RPA-Cas12a检测系统及其在肝胰腺坏死病检测中的应用技术方案

本发明专利技术公开了一种RPA

【技术实现步骤摘要】
RPA
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Cas12a检测系统及其在肝胰腺坏死病检测中的应用


[0001]本专利技术属于重要水产病害现场快检，具体涉及一种RPA
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Cas12a检测系统及其在重要水产养殖传染病肝胰腺坏死病的快速现场检测中的应用。

技术介绍

[0002]肝胰腺坏死病(AHPND)是一种严重危害水产养殖产业的传染病。常见于对虾、螃蟹等动物养殖中，动物在感染AHPND后发病时间短，通常在放养25
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30天内开始出现临床症状和大规模扩散，不到一周的时间死亡率就可以达到100％。自2009年首次发现以来，已造成了养殖业巨大的经济损失。对于AHPND感染的病虾，治疗措施十分有限，降低损失很大程度上依赖于早期诊断，随后通过丢弃感染的病虾及对养殖环境进行消毒。因此，开发AHPND的现场快速检测方法十分重要。
[0003]目前已报道了多种AHPND的检测方法，包括巢式PCR法、荧光定量PCR法、LAMP法、基于RPA
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nfo的侧向流试纸条法和基于RPA
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exo的荧光法等。然而，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种RPA
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Cas12a检测系统，其特征在于，包括Cas12a预混液和用于扩增RPA产物引物和试剂，所述Cas12a预混液包括ssDNA、Cas12a和crRNA；所述ssDNA为两端分别修饰有荧光基团FAM和猝灭基团BHQ1的单链DNA；所述crRNA为能引导Cas12a靶向识别AHPND RPA产物的向导RNA序列。2.根据权利要求1所述的RPA
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Cas12a检测系统，其特征在于，所述ssDNA的序列为5
’
FAM
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TTATT
‑3’
BHQ1。3.根据权利要求1所述的RPA
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Cas12a检测系统，其特征在于，所述crRNA序列优选为UAAUUUCUACUAAGUGUAGAUAUUUUGCUAUCCAAUAUUCCA。4.根据权利要求1所述的RPA
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Cas12a检测系统，其特征在于，所述RPA产物为在反应体系中，分别添加正向引物RPA
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F和反向引物RPA
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R、A Buffer和待检测样品的DNA模板，最后加入B Buffer，混匀孵育形成。5.根据权利要求4所述的RPA
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Cas12a检测系统，其特征在于，所述RPA
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F的序列为CATCTTTGACGGAATTTAACCCTAACAAT；所述RPA
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【专利技术属性】
技术研发人员：陈国祥，王佩，张幸，李昺之，
申请(专利权)人：南京师范大学，
类型：发明
国别省市：