三酰基甘油的部分酶水解制造技术

本文公开了表达多肽的宿主细胞，其中该多肽水解油中的包含至少一个长链多不饱和脂肪酸的三酰基甘油的酯键，用于使用这类宿主细胞的方法和用于使用这类宿主细胞产生脂酶的方法。法。

【技术实现步骤摘要】
三酰基甘油的部分酶水解
[0001]本申请是申请号为201680082770.2的中国专利技术专利申请(申请日：2016年12月29日，专利技术名称：三酰基甘油的部分酶水解)的分案申请。
[0002]相关申请的交叉引用
[0003]本申请要求2015年12月30日提交的美国临时专利申请号62/272,829的申请日的权益，其公开内容在此通过引用并入本文。
专利

[0004]本专利技术涉及表达多肽的宿主细胞，其中该多肽在宿主细胞中表达以赋予水解油中的包含至少一个长链多不饱和脂肪酸的三酰基甘油的酯键的能力，以及涉及使用表达多肽的宿主细胞的方法，其中该多肽在宿主细胞中表达以赋予水解油中的包含至少一个长链多不饱和脂肪酸的三酰基甘油的酯键的能力。该宿主细胞用于制造足够数量的该多肽以用于商业制造富含长链多不饱和脂肪酸的油组合物。

技术介绍

[0005]长链多不饱和脂肪酸(LC
‑
PUFA)如ω
‑
3脂肪酸，对于日常生活和功能是至关重要的。例如，现在很好地确立了ω
‑
3脂肪酸(例如顺式
‑
5,8,11,14,17
‑
二十碳五烯酸(EPA)和顺式
‑
4,7,10,13,16,19
‑
二十二碳六烯酸(DHA))对降低血清甘油三酯的有益效果。还已知这些化合物的其他心脏保护的益处。确实，美国心脏协会也已经报道了ω
‑
3脂肪酸可以降低心血管疾病和心脏病风险。LC
‑r/>PUFA的其他益处是涉及炎症、神经退行性疾病的预防和/或治疗和认知发育的那些益处。富含LC
‑
PUFA例如ω
‑
3脂肪酸的饮食也已经显示出对心脏病、癌症、关节炎、过敏和其他慢性疾病具有有益作用。
[0006]LC
‑
PUFA，诸如例如ω
‑
3脂肪酸，通常源自海产油(marine oil)、微生物和/或海藻油。这些来源通常含有三酰基甘油形式的LC
‑
PUFA，其中其他不需要的脂肪酸(如饱和脂肪酸)与所需的LC
‑
PUFA一起存在于三酰基甘油分子中。因此，一般需要纯化和浓缩油中的LC
‑
PUFA。
[0007]已知从油(例如海产油、微生物和/或海藻油)产生LC
‑
PUFA浓缩物的多种方法。例如，已经将脂酶用于将来自三酰基甘油的饱和脂肪酸酯交换成乙酯。然后通过蒸馏从混合物中去除饱和脂肪酸，且有时将不饱和酯酯交换回三酰基甘油。其他方法用脂酶从三酰基甘油中选择性地水解饱和脂肪酸，并且通过与尿素形成复合物而去除所得到的游离饱和脂肪酸。通过这些方法获得的油中含有的LC
‑
PUFA的量相对于脂肪酸的量一般为60wt.％或更高，或者70wt.％或更高。
[0008]已经发现当在水解反应中使用时，特别是当用于未加工的和精炼的鱼油时，现有的商业化脂酶具有不同程度的有效性。改善脂酶的选择性和反应速率将会提供更高的油产率和更有效率的处理。例如，一些脂酶会不加选择地从甘油酯水解所有可得的脂肪酸。其他的脂酶会表现出从甘油酯水解脂肪酸的不需要的选择性。将所需的LC
‑
PUFA诸如EPA和DHA留在甘油酯上以在随后的下游处理步骤中效率更高地且有效地浓缩这些LC
‑
PUFA将会是有
利的。因此，允许这种选择性和改善的反应速率的脂酶的鉴定和分离将是非常有用的。本专利技术人已经鉴定出针对所需的LC
‑
PUFA如EPA和DHA具有更好选择性和更高反应速率的脂酶同种型。
[0009]专利技术概述
[0010]本文公开了表达多肽的宿主细胞，其中该多肽水解油中的三酰基甘油的酯键，使用此宿主细胞的方法和用于使用此宿主细胞产生作为脂酶的多肽的方法。
[0011]在一些实施方案中，多肽与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少90％的同一性。在一些实施方案中，多肽与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少90％的同一性。在一些实施方案中，多肽与SEQ ID NO:3的氨基酸序列具有至少90％的同一性。
[0012]在一些实施方案中，多肽是脂酶。在优选的实施方案中，多肽是脂酶的同种型。在更优选的实施方案中，多肽是来源于褶皱念珠菌(Candida rugosa)或白地霉(Geotrichum candidum)的脂酶的同种型。
[0013]在一些实施方案中，宿主细胞是酵母。在优选的实施方案中，宿主细胞是巴斯德毕赤酵母(Pichia Pastoris)。
[0014]在一些实施方案中，三酰基甘油包含至少一个长链多不饱和脂肪酸(LC
‑
PUFA)。在一些实施方案中，LC
‑
PUFA包含二十二碳六烯酸(DHA)、二十碳五烯酸(EPA)和其混合物。在另一个实施方案中，LC
‑
PUFA是DHA。在另外的实施方案中，LC
‑
PUFA是EPA。

技术实现思路

[0015]在随附序列表中列出的核酸序列和推导的氨基酸翻译序列使用如37C.F.R
§
1.822中所定义的核苷酸碱基和氨基酸的标准字母缩写显示。在随附序列表中：
[0016]SEQ ID NO:1显示来自巴斯德毕赤酵母的褶皱念珠菌同种型脂酶1蛋白(无α
‑
交配因子)的氨基酸序列：
[0017][0018]SEQ ID NO:2显示来自巴斯德毕赤酵母的褶皱念珠菌同种型脂酶3蛋白(无α
‑
交配因子)的氨基酸序列：
[0019][0020]SEQ ID NO:3显示来自巴斯德毕赤酵母的白地霉(Geotrichum candida)同种型脂酶2蛋白(无α因子信号肽或8x组氨酸标签)的氨基酸序列：
[0021][0022]详细描述
[0023]阅读下列详细描述后本领域技术人员可以更容易地理解本专利技术的特征和益处。应当领会到，为了清楚起见，也可以组合在以上和以下的单独的实施方案的上下文中描述的本专利技术的某些特征以得到其亚组合。
[0024]本文鉴定的示例性实施方案意图是示例说明性的和非限制性的。
[0025]在本说明书和随后的权利要求中，将会提及许多术语，其将会定义为具有以下含义：
[0026]在描述本专利技术的上下文(尤其是在以下权利要求的上下文中)中使用术语“一(a)”和“一个(an)”和“该(the)”和相似指示词会被解释为涵盖单数和复数，除非本文另有说明或通过上下文明显矛盾。
[0027]除非另有说明，否则术语“包含”、“具有”、“包括”和“含有”被解释为开放式术语(即意指“包括但不限于”)。除非本文另有说明，否则本文中对数值范围的描述仅意图用作单独提及落入该范围内的每个单独值的简写方法，并且每个单独的值并入本说明书中，如
同其在本文中单独描述一样。
[0028本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种表达多肽的宿主细胞，所述多肽与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的氨基酸序列具有至少90％的同一性，其中所述多肽水解油中的包含至少一个长链多不饱和脂肪酸(LC
‑
PUFA)的三酰基甘油的酯键。2.权利要求1的宿主细胞，其中所述宿主细胞是巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)。3.权利要求1或权利要求2的宿主细胞，其中所述多肽与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的氨基酸序列具有90％至99％的同一性。4.权利要求1
‑
3中任一项的宿主细胞，其中所述多肽是脂酶。5.权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：P，
申请(专利权)人：帝斯曼知识产权资产管理有限公司，
类型：发明
国别省市：