一种基于双链聚合策略的固相纳米孔特征信号生成方法技术

本发明专利技术提供了一种基于双链聚合策略的固相纳米孔特征信号生成方法，属于纳米孔分析技术领域。本发明专利技术提供的基于双链聚合策略的固相纳米孔特征信号生成方法，是将一种或多种两侧带有粘性末端的DNA双链体作为聚合的单体模板，利用聚合探针，使两侧具有粘性末端的双链扩增产物间发生嵌段聚合，所得聚合产物通过固相孔产生电流或时间维度所对应的特征信号。本发明专利技术的方法可以利用阻断引物进行扩增产生单体模板，聚合探针引发聚合反应从而输出特征信号的方法，序列可编程性强、成本低廉、兼具扩增放大的能力。放大的能力。放大的能力。

【技术实现步骤摘要】
一种基于双链聚合策略的固相纳米孔特征信号生成方法


[0001]本专利技术属于纳米孔分析
，具体涉及一种基于双链聚合策略的固相纳米孔特征信号生成方法。

技术介绍

[0002]纳米孔分析平台是一种新型的分析手段，其原理是通过在一个纳米尺度的孔两端施加电场力，推动带电粒子在电场作用下定向移动，当待测物通过孔时会产生体积排阻使得孔间电流瞬间发生改变，根据电流改变判断样品情况。纳米孔技术最早源于库尔特(Coulter)计数器及单通道电流记录技术。生理与医学诺贝尔奖获得者Neher和Sakamann在1976年利用膜片钳技术测量膜电势，研究膜蛋白及离子通道，推动了纳米孔测序技术的实际应用进程。真正推动纳米孔分析技术飞跃式迈进是在1996年时Kasianowicz等提出了利用α
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溶血素对DNA测序的新设想，这是生物纳米孔单分子测序的里程碑标志。随后，MspA孔蛋白、噬菌体Phi29连接器等生物纳米孔的研究报道，使得生物纳米孔向实用化迈进，极大的推动了纳米孔分析技术的研究。随着微机工技术的发展，Li等在2001年开启了固相纳米孔研究的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于双链聚合策略的固相纳米孔特征信号生成方法，其特征在于，包括以下步骤：将一种或多种两侧带有粘性末端的DNA双链体作为聚合的单体模板，利用聚合探针，使两侧具有粘性末端的双链扩增产物间发生嵌段聚合，所得聚合产物通过固相孔产生电流或时间维度所对应的特征信号。2.一种基于双链聚合策略的固相纳米孔特征信号生成方法，其特征在于，包括以下步骤：通过设计扩增阻断引物对模板链进行扩增，得到一系列两侧带有粘性末端的双链扩增产物；将所得的一种或多种两侧带有粘性末端的双链扩增产物作为聚合的单体模板，利用聚合探针，使两侧具有粘性末端的双链扩增产物间发生嵌段聚合，所得聚合产物通过固相孔产生电流或时间维度所对应的特征信号。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：通过一种或多种阻断引物对PCR模板链进行扩增，得到一系列两侧具有粘性末端的PCR产物；将所得的一种或多种两侧具有粘性末端的PCR产物作为聚合的单体模板，利用聚合探针，使两侧具有粘性末端的PCR产物间发生嵌段聚合，所得聚合产物通过固相孔产生电流或时间维度所对应的特征信号。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述模板链为质粒或者单链病毒。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述质粒为Zikv
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trigger
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27B质粒，其序列如下：TTCTCATGTTTGACAGCTTATCATCGATAAGCTTTAATGCGGTAGTTTATCACAGTTAAATTGCTAACGCAGTCAGGCACCGTGTATGAAATCTAACAATGCGCTCATCGTCATCCTCGGCACCGTCACCCTGGATGCTGTAGGCATAGGCTTGGTTATGCCGGTACTGCCGGGCCTCTTGCGGGATATCCGGATATAGTTCCTCCTTTCAGCAAAAAACCCCTCAAGACCCGTTTAGAGGCCCCAAGGGGTTATGCTACCTGTCCTCGGTTCACAATCAAGTCCTAGGCTTCCAAACCCCCCCAGGGTGGCTTCGGCTCTTGGTGAATTGGGCGTTATCTCAACTTTCGCTCTATTCTCATCAGTTTCATGTCCTGTGTCATTAACGATCATCCCACTGTGCTGGCCCTATAGTGAGTCGTATTAGCGCAACGAAAGCCAGATAGCCCGTACACGTTCGAGATCTCGATCCTCTACGCCGGACGCATCGTGGCCGGCATCACCGGCGCCACAGGTGCGGTTGCTGGCGCCTATATCGCCGACATCACCGATGGGGAAGATCGGGCTCGCCACTTCGGGCTCATGAGCGCTTGTTTCGGCGTGGGTATGGTGGCAGGCCCCGTGGCCGGGGGACTGTTGGGCGCCATCTCCTTGCATGCACCATTCCTTGCGGCGGCGGTGCTCAACGGCCTCAACCTACTACTGGGCTGCTTCCTAATGCAGGAGTCGCATAAGGGAGAGCGTCGAGATCCCGGACACCATCGAATGGCGCAAAACCTTTCGCGGTATGGCATGATAGCGCCCGGAAGAGAGTCAATTCAGGGTGGTGAATGTGAAACCAGTAACGTTATACGATGTCGCAGAGTATGCCGGTGTCTCTTATCAGACCGTTTCCCGCGTGGTGAACCAGGCCAGCCACGTTTCTGCGAAAACGCGGGAAAAAGTGGAAGCGGCGATGGCGGAGCTGAATTACATTCCCAACCGCGTGGCACAACAACTGGCGGGCAAACAGTCGTTGCTGATTGGCGTTGCCACCTCCAGTCTGGCCCTGCACGCGCCGTCGCAAATTGTCGCGGCGATTAAATCTCGCGCCGATCAACTGGGTGCCAGCGTGGTGGTGTCGATGGTAGAACGAAGCGGCGTCGAAGCCTGTAAAGCGGCGGTGCACAATCTTCTCGCGCAACGCGTCAGTGGGCTGATCATTAACTATCCGCTGGATGACCAGGATGCCATTGCTGTGGAAGCTGCCTGCACTAATGTTCCGGCGTTATTTCTTGATGTCTCTGACCAGACACCCATCAACAGTATTATTTTCTCCCATGAAGACGGTACGCGACTGGGCGTGGAGCATCTGGTCGCATTGG
GTCACCAGCAAATCGCGCTGTTAGCGGGCCCATTAAGTTCTGTCTCGGCGCGTCTGCGTCTGGCTGGCTGGCATAAATATCTCACTCGCAATCAAATTCAGCCGATAGCGGAACGGGAAGGCGACTGGAGTGCCATGTCCGGTTTTCAACAAACCATGCAAATGCTGAATGAGGGCATCGTTCCCACTGCGATGCTGGTTGCCAACGATCAGATGGCGCTGGGCGCAATGCGCGCCATTACCGAGTCCGGGCTGCGCGTTGGTGCGGATATCTCGGTAGTGGGATACGACGATACCGAAGACAGCTCATGTTATATCCCGCCGTTAACCACCATCAAACAGGATTTTCGCCTGCTGGGGCAAACCAGCGTGGACCGCTTGCTGCAACTCTCTCAGGGCCAGGCGGTGAAGGGCAATCAGCTGTTGCCCGTCTCACTGGTGAAAAGAAAAACCACCCTGGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTAAGTTAGCTCACTCATTAGGCACCGGGATCTCGACCGATGCCCTTGAGAGCCTTCAACCCAGTCAGCTCCTTCCGGTGGGCGCGGGGCATGACTATCGTCGCCGCACTTATGACTGTCTTCTTTATCATGCAACTCGTAGGACAGGTGCCGGCAGCGCTCTGGGTCATTTTCGGCGAGGACCGCTTTCGCTGGAGCGCGACGATGATCGGCCTGTCGCTTGCGGTATTCGGAATCTTGCACGCCCTCGCTCAAGCCTTCGTCACTGGTCCCGCCACCAAACGTTTCGGCGAGAAGCAGGCCATTATCGCCGGCATGGCGGCCGACGCGCTGGGCTACGTCTTGCTGGCGTTCGCGACGCGAGGCTGGATGGCCTTCCCCATTATGATTCTTCTCGCTTCCGGCGGCATCGGGATGCCCGCGTTGCAGGCCATGCTGTCCAGGCAGGTAGATGACGACCATCAGGGACAGCTTCAAGGATCGCTCGCGGCTCTTACCAGCCTAACTTCGATCACTGGACCGCTGATCGTCACGGCGATTTATGCCGCCTCGGCGAGCACATGGAACGGGTTGGCATGGATTGTAGGCGCCGCCCTATACCTTGTCTGCCTCCCCGCGTTGCGTCGCGGTGCATGGAGCCGGGCCACCTCGACCTGAATGGAAGCCGGCGGCACCTCGCTAACGGATTCACCACTCCAAGAATTGGAGCCAATCAATTCTTGCGGAGAACTGTGAATGCGCAAACCAACCCTTGGCAGAACATATCCATCGCGTCCGCCATCTCCAGCAGCCGCACGCGGCGCATCTCGGGCAGCGTTGGGTCCTGGCCACGGGTGCGCATGATCGTGCTCCTGTCGTTGAGGACCCGGCTAGGCTGGCGGGGTTGCCTTACTGGTTAGCAGAATGAATCACCGATACGCGAGCGAACGTGAAGCGACTGCTGCTGCAAAACGTCTGCGACCTGAGCAACAACATGAATGGTCTTCGGTTTCCGTGTTTCGTAAAGTCTGGAAACGCGGAAGTCAGCGCCCTGCACCATTATGTTCCGGATCTGCATCGCAGGATGCTGCTGGCTACCCTGTGGAACACCTACATCTGTATTAACGAAGCGCTGGCATTGACCCTGAGTGATTTTTCTCTGGTCCCGCCGCATCCATACCGCCAGTTGTTTACCCTCACAACGTTCCAGTAACCGGGCATGTTCATCATCAGTAACCCGTATCGTGAGCATCCTCTCTCGTTTCATCGGTATCATTACCCCCATGAACAGAAATCCCCCTTACACGGAGGCATCAGTGACCAAACAGGAAAAAACCGCCCTTAACATGGCCCGCTTTATCAGAAGCCAGACATTAACGCTTCTGGAG...

【专利技术属性】
技术研发人员：李冰凌，吴瑞萍，王华宁，王叶盛，
申请(专利权)人：中国科学院长春应用化学研究所，
类型：发明
国别省市：