一种检测CYP4V2酶活性的方法技术

本发明专利技术公开了一种检测CYP4V2酶活性的方法，涉及生物检测技术领域。其包括如下步骤：以月桂酸为反应底物，在CYP4V2酶作用下反应后检测12羟月桂酸的生成量来测定CYP4V2酶的活性，反应的体系中包括辅因子NADPH。以月桂酸为底物进行反应，可以通过简单的操作实现CYP4V2酶活性的准确测定，且该方法重现性好、精密度高，可以满足日常的痕量检测需求，对于底物的浓度范围限制少。月桂酸作为底物具有其他底物无法比拟的可推广性、与CYP4A酶亲和力高、成本低的优势。优势。优势。

【技术实现步骤摘要】
一种检测CYP4V2酶活性的方法


[0001]本专利技术涉及生物检测
，具体而言，涉及一种检测CYP4V2酶活性的方法。

技术介绍

[0002]结晶样视网膜变性(Bietti crystalline corneoretinal dystrophy,BCD)是一种严重的致盲性视网膜疾病，呈常染色体隐性遗传，其典型的临床特点为视网膜和角膜上有黄白色结晶样脂质代谢物沉积，视网膜素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)及脉络膜的进行性变性和萎缩。临床表现有视力下降，夜间视力差，视野丧失，视网膜电图异常。随着病情的进展，患者视力严重下降及视野缩小最终到法定盲人，严重影响患者的生活质量。BCD多见于中国与日本人群，在欧美人群中极为罕见。根据我们已有的及文献报道数据推测，我国人群BCD患病率约为1/20000，是遗传性视网膜营养不良(IRD)中最常见的类型。该病唯一的致病基因是CYP4V2，该基因编码的产物属于细胞色素P450蛋白超家族的成员之一。
[0003]CYP4V2是一种微粒体酶，其主要作用是对中长链的脂肪本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测CYP4V2酶活性的方法，其特征在于，其包括如下步骤：以月桂酸为反应底物，在CYP4V2酶作用下反应后检测12羟月桂酸的生成量来测定CYP4V2酶的活性，所述反应的体系中包括辅因子NADPH。2.根据权利要求1所述的检测CYP4V2酶活性的方法，其特征在于，所述反应底物的浓度范围为0.1
‑
250μM。3.根据权利要求1所述的检测CYP4V2酶活性的方法，其特征在于，所述反应是在pH为7.4的条件下进行。4.根据权利要求3所述的检测CYP4V2酶活性的方法，其特征在于，所述反应温度为：25
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40℃；所述反应时间为0.5
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2h。5.根据权利要求1所述的检测CYP4V2酶活性的方法，其特征在于，检测CYP4V2酶活性为检测人体或动物组织器官来源的细胞、微粒体、内质网、线粒体、过氧化酶体、溶酶体、细胞浆制备物或其培养物、代谢物，或来自于细菌、昆虫细胞、哺乳动物细胞以及酵母菌建立的CYP4V2克隆表达体系中的CYP4V2酶活性。6.根据权利要求1所述的检测CYP4V2酶活性的方法，其特征在于，采用液相色谱串联质谱法来检测12羟月桂酸含量。7.根据权利要求6所述的检测CYP4V2酶活性的方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：睢瑞芳，姚凤霞，李小刚，回相宜，张为民，和会娟，潘兴华，
申请(专利权)人：中国医学科学院北京协和医院，
类型：发明
国别省市：