TRIM65-TPIT复合体在制备治疗库欣病药物中的用途制造技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，涉及TRIM65

【技术实现步骤摘要】
TRIM65
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TPIT复合体在制备治疗库欣病药物中的用途


[0001]本专利技术属于生物医药
，涉及靶向TRIM65
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TPIT复合体的小分子药用用途。具体涉及TRIM65
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TPIT复合体在制备治疗库欣病药物中的用途，尤其是TRIM65
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TPIT靶点在制备治疗垂体瘤药物中的用途。

技术介绍

[0002]资料公开了库欣病是一种由垂体促肾上腺皮质激素(Adrenocorticotropic Hormone,ACTH)腺瘤引起的疾病，发病率约1.6例/百万人，病程往往呈慢性、进行性、耗竭性地发展，常涉及多系统、多脏器。该疾患主要以垂体ACTH微腺瘤为主(平均6mm)，好发于年龄35
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44岁之间的年轻女性，其症状并非肿瘤的占位效应，而主要是激素的异常分泌所引发。由于持续的高皮质醇血症，患者常出现一系列代谢紊乱综合征和并发症，如高血压、糖尿病、高脂血症、骨质疏松、低钾血症、抑郁、焦虑以及认知功能损害等，严重影响患者的生活质量，甚至造成残疾或危及生命。
[0003]临床治疗实践中，对于绝大多数库欣病患者而言，经蝶手术切除是临床首选一线治疗，放射治疗及多巴胺受体激动剂、生长抑素类似物、酮康唑、吉非替尼等药物治疗则作为难治性库欣病的术后辅助治疗。由于肿瘤自身生物学行为的不同及术者操作水平的差异，其手术生化缓解率和复发率差别较大，总的初始缓解率在25
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100％，平均缓解率77.8％；肿瘤复发率为0
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65.6％，平均复发率13.2％，平均复发时间为13.6
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66个月，复发患者预后较差，病死率高。若激素水平得不到有效的控制，患者人群将呈现很高的病死率和病残率。
[0004]现有技术中，随着对垂体腺瘤研究的不断深入，其病理诊断更加精准化。2017版WHO垂体肿瘤分类系统地根据细胞分化起源相关的转录因子将垂体腺瘤分为三个细胞谱系：嗜酸谱系(Acidophilic lineage)、促肾上腺皮质激素谱系(Corticotroph lineage)和性腺谱系(Gonadotroph lineage)。促肾上腺皮质激素谱系垂体腺瘤以表达POMC(ACTH前体)基因上游转录因子TPIT为特征，免疫组化ACTH呈阳性染色。促肾上腺皮质激素谱系特征转录因子TPIT由加拿大学者Drouin教授团队首次发现并命名，在ACTH分泌细胞的细胞分化命运和激素分泌中起决定作用。该研究团队发现TPIT只在垂体组织中的POMC细胞(而非其他内分泌细胞)中特异性表达，通过调控ACTH前体POMC的转录，使POMC细胞分泌ACTH；并且TPIT还可通过调控转录因子Creb3l2和XBP1的转录以加强垂体细胞翻译、转运和分泌的能力并消除细胞内蛋白质应激反应。
[0005]迄今尚未见关于库欣病关键转录因子TPIT的泛素化调控研究报道。细胞内TPIT的表达水平是否存在泛素化降解途径？已引起本领域技术人员的关注，本研究团队前期研究发现蛋白酶体抑制剂MG132处理ACTH分泌细胞系AtT20，可引起TPIT蛋白水平上调，放线菌酮(CHX)在同等处理时间下能够有效抑制TPIT蛋白的表达；内源性蛋白免疫沉淀实验结果验证TPIT明显存在Ub的结合，表明TPIT确实存在泛素化降解。既然TPIT存在泛素化降解，如何寻找并确定TPIT的泛素连接酶E3便成为当务之急。
[0006]基于现有技术的现状，本申请的专利技术人拟提供TRIM65
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TPIT复合体新的药用用途，具体涉及TRIM65
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TPIT靶点在制备治疗库欣病药物中的用途。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的是基于现有技术的现状，提供TRIM65
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TPIT复合体新的药用用途，具体涉及TRIM65
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TPIT靶点在制备治疗垂体瘤药物中的用途。
[0008]本申请采用来自于Clontech的GAL4酵母双杂交系统，鉴定出TPIT的3个候选泛素E3连接酶TRIM65、TRIM5和CCNB1IP1。TRIM65(Tripartite motif containing 65)蛋白，作为一种泛素相关蛋白，在胞浆内表达，靶向作用于复制复合体参与RNA复制的降解。该蛋白在影响细胞周期、抗病毒、肿瘤的发生中等扮演重要的作用，其已知的作用底物包括TP53、AXIN1、ANXA2和ARHGAP35。本申请经进一步实验证实，泛素化E3连接酶TRIM65可与TPIT蛋白直接结合。
[0009]本申请提供了TRIM65
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TPIT靶点在制备治疗库欣病药物中的用途。尤其是TRIM65
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TPIT靶点在制备治疗垂体瘤药物中的用途。
[0010]本专利技术中，TPIT只在POMC表达肿瘤中表达，所述的TRIM65
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TPIT靶点只在ACTH腺瘤中发挥作用，通过抑制POMC转录控制ACTH激素的合成和分泌，从而达到治疗库欣病的目的。
[0011]本专利技术的实施例中，在ACTH腺瘤细胞系ATT
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20/D16v.2细胞和过表达Flag标记的TPIT(Flag
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TPIT)的人胚胎肾T(HEK293T)细胞中，用10μg/ml放线菌酮(CHX)抑制蛋白合成，结果显示，内源性和外源性TPIT蛋白都存在着降解。进一步研究TPIT的泛素化分子机制，通过酵母双杂交(Y2H)筛选TPIT的E3泛素连接酶，测序筛选出TRIM65可能是TPIT的E3泛素连接酶；然后，进行免疫共沉淀(Co
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IP)、免疫荧光和GST pull
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down实验，结果表明TRIM65结合并泛素化TPIT。本申请的机制研究结果表明：敲减TRIM65后，胞内TPIT和ACTH蛋白水平明显升高，胞外ACTH含量升高；反之，过表达TRIM65后，胞内TPIT和ACTH蛋白水平明显降低，胞外ACTH含量降低。
[0012]本专利技术经体外细胞试验证实了TPIT存在泛素化降解；然后通过一系列体外实验筛选并验证TRIM65是TPIT的泛素化E3连接酶；最后经体内外实验再度证明TRIM65通过泛素化降解TPIT从而影响TPIT的下游POMC的转录以及ACTH的产生。
[0013]本专利技术的实验结果表明，所述的TRIM65
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TPIT复合体可用于制备治疗库欣病药物靶点，为临床治疗库欣病尤其是隐匿性库欣病提供新的策略参考。
[0014]本专利技术所述的TRIM65
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TPIT靶点可用于制备治疗垂体瘤的药物。
[0015]为了便于理解，以下将通过具体的附图和实施例对本专利技术进行详细地描述。需要特别指出的是，具体实例和附图仅是为了说明，显然本领域的普通技术人员可以根据本文说明，在本专利技术的范围内对本专利技术做出各种各样的修正和改变，这些修正和改变也纳入本专利技术的范围内。
附图说明
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.TRIM65
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TPIT复合体在制备治疗库欣病药物中的用途；所述的TRIM65是TPIT的泛素化E3连接酶，TPIT是ACTH腺瘤的特异转录因子，降解TPIT可控制ACTH腺瘤的异常分泌，从而控制库欣病。2.按权利要求1所述的用途，其特征在于，所述TRIM65通过泛素化降解TPIT从而影响...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴哲褒，姚泓，刘衍挺，谢万群，顾威庭，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属瑞金医院，
类型：发明
国别省市：