ＩＲＥＳ介导的ＧＨ四种亚型与ＩＧＦ－Ｉ双顺反子真核共表达载体的构建与应用制造技术

本发明专利技术是ＩＲＥＳ介导的ＧＨ四种亚型与ＩＧＦ－Ｉ双顺反子真核共表达载体的构建与应用，根据ＧＨ和ＩＧＦ－Ｉ的ｍＲＮＡ序列和蛋白序列对比得出ＧＨ四种亚型和ＩＧＦ－Ｉ的编码序列设计引物，以实验室的ＧＨ和ＩＧＦ－Ｉ的ＤＮＡ为模板通过ＰＣＲ的方法得到ＧＨ四种亚型和ＩＧＦ－Ｉ的目标ＤＮＡ，将ＰＣＲ产物连接到ｐＢＳ－Ｔ载体中，获得ＧＨ和ＩＧＦ－Ｉ的ＴＡ载体，然后将ＴＡ载体经ＸｈＯ?Ｉ和ＥｃｏＲ?Ｉ双酶切将ＧＨ四种亚型的基因定向插入ｐＣＩ－ＩＲＥＳ中，成功构建了ＧＨ四种亚型的重组质粒ｐＣＩ－２２－ＩＲＥＳ、ｐＣＩ－２０－ＩＲＥＳ、ｐＣＩ－１７－ＩＲＥＳ和ｐＣＩ－５－ＩＲＥＳ。然后将ＩＧＦ－Ｉ的ＴＡ载体经Ｓａｍ?Ｉ和Ｎｏｔ?Ｉ双酶切将ＩＧＦ－Ｉ的基因分别定向插入上述重组质粒中，成功构建了ＩＲＥＳ介导的人生长激素（ＧＨ）四种亚型与ＩＧＦ－Ｉ的双顺反子真核共表达载体：ｐＣＩ－２２－ＩＲＥＳ－ＩＧＦ－Ｉ、ｐＣＩ－２０－ＩＲＥＳ－ＩＧＦ－Ｉ、ｐＣＩ－１７－ＩＲＥＳ－ＩＧＦ－Ｉ、ｐＣＩ－５－ＩＲＥＳ－ＩＧＦ－Ｉ。为进一步研究ＧＨ的四种亚型和ＩＧＦ－Ｉ基因的生物学特性和功能提供了方便有效的基本资料。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种ＩＲＥＳ介导的ＧＨ四种亚型与ＩＧＦ－Ｉ双顺反子真核共表达载体的构建方法，所述ＧＨ四种亚型为２２ｋＤ、２０ｋＤ、１７ｋＤ和５ｋＤ，其特征在于，所述构建方法包括步骤：　　１）根据Ｇｅｎｅｂａｎｋ公布的ＧＨ和ＩＧＦ－Ｉ的ｍＲＮＡ序列和蛋白序列对比得出ＧＨ四种亚型和ＩＧＦ－Ｉ的编码序列设计引物，以实验室的ＧＨ和ＩＧＦ－Ｉ的ＤＮＡ为模板通过ＰＣＲ的方法得到ＧＨ四种亚型和ＩＧＦ－Ｉ的目标ＤＮＡ，将ＰＣＲ产物连接到ｐＢＳ－Ｔ载体中，获得ＧＨ四种亚型和ＩＧＦ－Ｉ的ＴＡ载体；　　２）然后将ＧＨ的ＴＡ载体经ＸｈＯ　Ｉ和ＥｃｏＲ　Ｉ双酶切将ＧＨ四种亚型的基因定向插入ｐＣＩ－ＩＲＥＳ中，构建了ＧＨ四种亚型的真核表达载体ｐＣＩ－２２－ＩＲＥＳ、ｐＣＩ－２０－ＩＲＥＳ、ｐＣＩ－１７－ＩＲＥＳ和ｐＣＩ－５－ＩＲＥＳ；　　３）将ＩＧＦ－Ｉ的ＴＡ载体经Ｓａｍ　Ｉ和Ｎｏｔ　Ｉ双酶切将ＩＧＦ－Ｉ的基因分别定向插入ｐＣＩ－２２－ＩＲＥＳ、ｐＣＩ－２０－ＩＲＥＳ、ｐＣＩ－１７－ＩＲＥＳ和ｐＣＩ－５－ＩＲＥＳ，构建ＩＲＥＳ介导的人生长激素（ＧＨ）四种亚型２２ｋＤ、２０ｋＤ、１７ｋＤ、５ｋＤ与ＩＧＦ－Ｉ的双顺反子真核共表达载体：ｐＣＩ－２２－ＩＲＥＳ－ＩＧＦ－Ｉ、ｐＣＩ－２０－ＩＲＥＳ－ＩＧＦ－Ｉ、ｐＣＩ－１７－ＩＲＥＳ－ＩＧＦ－Ｉ和ｐＣＩ－５－ＩＲＥＳ－ＩＧＦ－Ｉ。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：杜宏武，李传宝，金海明，华甜，
申请(专利权)人：北京科技大学，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]