一种与骨关节炎相关的LncRNA标志物及其应用制造技术

本发明专利技术属于骨关节炎诊断、治疗和预后检测领域，具体公开了一种与骨关节炎相关的LncRNA标志物及其应用。所述LncRNA标志物HOXC

【技术实现步骤摘要】
一种与骨关节炎相关的LncRNA标志物及其应用


[0001]本专利技术属于骨关节炎诊断、治疗和预后检测领域，涉及一种骨关节炎LncRNA标志物及其应用。

技术介绍

[0002]骨关节炎(Osteoarthritis,OA)是活动关节的一种慢性进行性疾病，主要表现为关节软骨基质崩解、软骨细胞减少和活性降低等。中国骨关节炎诊治指南报道，骨关节炎在60岁以上的人群中患病率可达50％，75岁以上的人群中则达80％，致残率高达53％。因此，早期筛查诊断和防治骨关节炎对提高人们的生活质量具有重要意义。
[0003]LncRNAs是一类转录本长度超过200个核苷酸的RNA分子，由于缺乏有效的开放阅读框，它们并不编码蛋白，而是以RNA的形式在表观遗传水平、转录及转录后水平等多种层面上调控基因的表达，从而影响疾病的发生与发展。随着高通量测序技术的发展，越来越多的LncRNAs被注释。因此，我们旨在探寻有效的LncRNA作为骨关节炎临床诊断、治疗和预后检测的标记物，从而提高骨关节炎患者的生活质量。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供了一种与骨关节炎相关的LncRNA标志物HOXC
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AS3及其应用，通过研究证明在骨关节炎关节软骨细胞中LncRNA HOXC
‑
AS3的表达明显低于正常关节软骨细胞。具体讲，LncRNA HOXC
‑
AS3的表达水平降低可以作为诊断骨关节炎发生及预后的生物标志物。
[0005]检测HOXC
‑
AS3的物质在制备骨关节炎辅助诊断或预后评估试剂中的应用。作为本专利技术的一种优选，所述的检测HOXC
‑
AS3的物质为HOXC
‑
AS3的特异性引物、探针。
[0006]作为本专利技术的进一步优选，所述的HOXC
‑
AS3的特异性引物如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。
[0007]一种骨关节炎辅助诊断或预后评估试剂，包含检测HOXC
‑
AS3的物质。
[0008]作为本专利技术的一种优选，所述的检测HOXC
‑
AS3的物质为HOXC
‑
AS3的特异性引物、探针。
[0009]作为本专利技术的进一步优选，所述的HOXC
‑
AS3的特异性引物如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。
[0010]HOXC
‑
AS3或提高HOXC
‑
AS3表达量的物质在制备骨关节炎治疗或辅助治疗药物中的应用。HOXC
‑
AS3的核苷酸序列如SEQ NO.3所示。
[0011]有益效果：本专利技术发现了一种与骨关节炎相关的LncRNA标志物HOXC
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AS3，该分子标志物在骨关节炎关节软骨细胞中的表达明显低于相应的正常关节软骨细胞，可以作为骨关节炎早期筛查、辅助查诊断或预后评估指标。本专利技术在细胞模型中发现与对照组相比，HOXC
‑
AS3表达水平在OA细胞模型中显著降低(图5)，敲低HOXC
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AS3后软骨细胞增殖能力下降(图7)，Edu阳性软骨细胞表达显著下降(图8)，软骨细胞被阻滞在G0/G1期(图9
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10)，软骨细胞克隆形成能力降低(图11
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12)；而过表达OXC
‑
AS3后软骨细胞增殖能力(图14)和细胞克
隆形成能力(图15
‑
16)均增加。可见，HOXC
‑
AS3可以作为OA的分子标记物，并应用于制备OA的诊断试剂盒或者成为治疗OA的候选药物。
附图说明
[0012]图1为基因测序分析正常关节软骨细胞和OA软骨细胞差异表达的基因。
[0013]图2为RT
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qPCR检测临床正常关节软骨细胞和OA患者软骨细胞中LncHOXC
‑
AS3的表达情况。
[0014]图3为ROC曲线验证图。
[0015]图4为IL
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1β构建OA细胞模型后，Western Blot检测正常对照和OA软骨细胞模型中各蛋白表达情况。
[0016]图5为IL
‑
1β构建OA细胞模型后，RT
‑
qPCR检测正常对照和OA软骨细胞模型中LncRNA HOXC
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AS3的表达情况。
[0017]图6为人软骨细胞中用siRNA特异性敲低HOXC
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AS3后mRNA水平的表达量。
[0018]图7为特异性敲低软骨细胞中HOXC
‑
AS3后的细胞增殖情况。
[0019]图8为特异性敲低软骨细胞中HOXC
‑
AS3后的Edu阳性细胞表达情况。
[0020]图9为特异性敲低软骨细胞中HOXC
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AS3后的细胞周期检测流式检测图。
[0021]图10为特异性敲低软骨细胞中HOXC
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AS3后的细胞周期检测流式检测统计图。
[0022]图11为特异性敲低软骨细胞中HOXC
‑
AS3后的细胞克隆形成情况。
[0023]图12为特异性敲低软骨细胞中HOXC
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AS3后的细胞克隆数统计图。
[0024]图13为人软骨细胞过表达HOXC
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AS3后mRNA水平的表达量。
[0025]图14为过表达软骨细胞中HOXC
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AS3后的细胞增殖情况。
[0026]图15为过表达软骨细胞中HOXC
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AS3后的细胞克隆形成情况。
[0027]图16为过表达软骨细胞中HOXC
‑
AS3后的细胞克隆数统计图。
具体实施方式
[0028]实施例1临床样本分析
[0029]本专利技术所采用临床样本均来自南京市第一医院。本项目征求病人的同意并经南京医科大学伦理委员会批准。
[0030](1)组织标本来源及收集
[0031]软骨标本来自2019年至2021年南京市第一医院接受膝关节置换术或者髋关节置换术的患者。其中16例因股骨颈骨折行髋关节置换术的病患被纳入正常对照组。另外16例因严重膝关节骨性关节炎行膝关节置换术被纳入OA组。
[0032]手术中样本组织离体后，在无菌条件下置于无菌无酶的50mL离心管中，后立即放入液氮快速冷冻，再储存在
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80℃冰箱，后续用于基因测序或者。
[0033](2)基因测序及数据分析
[0034]我们将临床手术中收取的5对正常对照样本及OA样本送至上海天昊生物科技公司进行lncRNAs测序分析，并对差异表达的lncRNAs进行注释(结果见图1)。(3)Real
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time PCR
[003本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测HOXC
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AS3的物质在制备骨关节炎辅助诊断或预后评估试剂中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的检测HOXC
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AS3的物质为HOXC
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AS3的特异性引物、探针。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的HOXC
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AS3的特异性引物如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。4.一种骨关节炎辅助诊断或预后评估试剂，其特征在于包含检测HOXC
‑
AS3的物质。5...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈璐璐，王婵，苗登顺，王懿涵，
申请(专利权)人：南京医科大学，
类型：发明
国别省市：