粘性生物样本液化保存组合产品制造技术

本发明专利技术涉及生物样本处理技术领域，具体而言，涉及一种粘性生物样本处理组合产品。该组合产品包含液化组分和保存组分：所述液化组分包括愈创甘油醚和强碱；所述保存组分为包括以下组分的组合物：a)缓冲组分，用于中和所述强碱使保存体系的pH为6～8；b)渗透压调节组分；c)海藻糖、甘露醇以及甘油中的至少一种。本发明专利技术能够快速将粘性生物样本进行液化，使样本的粘稠度下降，使得后续操作易于进行，还可以在室温下即可进行，对操作条件要求不苛刻，不影响后续核酸检测，可兼容免提取扩增体系，对液化后的生物样本能够进行长期有效保存。化后的生物样本能够进行长期有效保存。化后的生物样本能够进行长期有效保存。

【技术实现步骤摘要】
粘性生物样本液化保存组合产品


[0001]本专利技术涉及生物样本处理
，具体而言，涉及一种粘性生物样本处理组合产品，特别涉及一种粘性生物样本液化保存组合产品。

技术介绍

[0002]随着荧光定量PCR以及多重PCR等技术在病原体检测领域的快速发展，通过痰液样本类型检测是否感染相应的病原体种类的需求日益增加。然而痰液样本具有粘度大、蛋白多、成分复杂的特点，包含粘蛋白和其他多种蛋白(如免疫蛋白)、多种酶类、脱落细胞、微生物及其他吸入杂质等，不便于直接检测，临床上痰液样本的检测需要先对痰液进行液化处理。
[0003]常见的痰液液化方法为氢氧化钠法、DTT(二硫苏糖醇)法以及蛋白酶法。氢氧化钠法是最常用的痰液液化方法，该方法比较简单，利用主成分为一定浓度的氢氧化钠溶液在60℃～80℃(也可在室温条件下)液化痰液，该方法用于核酸检测时其强碱性环境易造成核酸损失。蛋白酶法的原理是利用蛋白酶消化痰液黏蛋白，该方法的酶解反应耗时较长，所需蛋白酶成本较高，且黏蛋白消化效率低。DTT(二硫苏糖醇)法是目前最常用的痰液液化方法，利用含巯基(
‑
SH)的DTT(二硫苏糖醇)断裂痰液中导致粘稠的主要成分粘蛋白，以PBS缓冲液(磷酸盐缓冲液)提供生理缓冲，通常还会加入乙醇等固定细胞。该方法耗时长，且使用的DTT(二硫苏糖醇)成本较高，且DTT稳定性差，需要在低温条件下保存，同时DTT存在一定的毒性，不适合临床上大批量处理痰液样本。此外，由于痰液样本粘度大，常规液化处理过程中易产生混合不均的问题。痰液样本中的核酸(尤其是RNA)极不稳定，通常在温室条件下数小时就被降解。然而在临床检测中，往往不能及时处理和检测痰液样本中的核酸，因此专利技术一种能够快速充分液化痰液同时有效保护样本核酸的方法十分必要。
[0004]目前已公开的关于痰液液化及核酸保护的专利技术较多。然而，这些方法普遍存在成分复杂、成本高、操作复杂、样本混匀及液化不充分等问题，且液化后的样本如何进行有效保存，也是本领域的一个需要解决的问题。
[0005]有鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0006]本专利技术的一个目的在于提供一种粘性生物样本液化保存组合产品，其包括液化组分和保存组分：
[0007]所述液化组分包括愈创甘油醚和强碱；
[0008]所述保存组分包括以下组分：
[0009]a)缓冲组分，用于中和所述强碱使保存体系的pH为6～8；
[0010]b)渗透压调节组分；和
[0011]c)海藻糖、甘露醇以及甘油中的至少一种。
[0012]本专利技术的再一目的在于提供一种试剂盒，其包括如上所述的组合产品。
[0013]本专利技术的再一目的在于提供一种粘性生物样本液化保存方法，包括如下步骤：
[0014]i)将粘性生物样本与如上所述的液化组分混合得到第一混合物；
[0015]ii)孵育所述第一混合物得到第二混合物；
[0016]iii)将所述第二混合物与如上所述的保存组分混合。
[0017]本专利技术的再一目的在于提供一种粘性生物样本中核酸的释放方法，包括如下步骤：
[0018]使用如上所述的方法将所述粘性生物样本液化并保存；
[0019]使用核酸释放剂释放所述粘性生物样本中的核酸。
[0020]本专利技术的再一目的在于提供一种粘性生物样本中核酸的提取方法，包括如下步骤：
[0021]使用如上所述的方法释放所述粘性生物样本中的核酸；
[0022]使用核酸提取剂提取释放的核酸。
[0023]本专利技术的再一目的在于提供一种粘性生物样本中核酸的扩增方法，包括如下步骤：
[0024]使用如上所述的方法释放所述粘性生物样本中的核酸；
[0025]任选地使用核酸提取剂提取释放的核酸；
[0026]使用核酸扩增剂扩增核酸。
[0027]本专利技术的再一目的在于提供一种粘性生物样本中核酸的检测方法，包括如下步骤：
[0028]使用如上所述的方法释放所述粘性生物样本中的核酸；
[0029]任选地使用核酸提取剂提取释放的核酸；
[0030]任选地使用核酸扩增剂扩增核酸；
[0031]使用核酸检测剂检测核酸。
[0032]本专利技术能够快速将粘性生物样本进行液化，使样本的粘稠度下降，使得后续操作易于进行，且在室温下即可进行，对操作条件要求不苛刻，对后续核酸检测不产生不利影响，对液化后的生物样本能够进行长期有效保存。
[0033]本专利技术提供的粘性生物样本液化保存组合产品还具有较好的兼容性，对后续核酸检测无不利影响，因此，能够兼容免提取扩增体系，可以在无需核酸纯化操作的情况下直接进行后续的核酸扩增、检测等操作。
附图说明
[0034]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0035]图1为本专利技术一个实施例中各组对人基因组快速检测所得扩增曲线；A为实验组；B为蛋白酶法；C为氢氧化钠法；D为DTT法；E为乙酰半胱氨酸法；
[0036]图2为本专利技术一个实施例中各组对呼吸道合胞病毒检测所得扩增曲线；A为实验组；B为蛋白酶法；C为氢氧化钠法；D为DTT法；E为乙酰半胱氨酸法；
[0037]图3为本专利技术一个实施例中对免提取扩增体系(引入扩增提取的核酸未纯化)的影响验证；A为1号样本基质影响测试扩增曲线结果；B为2号样本基质影响测试扩增曲线结果；
[0038]图4为本专利技术一个实施例中试剂液化后的样本稳定性测试结果；A为实验组RNA稳定性曲线；B为实验组DNA稳定性曲线；C为对照组RNA稳定性曲线；D为对照组DNA稳定性曲线；
[0039]图5为本专利技术一个实施例中经过保存后对呼吸道病毒的检测结果；A为1号样本，采用本申请所提供的示例保存组分进行保存；B为1号样本，采用商业保存液进行保存；C为2号样本，采用本申请所提供的示例保存组分进行保存；D为2号样本，采用商业保存液进行保存；
[0040]图6为本专利技术一个实施例中经过保存后对淋球菌的检测结果；A为1号样本，采用本申请所提供的示例保存组分进行保存；B为1号样本，采用商业保存液进行保存；C为2号样本，采用本申请所提供的示例保存组分进行保存；D为2号样本，采用商业保存液进行保存；
[0041]图7为本专利技术一个实施例中经过保存后对细胞样本的检测结果；A为1号样本，采用本申请所提供的示例保存组分进行保存；B为1号样本，采用商业保存液进行保存；C为2号样本，采用本申请所提供的示例保存组分进行保存；D为2号样本，采用商业保存液进行保存。
具体实施方式
[0042]现将详细地提供本专利技术实施方式的参考，其一个或多个实例描述于下文。提供每一实例作为解释而非限制本专利技术。实际上，对本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.粘性生物样本液化保存组合产品，其包括液化组分和保存组分：所述液化组分包括愈创甘油醚和强碱；所述保存组分包括以下组分：a)缓冲组分，用于中和所述强碱使保存体系的pH为6～8；b)渗透压调节组分；和c)海藻糖、甘露醇以及甘油中的至少一种。2.根据权利要求1所述的组合产品，其特征在于，所述缓冲组分为1mmol/L～5mmol/L的柠檬酸。3.根据权利要求1所述的组合产品，其特征在于，所述渗透压调节组分包括甜菜碱和/或无机阳离子，所述无机阳离子优选Na
+
以及K
+
中的至少一种。4.根据权利要求3所述的组合产品，其特征在于，所述渗透压调节组分包括0.1％～1.2％(m/v)氯化钠和0.1％～1.2％(m/v)氯化钾。5.根据权利要求1所述的组合产品，其特征在于，所述保存组分还包括一种或多种氨基酸，优选所述氨基酸在所述保存组分中的总浓度为1mol/L～3mol/L。6.根据权利要求5所述的组合产品，其特征在于，所述保存组分中包括0.8mol/L～1mol/L甘氨酸和0.6mol/L～1mol/L异亮氨酸。7.根据权利要求1所述的组合产品，其特征在于，所述海藻糖在所述保存组分中的浓度为0.5mol/L～1mol/L，和/或；所述甘露醇在所述保存组分中的浓度为1.5％～4.5％(m/v)；和/或，所述甘油在所述保存组分中的浓度为2％～10％(v/v)。8.根据权利要求1所述的组合产品，其特征在于，所述保存组分中还含有尿素，优选所述尿素在所述保存组分中的浓度为1％～3％(m/v)。9.根据权利要求1～8任一项所述的组合产品，其特征在于，所述液化组分还包括刚性微颗粒。10.根据权利要求1～8任一项所述的组合产品，其特征在于，所述强碱为氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂、氢氧化钙、氢氧化钡、胆碱中至少一种。11.试剂盒，其包括权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈诗谣，邓中平，邓勇，刘佳，戴立忠，
申请(专利权)人：圣湘生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：