一种多食性家蚕的分子育种方法及其应用技术

本发明专利技术属于农业生物技术领域，涉及家蚕育种技术领域，具体涉及一种多食性家蚕的分子育种方法及其应用。本发明专利技术以家蚕味觉受体GR66为靶基因，通过基因编辑技术敲除该基因，改变其食性，促使其能够取食桑叶以外的非寄主植物，从而变成多食性家蚕，获得一种多食性家蚕，大大拓宽了家蚕的食谱，既有利于寻找可替代桑叶的非寄主植物来饲养家蚕，也有利于家蚕的大规模饲养，为大规模家蚕饲养提供了一种新的途径。径。径。

【技术实现步骤摘要】
一种多食性家蚕的分子育种方法及其应用


[0001]本专利技术属于农业生物
，涉及家蚕育种
，具体涉及一种多食性家蚕的分子育种方法及其应用。

技术介绍

[0002]家蚕(Bombyxmori L.)是我国重要的经济昆虫，在很多地方都有大量养殖，形成了规模庞大的蚕桑业。经过长期的人工驯化培养，家蚕只能以桑叶为食物，变成了严格的单食性昆虫。然而，桑树的分布具有较强的地理限制，使得养蚕业主要集中分布于我国的南方区域。并且，由于家蚕只取食新鲜的桑叶，需要专门种植大片的桑树，这不仅会占用大量的土地，也非常不利于大规模饲养。而解决上述问题的关键，是培育多食性的家蚕新品种。
[0003]家蚕幼虫的食性主要决定于位于头部口器上的下颚组织，有研究表明，通过显微手术去除家蚕的下颚，家蚕的食性会大大地拓宽，从而能够取食平时根本不吃的非寄主植物。这主要是因为家蚕的下颚上分布有大量的味觉受体基因，它们负责感受桑叶中特异的次生代谢物。手术去除下颚的同时也会去除这些味觉受体基因，从而使得家蚕不能正确地区分桑叶和非寄主植物，从而能够取食桑叶以外的植物。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多食性家蚕的分子育种方法，其特征在于，通过基因编辑技术使家蚕缺失GR66基因或使家蚕的GR66基因表达量降低，从而培育出多食性家蚕。2.根据权利要求1所述的一种多食性家蚕的分子育种方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、针对家蚕GR66基因设置引物，对家蚕基因组cDNA进行PCR扩增；S2、以家蚕Gr66基因的外显区域作为靶位点合成sgRNA引物，然后通过PCR获得sgRNA的双链DNA，再体外转录合成sgRNA；S3、用步骤S2的sgRNA与cas9蛋白对家蚕基因组DNA进行切割，获取具有体外切割活性的sgRNA；S4、将步骤S3的sgRNA与cas9蛋白一起注入发育早期的家蚕卵内，然后将鉴定出GR66基因发生了移码突变的阳性个体与野生型个体交配，再从下代挑选发生了移码突变的阳性个体进行自交，最后从自交后代中鉴定出纯合的缺失突变体，即为多食性家蚕。3.根据权利要求2所述的一种多食性家蚕的分子育种方法，其特征在于，步骤S1所述引物包括上游引物和下游引物，其中上游引物和下游引物分别如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。4.根据权利要求2所述的一种多食性家蚕的分子育种方法，其特征在于，步骤S1所述PCR扩增的体系为：rTaq酶0.3μL、10
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PCR Buffer 2μL、家蚕cDNA 1μL、上游引物1μL、下游引物1μL、dNTP 2μL、灭菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄立华，江健钊，李时宇，冯兴暴，袁雅菲，杨振文，
申请(专利权)人：华南师范大学，
类型：发明
国别省市：