一种新型胚胎培养液及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种新型胚胎培养液及其制备方法，所述新型胚胎培养液包括如下组分：生理盐、pH缓冲剂、能量物质、能量基质、杀菌剂、阳离子螯合剂、人血清白蛋白和添加剂；其中，所述能量基质包括氨基酸；所述添加剂包括子宫内膜上皮细胞外泌体和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸前体；所述能量物质选自D

【技术实现步骤摘要】
一种新型胚胎培养液及其制备方法


[0001]本专利技术属于辅助生殖
，具体涉及一种新型胚胎培养液及其制备方法。

技术介绍

[0002]随着生物技术的不断进步，人工帮助精子和卵子相互结合的辅助生殖技术得到了巨大发展和应用，该技术可应用于包括人工授精、体外受精、体细胞核移植、胚胎移植等众多领域。辅助生殖技术早已在猪牛羊等一般家畜生产中得到了广泛的应用。通过在畜牧业中使用辅助生殖技术可以实现加速优良家畜品种的遗传改良进程、促进优良种群繁育、生产珍贵的医用蛋白、保护濒危动物等。
[0003]辅助生殖技术在人类生殖医学中的应用也越来越广泛，主要作为治疗人类不孕症的重要手段，同时，也能通过制备人类疾病动物模型来更加深入的研究人类的疾病。对于辅助生殖技术来说，胚胎体外生产是不可缺少的环节，其主要过程包括卵母细胞的体外成熟、体外受精及早期胚胎的体外培养。胚胎培养液作为胚胎细胞体外培养过程中必不可少的组成部分，其对于胚胎细胞的囊胚率和移植成功率具有重要影响，因此目前针对胚胎培养液已有较多研究。
[0004]现有技术，例如，一种犊牛体外胚胎培养液(CN101962626A)，建立了犊牛优质体外胚胎生产的技术规程，包括高效的卵母细胞体外成熟、体外受精、胚胎体外培养技术等，该技术方案中犊牛卵母细胞的体外成熟率分别达到85％，体外受精率达80％，囊胚发育率达到35％；一种提高动物胚胎发育效率的方法(CN114507636A)，公开了在体外胚胎培养液中添加α
‑
酮戊二酸能够显著提高鼠、牛等动物体外发育胚胎的囊胚率、孵化囊胚率、囊胚内细胞团细胞数及其占囊胚细胞总数的比例，进而显著提高了胚胎移植的妊娠率(提高了150％)、产仔率(提高了60％)和幼仔的初生体重(提高了47％)；一种一步式胚胎培养液及其制备方法(CN108048392A)，保留了胚胎分泌入培养液中的有效成分，并添加(
±
)
‑
α
‑
硫辛酸以清除体内氧自由基，同时采用螯合金属离子、再生体内其他抗氧化剂发挥抗氧化作用。
[0005]然而，现有技术主要针对提升牛的胚胎细胞而非人类，牛的耐受性相对人更好，适用于牛的培养液并不能证明适用于人类胚胎。并且，对于状态欠佳受精卵/胚胎，现有技术均未显示出能产生较好的改善效果，还存在较多问题和缺陷，囊胚率和移植成功率较低，严重制约了胚胎体外培养技术的进一步推广和应用。
[0006]因此，亟需在现有报道的基础上，提供新的技术方案，开发更为有效的胚胎培养液及其制备方法。

技术实现思路

[0007]为解决现有技术的不足，本专利技术提供了一种新型胚胎培养液及其制备方法。
[0008]本专利技术的一个目的在于，提供一种新型胚胎培养液，所述新型胚胎培养液包括质量分数如下的组分：
[0009][0010]其中，
[0011]所述能量基质包括氨基酸；
[0012]所述添加剂包括子宫内膜上皮细胞外泌体和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸前体。
[0013]子宫内膜上皮细胞外泌体能在子宫内膜细胞与胚胎细胞相互传递信息(包括RNAs、蛋白质和脂质分子)，从而发挥母胎对话功能，提高胚胎移植成功率，使胚胎顺利着床。烟酰胺腺嘌呤二核苷酸前体(NAD+)缺乏会导致多器官系统的出生缺陷和流产。而NAD+会随着母体年龄增长而减少，超过35岁后，卵母细胞质量变差，与NAD+的减少也有着一定关系。胚胎培养液中添加子宫内膜上皮细胞外泌体，不仅可以提高移植成功率，还与NAD+有着协同作用，使能NAD+对于状态不佳的胚胎细胞的改善有着更好的效果。
[0014]进一步地，所述子宫内膜上皮细胞外泌体的含量为4.0
‑
6.5
×
108个/mL，所述烟酰胺腺嘌呤二核苷酸前体的含量为0.1
‑
0.2g/L。
[0015]进一步地，所述生理盐选自氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钾、硫酸镁中的一种或多种。
[0016]本专利技术中特定组分的生理盐能够保证培养液的渗透压维持在最佳的范围内。
[0017]本专利技术中的人血清白蛋白能够保持溶液稳定，同时保护细胞。
[0018]进一步地，所述pH缓冲剂为碳酸氢钠。
[0019]进一步地，所述能量物质选自D
‑
葡萄糖、L
‑
乳酸钙、丙酮酸钠中的一种或多种。
[0020]进一步地，所述氨基酸选自甘氨酸、L
‑
天门冬酰胺一水合物、L
‑
天门冬氨酸、L
‑
谷氨酸、L
‑
脯氨酸、L
‑
丝氨酸、丙氨酰谷氨酰胺、L
‑
酪氨酸、L
‑
精氨酸盐酸盐、L
‑
组氨酸盐酸盐一水物、L
‑
异亮氨酸、L
‑
亮氨酸、L
‑
蛋氨酸、L
‑
苯丙氨酸、L
‑
色氨酸、L
‑
缬氨酸、L
‑
胱氨酸二盐酸盐、L
‑
苏氨酸、L
‑
赖氨酸盐酸盐中的一种或多种。
[0021]进一步地，所述阳离子螯合剂为乙二胺四乙酸。
[0022]本专利技术中采用乙二胺四乙酸作为阳离子螯合剂能够有效清除对胚胎有害的重金属。
[0023]本专利技术的另一个目的在于，提供上述新型胚胎培养液的制备方法，包括如下步骤：
[0024]S1.将生理盐溶于水中，得到盐溶液；
[0025]S2.将pH缓冲剂、能源物质、氨基酸加入所述盐溶液中；
[0026]S3.加入杀菌剂、人血清白蛋白和阳离子螯合剂；
[0027]S4.加入添加剂，然后经过滤灭菌后，得到所述新型胚胎培养液。
[0028]进一步地，所述杀菌剂为抗生素。
[0029]进一步地，所述抗生素优选为庆大霉素。
[0030]进一步地，所述过滤的滤膜孔径为0.2
‑
0.3μm。
[0031]本专利技术具有以下有益效果：
[0032]本专利技术的新型胚胎培养液，采用多种氨基酸作为能量基质，并与能量物质复配，同时采用子宫内膜上皮细胞外泌体和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸前体作为添加剂，产生了良好的协同效应，有效改善了胚胎的生长状态，可提升普通人类胚胎的囊胚率与移植成功率，从而改善了体外成熟、体外受精以及早期胚胎发育能力。令人意外的，我们发现该新型胚胎培养液对于状态不佳的受精卵，依然可促进胚胎状态好转，从而提升囊胚率与移植成功率，相比现有技术具有显著的提升效果，本专利技术具有良好的应用前景，同时为人工辅助生殖技术提供了借鉴和参考。
附图说明
[0033]图1示出了6～8周龄鼠胚试验囊胚图；
[0034]其中，
[0035]图1A为实施例1囊胚图；
[0036]图1B为对比例1囊胚图。
[0037]图2示出了12～14周龄鼠胚试验囊胚图；<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种新型胚胎培养液，其特征在于，所述新型胚胎培养液包括质量分数如下的组分：其中，所述能量基质包括氨基酸；所述添加剂包括子宫内膜上皮细胞外泌体和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸前体。2.根据权利要求1所述新型胚胎培养液，其特征在于，所述子宫内膜上皮细胞外泌体的含量为4.0
‑
6.5
×
108个/mL，所述烟酰胺腺嘌呤二核苷酸前体的含量为0.1
‑
0.2g/L。3.根据权利要求1所述新型胚胎培养液，其特征在于，所述生理盐选自氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钾、硫酸镁中的一种或多种。4.根据权利要求1所述新型胚胎培养液，其特征在于，所述pH缓冲剂为碳酸氢钠。5.根据权利要求1所述新型胚胎培养液，其特征在于，所述能量物质选自D
‑
葡萄糖、L
‑
乳酸钙、丙酮酸钠中的一种或多种。6.根据权利要求1所述新型胚胎培养液，其特征在于，所述氨基酸选自甘氨酸、L
‑
天门冬酰胺一水合物、L
‑
天门冬氨酸、L
‑
谷氨酸、L
‑
脯氨酸、L
‑
丝氨酸、丙氨酰谷氨酰胺、L
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：董亮亮，郭常亮，邓康为，胡文平，
申请(专利权)人：金宝医学科技深圳有限公司，
类型：发明
国别省市：