一种宽裂解谱的沙门氏菌噬菌体及噬菌体组合物和应用制造技术

本发明专利技术公开了一种宽裂解谱的沙门氏菌噬菌体及噬菌体组合物和应用，具体涉及微生物技术领域。所述噬菌体为噬菌体16

【技术实现步骤摘要】
一种宽裂解谱的沙门氏菌噬菌体及噬菌体组合物和应用


[0001]本专利技术涉及微生物
，具体涉及一种宽裂解谱的沙门氏菌噬菌体及噬菌体组合物和应用。

技术介绍

[0002]沙门氏菌是一种常见的食源性病原菌，该菌主要感染人和动物，每年全球约有9380万人因感染沙门氏菌引起腹泻，也给全世界范围内的养殖业造成了重大的经济损失。研究发现，在食品链的各环节中，污染沙门氏菌最严重的是养殖的环节，但菌株血清型别比较单一；其次是零售的环节，但血清型种类丰富；污染相对较低的是屠宰的环节。在我国，沙门氏菌在肉类食品中的检出率20％左右。而鸡肉类产品的污染更为严重，甚至可以达到45.2％。蛋类食品的沙门氏菌污染主要是由于粪便引起的，多数沙门氏菌主要在蛋壳上检出，但是由于生殖道感染或蛋壳破碎，也会导致鸡蛋内部的沙门氏菌污染。
[0003]抗生素是治疗细菌性疾病最有效的手段之一，因为其抗菌效果好、副作用小和价格低等特点被广泛应用于各种动物疾病的预防和治疗，同时还被作为饲料添加剂加入多种畜禽的饲料中。但由于抗生素在动物生产中的滥用，很多细菌都产生了相应的耐药性，细菌耐药性不仅严重影响了养殖业，也对人类的生命健康安全造成了重大威胁。
[0004]噬菌体(phage)是一种能够特异性感染细菌的病毒，广泛存在于各种环境中，如粪便、土壤、水源甚至人和动物体内。依据其生物学生长周期，噬菌体主要分为两大类：裂解性噬菌体(又称为烈性噬菌体)和溶原性噬菌体(又称为温和噬菌体)。裂解性噬菌体可以通过吸附、侵入、增殖、装配和释放五个过程将宿主细菌裂解并释放子代噬菌体；溶原性噬菌体可以将其基因整合在宿主细菌上，可随细菌染色体的复制而复制。
[0005]由于目前细菌耐药的问题愈发严重，而新型抗生素的研发变得相对缓慢，噬菌体疗法作为一种可能的替代疗法重新引起了人们的兴趣。噬菌体鸡尾酒是噬菌体应用中最常见的一种方法，它将多种噬菌体按一定比例混合后制成的。相比于单一噬菌体制剂，噬菌体鸡尾酒治疗过程中更难以出现噬菌体耐受菌株，裂解效果更好，是噬菌体疗法中最常出现的方法。噬菌体鸡尾酒不仅可以应用在治疗多重耐药菌，还可以应用于养殖业和食品工业。
[0006]但当前噬菌体制剂也存在一些不足。(1)宿主谱窄。某些噬菌体只裂解一种宿主菌，不能有效杀灭食品中的其他致病菌，单一噬菌体的制剂难以达到像抗生素等抗菌剂的广谱抗菌作用。(2)稳定性差。噬菌体在特定的环境影响中(例如：温度、紫外线、pH等)，效价下降的非常快，导致抑菌的作用持续时间非常短。(3)应用噬菌体制剂后对其应用环境中其他菌群的影响。

技术实现思路

[0007]为此，本专利技术提供一种宽裂解谱的沙门氏菌噬菌体及噬菌体组合物和应用，以解决现有噬菌体宿主谱窄、稳定性差等问题。
[0008]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0009]根据本专利技术第一方面提供的一种宽裂解谱的沙门氏菌噬菌体，所述噬菌体为噬菌体16
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7w或噬菌体235c1；根据透射电镜形态学显示，所述噬菌体16
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7w属于肌尾病毒科，噬菌体235c1属于短尾噬菌体科。
[0010]噬菌体的基因组分析：噬菌体16
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7w的基因组为双链DNA，基因组大小为155665bp，G+C的含量为50％。通过BlastN在线比对工具，发现与其相似度最高的菌株为志贺氏菌噬菌体MK
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13，相似度为97.6％，序列覆盖度为88％。通过RAST注释，共注释出200个开放阅读框(ORF)，有129个ORFs为假定蛋白序列，其余71个ORFs为已知功能蛋白。噬菌体235c1的基因组为双链DNA，基因组大小为42111bp，G+C的含量为47％，与其相似度最高的菌株为沙门氏菌噬菌体SE22，相似度为99.89％，序列覆盖度为80％。通过RAST注释，235c1基因组共注释出67个ORFs，其中有14个ORFs为假想蛋白序列，其余53个ORFs为已知功能蛋白。
[0011]进一步的，所述噬菌体属于烈性噬菌体。
[0012]进一步的，所述噬菌体保藏于北京工商大学，轻工科学技术实验室，保藏条件为：噬菌体裂解液在4℃低温冷藏或在
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80℃冷冻；间隔半年至一年，将所保藏的噬菌体活化后重新保藏，保藏编号16
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7w为XYLCC NO:P20200001；235c1为XYLCC NO:P20200002。
[0013]根据本专利技术第二方面提供的一种宽裂解谱的沙门氏菌噬菌体组合物，所述组合物包括噬菌体16
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7w，噬菌体235c1中的一种或几种。
[0014]进一步的，所述噬菌体的总含量为1
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107PFU/mL。
[0015]根据本专利技术第三方面提供的一种宽裂解谱的沙门氏菌噬菌体组合物在制备防治沙门氏菌感染的产品中的应用。
[0016]进一步的，所述产品包括药物、饲料添加剂、清洁剂和消毒剂。
[0017]进一步的，所述组合物中，噬菌体16
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7w的潜伏期在10min以内，爆发期为40min，爆发量为20.9PFU/cell；噬菌体235c1的潜伏期为20min，爆发期为50min，爆发量为57.1PFU/cell。
[0018]进一步的，所述沙门氏菌包括肠炎沙门氏菌，德尔卑沙门氏菌，鼠伤寒沙门氏菌，火鸡沙门氏菌，吉伟沙门氏菌，病牛沙门氏菌中的一种或几种。
[0019]保藏屠宰车间最常检出的肠炎沙门氏菌为宿主筛选到宽谱噬菌体16
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7w,国内食品中最常出现的德尔卑沙门氏菌为宿主，筛选到宽谱噬菌体235c1。噬菌体16
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7w在60℃以下可以保持稳定，80℃时235c1可在60min内保持稳定。16
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7w和235c1皆为宽谱噬菌体。对16
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7w和235c1两株噬菌体进行体外裂解实验，结果表明1h内高浓度的宿主菌大幅度下降。将两株噬菌体混合成为噬菌体鸡尾酒制剂后应用在鸡肉表面时，杀菌的效果优于单一噬菌体，且杀菌率能够达到99.75％。
[0020]本专利技术具有如下优点：
[0021]本专利技术的噬菌体属于烈性噬菌体，是一种天然的杀菌物质；本专利技术的噬菌体在宿主体内潜伏期短，爆发量大，裂解效果好，抗菌效果好；本专利技术的噬菌体具有较高的稳定性，能够更好的抗酸碱以及抗高温的能力，可以保证其在不同环境下的存活时间，可为噬菌体制剂提供更广的应用环境。
[0022]由本专利技术的实施例可见，与现有的噬菌体相比，本专利技术由噬菌体16
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7w和噬菌体235c1混合后的混合噬菌体，在短时间内杀灭肠炎沙门氏菌和韦太弗雷登沙门氏菌效果更好；且将两株噬菌体混合成为噬菌体鸡尾酒制剂后应用在鸡肉表面时，杀菌率能够达到
99.75％。
附图说明
[0023]为了更清楚地说明本专利技术的实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对实施方式或现有技术描述中所需要本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种宽裂解谱的沙门氏菌噬菌体组合物，其特征在于，所述组合物包括噬菌体16
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7w和噬菌体235c1。2.根据权利要求1所述一种宽裂解谱的沙门氏菌噬菌体组合物，其特征在于，所述噬菌体的总含量为1
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107PFU/mL以上。3.一种宽裂解谱的沙门氏菌噬菌体组合物在制备防治沙门氏菌感染的产品中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述产品包括药物、饲料添加剂、清洁剂和消毒剂。5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述组合物中，噬菌体16
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7w的最佳感染复数为0.1；噬菌体235c1的最佳感染复数为0.0001。6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述组合物中，噬菌体16
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7w的潜伏期在10min以内，爆发期为40min，爆发量为20.9PFU/cell；噬菌体235c1的潜伏期为20min，爆...

【专利技术属性】
技术研发人员：闫怡，卢昕，徐嘉良，李佳，
申请(专利权)人：北京工商大学，
类型：发明
国别省市：