、细菌人工染色体(BAC)、噬菌体、病毒载体或其杂交体组成的组。5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述共价闭合的环状重组DNA分子是质粒。6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述复制起点来源于pBR322质粒、pUC质粒、pMB1质粒、ColE1质粒、R6K质粒、p15A质粒、pSC101质粒或F...

【专利技术属性】
技术研发人员：吉姆，
申请(专利权)人：库瑞瓦格制造业有限公司，
类型：发明
国别省市：