【技术实现步骤摘要】
一种生产目标蛋白的重组载体、重组杆状病毒及其构建方法和应用
[0001]本专利技术属于基因工程
,具体涉及一种生产目标蛋白的重组载体、重组杆状病毒及其构建方法和应用。
技术介绍
[0002]杆状病毒表达系统是四大表达系统之一,其在蛋白表达,森林病虫害防控以及疫苗制备等方面具有广阔的应用前景。家蚕
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杆状病毒表达载体系统(BEVS)是生产重组蛋白的有力工具,其生产的真核蛋白具有修饰接近于蛋白的原始形式,并且培养家蚕注射病毒表达外源蛋白成本低,蛋白产量高,是生产目标蛋白的有效手段。但是病毒的感染方式目前依赖注射家蚕方法,费时费力,且成功率低。
技术实现思路
[0003]有鉴于此,本专利技术的目的在于提供一种生产目标蛋白的重组载体、重组杆状病毒及其构建方法和应用,能有效提高目标蛋白的表达量的同时还能避免注射制备可直接口服感染家蚕的病毒。
[0004]本专利技术提供了一种生产目标蛋白的重组载体,以pFast
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Dual为骨架载体,还包含昆虫杆状病毒p6.9启动子、pH启动子、GP64信号肽序列、目标蛋白基因和纯化标签以及由p10启动子启动表达的编码多角体蛋白基因。
[0005]优选的,所述编码多角体蛋白基因为编码BmCPV polyhedrin蛋白基因;所述编码BmCPV polyhedrin蛋白基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示。
[0006]优选的,所述编码BmCPV polyhedrin蛋白基因在骨架载体的插入多克隆位点为Xh ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种生产目标蛋白的重组载体,其特征在于,以pFast
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Dual为骨架载体,还包含昆虫杆状病毒p6.9启动子、pH启动子、GP64信号肽序列、目标蛋白基因和纯化标签以及由p10启动子启动表达的编码多角体蛋白基因。2.根据权利要求1所述重组载体,其特征在于,所述编码多角体蛋白基因包括编码BmCPV polyhedrin蛋白基因;所述编码BmCPV polyhedrin蛋白基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示。3.根据权利要求2所述重组载体,其特征在于,所述编码BmCPV polyhedrin蛋白基因在骨架载体的插入多克隆位点为XhoI/KpnI。4.根据权利要求1所述重组载体,其特征在于,所述目标蛋白基因包括编码病毒蛋白的基因;所述编码病毒蛋白的基因包括以下一种基因:新冠病毒的S蛋白RBD结构域基因、猪瘟病毒E2蛋白基因、猪圆环病毒的CAP基因;所述新冠病毒的S蛋白RBD结构域基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示;所述猪瘟病毒E2蛋白基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示;所述猪圆环病毒的CAP基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。5.权利要求1~4任意一项所述生产目标蛋白的重组载体的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:将含昆虫杆状病毒p6.9启动子、pH启动子、GP64信号肽序列和纯化标签的片段序列和线性载体连接,得到第一重组载体;将目标蛋白基因插入所述第一重组载体中,得到第二重组载体;将编码多角体蛋白基因插入所述第二重组载体中,得到生产目标蛋白的重组载体。6.根据权利要求5所述构建方法,其特征在于,所述编码多角体蛋白基因的扩增引物包括F
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p10
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cpvpoly/R
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p10
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cpvpoly引物对;所述F
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p10
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【专利技术属性】
技术研发人员:韦俊宏,范有鹏,包佳玲,付晓雨,李春峰,潘国庆,周泽扬,
申请(专利权)人:西南大学,
类型:发明
国别省市:
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