沉香内生菌及其应用制造技术

本发明专利技术涉及微生物技术领域，提出了沉香内生菌及其应用。所述沉香内生菌为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo:22906，所述沉香内生菌用于产纤维素酶和用于提取沉香有效成分。通过上述技术方案，解决了现有技术中醇提法得到的沉香提取物中沉香四醇等有效成分的含量低、提取效率低的问题。问题。问题。

【技术实现步骤摘要】
沉香内生菌及其应用


[0001]本专利技术涉及微生物
，具体的，涉及沉香内生菌及其应用。

技术介绍

[0002]沉香为瑞香科植物白木香A.sinensis(Lour.)Gilg含树脂的药材沉香，具有行气止痛、温中止呕、纳气平喘功能，用于胸腹胀闷、疼痛、胃寒呕吐、呃逆、肾虚气逆喘急，临床使用的沉香有国内和进口，其中国内主要产地是海南、广东，广西等，进口沉香主要来源于马来西亚、泰国、越南及缅甸等地。含沉香的中药复方，常用于治疗心血管、消化系统、呼吸系统及泌尿系统类疾病。现代药理学表明，沉香具有抗氧化、抗炎与抗肿瘤等活性。
[0003]沉香主要成分有2
‑
(2
‑
苯乙基)色酮类、倍半萜类、三萜类等，2
‑
(2
‑
苯乙基)色酮类为沉香特征成分，其中沉香四醇含量较高。2015年版《中国药典》首次将沉香四醇的含量测定作为质控指标。为了提取沉香中有效成分，一般采用醇提法，但是得到的沉香提取物中沉香四醇等有效成分的含量不高、提取效率不高的问题。

技术实现思路

[0004]本专利技术提出沉香内生菌及其应用，解决了现有技术中醇提法得到的沉香提取物中沉香四醇等有效成分的含量低、提取效率低的问题。
[0005]本专利技术的技术方案如下：
[0006]本专利技术提出了一种沉香内生菌，所述沉香内生菌为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo:22906。
[0007]本专利技术还提出了上述沉香内生菌的应用，用于产纤维素酶。
[0008]作为进一步的技术方案，用于提取沉香有效成分。
[0009]作为进一步的技术方案，所述沉香有效成分为沉香四醇。
[0010]作为进一步的技术方案，将沉香内生菌菌液与沉香提取物混合后共培养。
[0011]作为进一步的技术方案，将沉香内生菌喷剂与沉香药材混合后提取。
[0012]作为进一步的技术方案，所述共培养为恒温培养，培养温度为30
‑
40℃，培养时间为12
‑
20h，摇床转速为150
‑
300rpm，所述沉香提取物由沉香经乙醇提取得到，所述沉香内生菌菌液由沉香内生菌接种至培养基培养得到。
[0013]作为进一步的技术方案，所述沉香提取物的提取方法为将沉香加入乙醇中静置1
‑
2h，升温回流提取1
‑
2h，得到沉香提取液，将沉香提取液冷却后旋蒸，得到沉香提取物。
[0014]作为进一步的技术方案，所述沉香内生菌喷剂由沉香内生菌冻干粉与水混合得到。
[0015]作为进一步的技术方案，所述沉香内生菌冻干粉由沉香内生菌接种至培养基培养得到沉香内生菌菌液，将沉香内生菌离心得到的沉淀冷冻干燥得到。
[0016]本专利技术的工作原理及有益效果为：
[0017]1、本专利技术中，提供了一种新的枯草芽孢杆菌
‑
沉香内生菌，该菌株可产纤维素酶，并利用纤维素酶降解沉香细胞壁的纤维素释放细胞中的有效成分，从而显著提高沉香提取物中有效成分如沉香四醇的含量。通过本专利技术的沉香内生菌可以实现沉香药材保效、低质量产地沉香药材增效、节约药材、提高药效等效果。
附图说明
[0018]下面结合附图和具体实施方式对本专利技术作进一步详细的说明。
[0019]图1为本专利技术实施例1中沉香内生菌菌液培养结果示意图；
[0020]图2为本专利技术实施例2中沉香内生菌产纤维素验证培养结果示意图；
[0021]图3为本专利技术实施例3中沉香内生菌菌液提取沉香有效成分高效液相色谱图；
[0022]图4为本专利技术实施例4中沉香内生菌冻干粉喷剂提取沉香有效成分高效液相色谱图。
具体实施方式
[0023]下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都涉及本专利技术保护的范围。
[0024]实施例1沉香内生菌的分离及鉴定
[0025]1、沉香内生菌的分离
[0026]取沉香药材，用无菌水冲洗，置于75％的酒精中浸泡50s，将沉香药材置于超净台，阴干；灭菌，除去将沉香药材表面的腐质部位。切取沉香药材内部1cm
×
1cm大小，置于马铃薯固体培养基中间，将培养基置于37℃培养24h。
[0027]马铃薯培养基的：马铃薯淀粉1g，葡萄糖1g，蛋白胨0.25g，酵母粉0.15g，加蒸馏水至50mL。
[0028]该菌的性质为：在马铃薯培养基上培养24h后形成明显菌落，菌落性状不规则或呈现褶状。
[0029]2、沉香内生菌的鉴定
[0030]挑取长菌落，划线纯化，得单菌落，进行液体培养基扩大培养，将单菌落挑取至LB培养基，恒温摇床中37℃，200rpm；培养12h。以菌液为模板，测序，采用细菌通用引物序列27F：5
’‑
AGAGTTTGATCCTGGCTCAG
‑3’
；1492R：5
’‑
TACGGCTACCTTGTTACGACTT
‑3’
(北京博迈德基因技术有限公司)进行PCR扩增，得到PCR扩增产物，对PCR扩增产物进行测序，测序得到的序列如序列表SEQIDNO1所示，将该序列提交至NCBI进行比对，结果发现：该菌株的16SrDNA序列与数据库中已有枯草芽孢杆菌16SrDNA序列的同源性达100％，结合形态性质，将该菌定义为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)。
[0031]将该菌株保藏于北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo:22906，保藏时间为2021年7月15日。
[0032]实施例2沉香内生菌的应用—用于产纤维素酶
[0033]1、沉香内生菌菌液制备
[0034]称取4gLB肉汤于200mL纯水中，溶解，高压灭菌锅121℃，21min，冷却，得LB肉汤培养基，向LB肉汤培养基中接种沉香内生菌，接种量为1％(即每200mL LB肉汤培养基接种2mL沉香内生菌)，接种后，置于恒温摇床中37℃、200rpm培养12h，得沉香内生菌菌液。
[0035]2、沉香内生菌产纤维素酶
[0036]取20μL沉香内生菌菌液，接入纤维素刚果红培养基，37℃恒温培养24h，观察结果如图2所示。
[0037]从图2中可以看出，从菌落中心向外形成半径1cm的透明圈，说明沉香内生菌可以用于产纤维素酶。
[0038]实施例3沉香内生菌的应用—用于提取沉香有效成分
[0039]1、沉香内生菌菌液制备：同实施例2。
[0040]2、沉香提取物：称取沉香10.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种沉香内生菌，其特征在于，所述沉香内生菌为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo:22906。2.如权利要求1所述的沉香内生菌的应用，其特征在于，用于产纤维素酶。3.如权利要求1所述的沉香内生菌应用，其特征在于，用于提取沉香有效成分。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述沉香有效成分为沉香四醇。5.如权利要求3所述的应用，其特征在于，将沉香内生菌菌液与沉香提取物混合后共培养。6.如权利要求3所述的应用，其特征在于，将沉香内生菌喷剂与沉香药材混合后提取。7.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述共培养为恒温培养，培养温度为30
‑
40℃，培养时间...

【专利技术属性】
技术研发人员：葛喜珍，杨慧珍，李映，和润莹，
申请(专利权)人：北京联合大学，
类型：发明
国别省市：