一种黄条鰤RNA干扰的方法技术

本发明专利技术提供海水鱼黄条鰤RNA干扰的方法，属于基因干扰技术领域。其中，所述dsRNA靶向黄条鰤热休克蛋白90α（HSP90α）基因，具体步骤如下：（1）根据黄条鰤HSP90α基因的cDNA序列，合成序列特异性的dsHSP90α;（2）稀释dsHSP90α，控制注射体积小于1μl/g鱼体重,按照3μg/g鱼体重的剂量向黄条鰤腹腔注射dsHSP90α。本发明专利技术提供的RNA干扰方法能够有效干扰黄条鰤目的基因表达，在黄条鰤中首次建立了用于基因功能研究的RNAi平台。能研究的RNAi平台。能研究的RNAi平台。

【技术实现步骤摘要】
一种黄条鰤RNA干扰的方法


[0001]本专利技术涉及基因干扰
，具体涉及一种黄条鰤RNA干扰的方法。

技术介绍

[0002]黄条鰤，属鲈形目、鲈亚目鲹科鰤属的一种海洋暖温性中上层掠食性鱼类；黄条鰤生长速度很快，通常在表层水温20℃~25℃以上时觅食活跃，主食是鳀鱼，玉筋鱼等小型鱼类及头足类和甲壳类海生动物。
[0003]中国专利文献103725683A公开了一种用调控植物结瘤固氮能力的RNA干扰载体，包括骨架载体和发夹结构，所述发夹结构利用SEQ
‑
ID
‑
NO：2所示的基因片段构建，将基因片段插入到pTCK303载体的限制性内切酶KpnI/Spe
‑
I和BamH
‑
I/Sac
‑
I酶切识别位点之间，得到重组RNA干扰载体。使所得RNA干扰载体转化受体植物，沉默受体植物中的对应基因，使受体植物的根组织具有增强的结瘤固氮能力。
[0004]但该专利技术没有给出干扰技术，同时也没有给出具体的黄条鰤RNA干扰技术，经过检索发现，现有技术很本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种黄条鰤RNA干扰的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：根据黄条鰤HSP90α基因的cDNA序列，合成序列特异性的dsHSP90α；步骤二：稀释dsHSP90α，控制注射体积小于1μl/g鱼体重，按照3μg/g鱼体重的剂量向黄条鰤腹腔注射dsHSP90α。2.根据权利要求1所述的一种黄条鰤RNA干扰的方法，其特征在于，所述步骤（1）dsHSP90α合成过程如下：以黄条鰤cDNA为模板，扩增HSP90α开放阅读框区基因序列，以pEGFP
‑
N1质粒为模板，扩增EGFP序列作为对照基因，所用引物序列如下：HSP90αF：ATGCCTGAATCACATGATCAGHSP90αR：TTAGTCCACCTCCTCCATCCTGEGFPF：TGTTCACCGGGGTGGTGEGFPR：TCGTTGGGGTCTTTGCT。3.根据权利要求2所述的一种黄条鰤RNA干扰的方法，其特征在于，所述扩增的基因进行常规胶回收纯化，将以上纯化产物稀释20倍，根据siRNA位点预测软件，对HSP90α基因序列进行分析，选取siRNA位点较多的区域作为干扰靶点；设计分别在正向引物和反向引物中加入T7启动子序列的特异引物进行扩增，常规胶回收纯化后即得到dsRNA合成的模板。4.根据权利要求1所述的一种黄条鰤RNA干扰的方法，其特征在于，所述步骤二中，取健康黄条鰤进行麻醉，测量黄条鰤平均体重，稀释合成的dsRNA，控制注射体积小于1μl/g鱼体重，最终以3μg/g鱼体重的剂量向黄条鰤腹腔注射dsRNA；注射后对RNA干扰效果进行检测，在注射后24小时后分别提取注射了PBS，dsEGFP，dsHSP90α的黄条鰤肝脏总RNA，逆转录为cDNA；通过RT
‑
PCR扩增HSP90α以18SRNA为内参基因，计算HSP90α mRNA相对表达量，进而确...

【专利技术属性】
技术研发人员：王琳，徐永江，姜燕，关长涛，秦升杰，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院黄海水产研究所，
类型：发明
国别省市：