一种修复型中性粒细胞的分类、诱导活化方法及其用途技术

本发明专利技术公开一种修复型中性粒细胞的诱导、分类方法及其用途。其中修复型中性粒细胞为CD45

【技术实现步骤摘要】
一种修复型中性粒细胞的分类、诱导活化方法及其用途


[0001]本专利技术涉及免疫学和再生医学领域，具体地涉及一种修复型中性粒细胞的分类、诱导活化方法及其用途。

技术介绍

[0002]随着对免疫系统研究的深入，近几年通过免疫细胞调控组织再生修复已成为研究热点。有研究表明免疫反应是调控组织再生的重要因素。其中免疫细胞促进修复的作用被逐渐认识到。然而，目前对修复型免疫细胞的认识主要集中在巨噬细胞。而中性粒细胞被普遍认为是组织损伤发生时清除坏死组织，引发炎症反应的免疫细胞，对其促修复功能的研究较少，导致如何更好地利用免疫细胞的调控作用促进组织修复还不够清楚。修复型中性粒细胞对临床修复受损组织可能存在重要影响。
[0003]中国专利申请CN114891728A公开了一种聚电解质膜、巨噬细胞外泌体及其在促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化中的应用，其通过将M0巨噬细胞接种于涂覆聚电解质膜的培养器皿中，并收集含有巨噬细胞外泌体的培养液上清液；从培养液上清液中提取巨噬细胞外泌体，利用巨噬细胞外泌体可以促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化。不过，该方法利用巨噬细胞外泌体可以促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化未经过动物实验验证，临床效果的稳定性难以保证。
[0004]中国专利申请CN111529757A公开了一种人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)用于制备骨再生产品的用途，其利用人羊膜间充质干细胞的免疫调节作用优化骨缺损微环境，促血管化骨再生的M2巨噬细胞聚集，分泌促血管新生和成骨活性因子，刺激内源性骨再生。该申请所使用的人羊膜间充质干细胞来源是无传染性疾病剖宫产新鲜胎盘组织，其来源少，且涉及到剖宫产患者的知情同意及伦理要求，因此其临床推广和应用受到限制。
[0005]
技术介绍
中的信息仅仅在于说明本专利技术的总体背景，不应视为承认或以任何形式暗示这些信息构成本领域一般技术人员所公知的现有技术。

技术实现思路

[0006]为解决现有技术中的至少部分技术问题，本专利技术提供一种修复型中性粒细胞的分类、诱导活化方法及其用途。具体地，本专利技术包括以下内容。
[0007]本专利技术的第一方面，提供一种分离的修复型中性粒细胞，其中，所述分离的修复型中性粒细胞为CD45
+
Ly6G
+
CD54
+
CD274
+
GLUT1
+
细胞亚群。
[0008]在某些实施方案中，根据本专利技术所述的分离的修复型中性粒细胞，其中，所述修复型是指当使用物理电刺激所述细胞亚群时能够诱导该细胞亚群的促血管化功能。
[0009]在某些实施方案中，根据本专利技术所述的分离的修复型中性粒细胞，其中，所述物理电刺激包括压电材料、铁电材料，或者直流电、交流电、电磁场等提供的电刺激信号。
[0010]本专利技术的第二方面，提供一种修复型中性粒细胞的制备方法，其中，所述方法包括诱导中性粒细胞表达CD54、CD274和GLUT1的步骤，或者通过基因工程手段使中性粒细胞过
表达CD54、CD274和GLUT1的步骤，或者分离修复型中性粒细胞的步骤。
[0011]本专利技术的第三方面，提供一种中性粒细胞的分类方法，其中，所述方法包括检测中性粒细胞表面或内部标志蛋白或其mRNA的步骤，其中，所述标志蛋白包括CD54、CD274和GLUT1；可选地，进一步包括鉴定中性粒细胞的步骤，优选地，通过CD45、Ly6G来鉴定所述中性粒细胞。
[0012]在某些实施方案中，根据本专利技术所述的中性粒细胞的分类方法，其中，进一步包括将CD45
+
Ly6G
+
CD54
+
CD274
+
GLUT1
+
细胞分类为修复型中性粒细胞。
[0013]在某些实施方案中，根据本专利技术所述的中性粒细胞的分类方法，其中，进一步包括将CD45
+
Ly6G
+
CD54
‑
CD274
‑
GLUT1
‑
细胞分类为非修复型中性粒细胞。
[0014]本专利技术的第四方面，提供一种用于活化修复型中性粒细胞的方法，其中，包括使用物理电刺激第一方面所述的修复型中性粒细胞的步骤。
[0015]在某些实施方案中，根据本专利技术所述的用于活化修复型中性粒细胞的方法，其中，所述活化是指表达或增强表达VEGF、CXCL16、MMP9、Proliferin和Osteopontin中的至少一种。
[0016]本专利技术的技术效果包括但不限于：(1) 本专利技术的具有修复功能的中性粒细胞亚群是首次被发现的能被电刺激诱导后发挥促修复功能的免疫细胞亚群，其在电学微环境的诱导下能够被激活细胞内的钙信号通路，进而发挥例如促进组织修复的功能。
[0017](2) 本专利技术的具有修复功能的中性粒细胞亚群在动物体内具有良好的促进血管化、促进成骨的作用，可用于组织修复治疗，很好的解决了目前临床上骨缺损修复效果不佳的问题。
[0018](3) 本专利技术的制备工艺简单，操作简便，可以实现批量生产及临床上的推广应用。
附图说明
[0019]图1
‑
2示出了治疗性的电刺激敷贴（TESP）在早期骨再生过程中增加中性粒细胞浸润。
[0020]图3
‑
4示出了TESP募集中性粒细胞。
[0021]图5
‑
6示出了Neu1是独特的修复型中性粒细胞亚群。
[0022]图7
‑
9示出了TESP显著升高了Neu1的胞内Ca
2+
浓度。
[0023]图10
‑
15示出了TESP通过Ca
2+
/CaMKII信号通路激活Neu1促血管生成功能。
[0024]图16示出了修复型中性粒细胞用于骨修复效果的验证。
具体实施方式
[0025]现详细说明本专利技术的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本专利技术的限制，而应理解为是对本专利技术的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
[0026]应理解本专利技术中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本专利技术。另外，对于本专利技术中的数值范围，应理解为具体公开了该范围的上限和下限以及它们之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本专利技术内。这些较小范围的上限和下限可独立
地包括或排除在范围内。
[0027]除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本专利技术所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本专利技术仅描述了优选的方法和材料，但是在本专利技术的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。除非另有说明，否则“%”为本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分离的修复型中性粒细胞，其特征在于，其为CD45
+
Ly6G
+
CD54
+
CD274
+
GLUT1
+
细胞亚群。2.根据权利要求1所述的分离的修复型中性粒细胞亚群，其特征在于，所述修复型是指当使用物理电刺激所述细胞亚群时或刺激所述细胞亚群后能够引发细胞内的钙离子流。3.根据权利要求2所述的分离的修复型中性粒细胞亚群，其特征在于，由所述细胞内的钙离子流进一步引发组织修复。4.一种修复型中性粒细胞的制备方法，其特征在于，所述方法包括诱导中性粒细胞表达CD54、CD274和GLUT1的步骤，或者通过基因工程手段使中性粒细胞过表达CD54、CD274和GLUT1的步骤，或者从细胞群中鉴定并分离所述修复型中性粒细胞的步骤。5.一种中性粒细胞的分类方法，其特征在于，包括检测中性粒细胞表面或内部标志蛋白或其mRNA的步骤，其中，所述标志蛋白包括CD54、CD274和GLUT1中的至少之一；进一步包括鉴定中性粒细胞的步骤，通过CD45、Ly6G来鉴定所述中性粒细胞。6.根据权利要求5所述的中性粒细...

【专利技术属性】
技术研发人员：张学慧，游富平，邓旭亮，郑晓娜，郭亚茹，
申请(专利权)人：北京大学口腔医学院，
类型：发明
国别省市：