一类化合物作为基质在质谱分析中的用途制造技术

本发明专利技术提供一类化合物作为基质在质谱分析中的用途，所述化合物包含光吸收基团、氢自由基供体以及质子供体。本发明专利技术所提供的基质可以在蛋白的MALDI

【技术实现步骤摘要】
一类化合物作为基质在质谱分析中的用途


[0001]本专利技术涉及质谱分析
，具体涉及一类化合物(包括但不限于3
‑
MAB或其类似物)作为基质在基质辅助激光解吸电离质谱(MALDI
‑
MS)分析蛋白序列中的用途。

技术介绍

[0002]蛋白质序列的测定是蛋白质分析中最重要的一环，对于生命科学的研究至关重要。质谱分析技术是目前蛋白质序列测定中常用的手段，主要有自下而上(bottom
‑
up)和自上而下(top
‑
down)两种策略。自下而上的方法是将蛋白质酶解成小的肽段，然后利用肽段精确分子量或串级质谱技术对多肽进行鉴定，通过将肽段及其碎片分子量与根据蛋白序列模拟所得的理论值进行比对分析，或通过将肽段相邻末端碎片(即仅通过一个位点解离而产生的一端为原多肽链末端的碎片)的分子量差值与单个氨基酸残基或少量氨基酸残基组合的理论分子量进行比对分析，从而得到多肽的序列，进而获得蛋白的序列信息。然而在使用自下而上的蛋白序列分析方法时，由于酶解的不完全、酶切位点错漏或是部分多肽未被鉴定到，会丢失部分信息，比如由于部分肽段序列的丢失导致的蛋白序列覆盖度偏低；对于含重复序列的蛋白或需从头测序(de novo sequencing)的蛋白会出现肽段拼接方式难以获知的问题；在蛋白修饰分析中面临难以获得多个肽段的修饰组合效果信息或蛋白整体的修饰程度信息。此时自上而下的蛋白序列分析方法可作为有力的补充手段。
[0003]自上而下的蛋白序列分析是直接将完整蛋白进行分子量分析，随后通过串级质谱获得其气相解离碎片，然后根据得到的解离谱图进行数据库检索分析或从头测序分析。蛋白质的自上而下分析可通过电喷雾离子化(electrospray ionization,ESI)或基质辅助激光解吸附离子化(matrix
‑
assisted laser desorption/ionization,MALDI)手段产生用于后续串级质谱分析的完整蛋白离子。然而在基于ESI的分析中，一般而言，随着蛋白分子量的增大，蛋白在常规气相解离方法(比如碰撞诱导解离，collision
‑
induced dissociation)中的解离效率会降低，从而使得蛋白鉴定的序列覆盖度下降。基质辅助激光解吸附电离
‑
源内裂解(matrix
‑
assisted laser de sorption/ionization
‑
in source decay,MALDI
‑
ISD)技术是一种可以对分子量较大蛋白的末端序列进行鉴定的技术，一般通过断裂蛋白多肽链主干上的N
‑
αC键产生末端碎片离子，并且具有产生较大量连续碎片离子信号的特点，可在序列覆盖度范围内获得更高的序列分辨率。
[0004]基质的选择对于MALDI
‑
ISD的实现至关重要。传统上常用于多肽和蛋白分析的α
‑
氰基
‑4‑
羟基肉桂酸(α
‑
cyano
‑4‑
hydroxycinnamic acid,CHCA)和芥子酸(sinapic acid,SA)基质只产生少量的碎片离子，而2,5
‑
二羟基苯甲酸(2,5
‑
dihydroxybenzoic acid，DHB)则需要较高的激光能量，并且蛋白解离效率依旧不高。现在最常用的MALDI
‑
ISD基质是1,5
‑
二氨基萘(1,5
‑
diaminonaphthalene,1,5
‑
DAN，亦称1,5
‑
萘二胺)，该基质可以得到较高的蛋白解离效率，然而还是有部分缺点，比如该基质不稳定，需要做实验当天新鲜配制，放置时间过久(放置一天以上基质效果衰减明显)的基质的ISD信号响应会变差，又如该基质在低分子量范围产生较多的杂峰离子，干扰最末端十个左右氨基酸序列的检测等。此外，现有
的基质(如1,5
‑
DA N)具有一定的致癌毒性，且在实验过程中难以避免与操作人员的直接接触，对实验人员的身体健康造成影响。

技术实现思路

[0005]在一实施例中，提供一类化合物作为基质在质谱分析中的用途，所述化合物包含光吸收基团、氢自由基供体以及质子供体。
[0006]依据上述实施例的一类化合物作为基质在质谱分析中的用途，本专利技术所提供的基质可以在蛋白的MALDI
‑
ISD分析中检测到大量的碎片离子，提供丰富的蛋白序列信息。
[0007]本专利技术所提供的基质可以产生具有更高碎片离子检测效率的蛋白碎片离子。
附图说明
[0008]图1为泛素蛋白的MALDI
‑
ISD谱图，分别以1,5
‑
DAN(1a)和3
‑
MAB(1b)为基质；
[0009]图2为泛素蛋白在分子量范围在640
‑
1000Da的MALDI
‑
ISD谱图，分别以1,5
‑
DAN(2a)和3
‑
MAB(2b)为基质；
[0010]图3为泛素蛋白在分子量范围在4000
‑
5000Da的MALDI
‑
ISD谱图，分别以1,5
‑
DAN(3a)和3
‑
MAB(3b)为基质；
[0011]图4为泛素蛋白的ISD碎片离子c15的TOF/TOF谱图，分别以1,5
‑
DAN(4a)和3
‑
MA B(4b)为基质；
[0012]图5为泛素蛋白的ISD谱图与序列的匹配结果图，以3
‑
MAB为基质；
[0013]图6为乳球蛋白的ISD碎片离子c16的TOF/TOF谱图，分别以1,5
‑
DAN(6a)和3
‑
MA B(6b)为基质；
[0014]图7为3
‑
MAB及类似物2
‑
MAB(2
‑
甲氨基苯甲酸)结构图；
[0015]图8为以2
‑
MAB为基质的泛素蛋白的ISD谱图。
具体实施方式
[0016]下面通过具体实施方式结合附图对本专利技术作进一步详细说明。在以下的实施方式中，很多细节描述是为了使得本申请能被更好的理解。然而，本领域技术人员可以毫不费力的认识到，其中部分特征在不同情况下是可以省略的，或者可以由其他材料、方法所替代。在某些情况下，本申请相关的一些操作并没有在说明书中显示或者描述，这是为了避免本申请的核心部分被过多的描述所淹没，而对于本领域技术人员而言，详细描述这些相关操作并不是必要的，他们根据说明书中的描述以及本领域的一般技术知识即可完整了解相关操作。
[0017]另外本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一类化合物作为基质在质谱分析中的用途，其特征在于，所述化合物包含光吸收基团、氢自由基供体以及质子供体。2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述光吸收基团包括苯环；优选地，所述氢自由基供体包括亚氨基；优选地，所述质子供体包括羧基；优选地，所述化合物包含如下结构：式I中，R1、R2、R3、R4、R5、R6独立地选自氢或烃基，且R1、R2、R3、R4、R5、R6中的至少一个含有氢自由基供体，至少一个含有质子供体；优选地，式I中，所述氢自由基供体包括亚氨基；优选地，式I中，所述质子供体包括羧基；优选地，所述化合物包括3
‑
甲氨基苯甲酸或其类似物；优选地，所述3
‑
甲氨基苯甲酸的类似物包括2
‑
甲氨基苯甲酸；优选地，所述化合物作为基质单独使用，或与酸类物质合并作为基质使用；优选地，所述化合物作为质子供体，或加入酸类物质作为质子供体；优选地，所述酸类物质包括三氟乙酸。3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述质谱包含基质辅助激光解吸电离(mat rix
‑
assisted laser desorption/ionization,MALDI)质谱。4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述质谱包含基质辅助激光解吸电离
‑
源内裂解(in
‑
source decay,ISD)质谱。5.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述质谱包含基质辅助激光解吸电离
‑
飞行时...

【专利技术属性】
技术研发人员：占铃鹏，韦晓云，王冠博，黄岩谊，
申请(专利权)人：深圳湾实验室，
类型：发明
国别省市：