一种Diego血型基因分型的引物组、试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术涉及生化分析检测领域，具体涉及一种Diego血型基因分型的引物组、试剂盒及其检测方法，其中，本发明专利技术提供的一种Diego血型基因分型的引物组，包括能够扩增SLC4A1基因中靶标位点为c.1694的引物对；本发明专利技术还提供了一种基于非治疗目的检测Diego血型的方法，包括提取待测血液中的DNA作为模板，以上述的一种Diego血型基因分型的引物组作为扩增引物，进行实时荧光PCR扩增，获得荧光信号与温度变化的熔解曲线，根据熔解曲线判断分型结果。本发明专利技术提供的一种Diego血型基因分型的引物组、试剂盒及其检测方法能够满足快速、精确检测不同Diego血型的需要，实现血型的简单、准确判断。准确判断。准确判断。

【技术实现步骤摘要】
一种Diego血型基因分型的引物组、试剂盒及其检测方法


[0001]本专利技术涉及生化分析检测领域，具体涉及一种Diego血型基因分型的引物组、试剂盒及其检测方法。

技术介绍

[0002]Diego血型系统的基因是SLC4A1(GenBank ID：NG_007498.1)，该基因编码的蛋白质是阴离子交换剂家族的一部分。SLC4A1在红细胞质膜中表达，可作为氯化物/碳酸氢盐交换剂，参与二氧化碳从组织到肺的转运。人类已知该基因有许多突变，这些突变可分为两类。一类可导致疾病，主要是红细胞膜不稳定导致遗传性球形红细胞增多和/或肾脏细胞分泌缺陷导致远端肾小管酸中毒。第二类主要是其他不会引起疾病的突变会产生新的血型抗原，形成Diego血型系统。从突变形式上看，杂合缺失和无义突变也有重要的临床意义。东南亚卵母细胞增多症(SAO，美拉尼西亚卵母细胞增多症)是由于编码蛋白中存在杂合缺失所致，在恶性疟原虫疟疾流行的地区很常见。该基因也有无义突变，可导致非常严重的贫血和肾钙质沉着症。
[0003]Diego血型系统目前发现有23个抗原，具有重要的临床意义。血型不合会引发溶血性输血反应和新生儿溶血病，甚至危及患者生命。常规的方法基于血型血清学技术，需要相对应的抗体试剂，稀少且价格昂贵。考虑到每个抗原对应特定的等位基因，可通过对突变位点进行检测来确定。
[0004]现有的基因检测技术通过桑格法或者高通量测序，获得Diego血型基因的目标序列，然后与标准序列进行比对。桑格法测序需要选定并针对目标序列设计测序引物，测序的结果片段因人而异，所测序列的质量和准确度也因待测对象和引物的不同而不同。高通量测序能够获得较长的目标序列，然而需要多次重复检测进行拼接，较为耗时费力，而且成本高，只有某些样本有特殊需求才用。还有用凝胶电泳基因分型的方法，操作相对简单，缺点也很明显，譬如较为费时；不便于实现自动化；精确度不高；位点设计单一。
[0005]可见，以前的试剂和方法难以满足临床日益增长的检测需求。

技术实现思路

[0006]因此，本专利技术要解决的技术问题在于提供一种Diego血型基因分型的引物组、试剂盒及其检测方法(荧光PCR法)，以满足快速、精确检测不同Diego血型的需要。
[0007]为此，本专利技术提供了如下的技术方案：
[0008]一种Diego血型基因分型的引物组，包括能够扩增SLC4A1基因中靶标位点为c.1694的引物对。
[0009]所述靶标位点为c.1694的引物对为靶标位点为c.1694G的引物对或/和靶标位点为c.1694G>C的引物对。
[0010]所述扩增靶标位点为c.1694G的引物对，其上游引物序列如SEQ IDNO.1所示，其下游引物序列如SEQ ID NO.2所示；
[0011]所述扩增靶标位点为c.1694G>C的引物对，其上游引物序列如SEQ IDNO.3所示，其下游引物序列如SEQ ID NO.4所示。
[0012]本专利技术的引物组还包括扩增SLC4A1基因中靶标位点为c.1972的引物对，优选为扩增靶标位点为c.1972G的引物对或/和靶标位点为c.1972G>A的引物对。
[0013]所述扩增靶标位点为c.1972G的引物对中，其上游引物序列如SEQ IDNO.5所示，其下游引物序列如SEQ ID NO.6所示；
[0014]所述扩增靶标位点为c.1972G>A的引物对中，其上游引物序列如SEQ ID NO.7所示，其下游引物序列如SEQ ID NO.8所示。
[0015]本专利技术的引物组还包括扩增SLC4A1基因中靶标位点为c.2561C或/和c.2561C>T的引物对；
[0016]优选的，所述扩增靶标位点为c.1972G>A的引物对中，其上游引物序列如SEQ ID NO.7所示，其下游引物序列如SEQ ID NO.8所示；
[0017]所述扩增靶标位点为c.2561C的引物对中，其上游引物序列如SEQ IDNO.9所示，其下游引物序列如SEQ ID NO.10所示；
[0018]所述扩增靶标位点为c.2561C>T的引物对中，其上游引物序列如SEQ ID NO.11所示，其下游引物序列如SEQ ID NO.12所示。
[0019]一种试剂盒，包括上述的一种Diego血型基因分型的引物组。
[0020]本专利技术中的一种试剂盒，还包括孔板，针对不同靶标位点扩增的引物对分别设置在孔板的不同孔中；
[0021]优选的，针对相同靶标位点的不同变异设置不同的引物对，相同靶标位点的不同引物对设置在相邻的两个孔中；
[0022]更为优选的，所述孔板至少包括一组孔槽，每组孔槽包括6个孔，每组孔槽的每个孔分别包括靶标位点为c.1694G、c.1694G>C、c.1972G、c.1972G>A、c.2561C和c.2561C>T的引物对；
[0023]和/或，每个孔中均无额外设置内参引物。
[0024]一种基于非治疗目的检测Diego血型的方法，包括提取待测血液中的DNA作为模板，以上述的引物组作为扩增引物，进行实时荧光PCR扩增，获得荧光信号与温度变化的熔解曲线，判断分型结果。
[0025]所述实时荧光PCR扩增的PCR扩增程序为：
[0026][0027]熔解曲线的采集条件采用现有公开条件均可；优选的，熔解曲线的采集条件为:每秒升温0.4℃，每0.5℃采集1次荧光值，采集温度范围60
‑
98℃。
[0028]本专利技术技术方案，具有如下优点：
[0029]1.本专利技术提供了基于Diego血型抗原基因位点设计专一性引物，包括能够扩增SLC4A1基因中靶标位点为c.1694的引物，利用该引物结合荧光染料进行实时荧光PCR扩增及熔解曲线反应，当引物序列与待测序列互补时，通过PCR反应将目的片段复制与放大，再通过熔解曲线的荧光信号与温度变化，检测特异性产物在双链解离50％时的温度(Tm)，通过温度(Tm)即可判断是否存在特异性扩增，有特异性扩增产物即代表该靶标位点为阳性，无特异性扩增即为阴性，进而有效实现血型的简单、准确判断。
[0030]2.本专利技术优选提供6组引物对，分别针对不同靶标位点进行准确扩增，六对引物均能有效避开目前为止发现的突变位点，具有检测准确度好的优势，并且，结合所设计的反应体系能提高PCR扩增的效率和准确度。
[0031]3.本专利技术提供的试剂盒中，其中孔板至少包括一组孔槽，且每组孔槽包括6个孔，每组孔槽的每个孔分别包括靶标位点为c.1694G、c.1694G>C、c.1972G、c.1972G>A、c.2561C和c.2561C>T的引物对；每组孔槽可以适应一人份检测，当孔板中孔槽有多组时，即可适用于多人份检测。
[0032]4.本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种Diego血型基因分型的引物组，其特征在于，包括能够扩增SLC4A1基因中靶标位点为c.1694的引物对。2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述靶标位点为c.1694的引物对为靶标位点为c.1694G的引物对或/和靶标位点为c.1694G>C的引物对。3.根据权利要求2所述的引物组，其特征在于，所述扩增靶标位点为c.1694G的引物对，其上游引物序列如SEQ ID NO.1所示，其下游引物序列如SEQ ID NO.2所示；所述扩增靶标位点为c.1694G>C的引物对，其上游引物序列如SEQ IDNO.3所示，其下游引物序列如SEQ ID NO.4所示。4.根据权利要求1
‑
3任一项所述的引物组，其特征在于，还包括扩增SLC4A1基因中靶标位点为c.1972的引物对，优选为扩增靶标位点为c.1972G的引物对或/和靶标位点为c.1972G>A的引物对。5.根据权利要求4所述的引物组，其特征在于，所述扩增靶标位点为c.1972G的引物对中，其上游引物序列如SEQ ID NO.5所示，其下游引物序列如SEQ ID NO.6所示；所述扩增靶标位点为c.1972G>A的引物对中，其上游引物序列如SEQ ID NO.7所示，其下游引物序列如SEQ ID NO.8所示。6.根据权利要求1
‑
5任一项所述的引物组，其特征在于，还包括扩增SLC4A1基因中靶标位点为c.25...

【专利技术属性】
技术研发人员：高宏军，陈玉平，王布强，陈芳芳，吴明磊，
申请(专利权)人：江苏中济万泰生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：