【技术实现步骤摘要】
一种靶向活化型肝星状细胞核酸适配体APT8的筛选方法
[0001]本专利技术涉及生物医学领域，具体讲，涉及一种核酸适配体及其用途。
技术介绍
[0002]核酸适配体是利用指数富集的配基系统进化技术(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment technology，SELEX)，在体外经过多轮筛选获得的、能够特异性识别靶物质的单链寡核苷酸。核酸适配体具有特异性高、亲和性高、稳定性强、易化学合成和化学修饰等诸多优点。目前核酸适配体作为一类新型的、广受关注的检测和治疗工具，在人类医学研究、疾病诊断、病毒侵染机制研究等领域展现出广阔的应用前景。近20年，大量与肿瘤以及其他疾病相关的重要分子的适配体已被筛选出来应用于生物医学基础研究、疾病诊疗和药物研发之中。Pegaptanib(商品名Macugen)是第一个被美国FDA批准上市用于治疗老年性黄斑变性的适配体药物。还有Aptamera公司研制的核酸适配体药物AS1411，经临床试验研究表明，AS1411对乳腺癌、宫...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.靶向活化肝星状细胞核酸适配体的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）提供随机单链DNA文库，所述单链DNA文库包括下式表示的单链5'ATCCAGAGTGACGCAGCA(45N)TGGACACGGTGGCTTAGT3'，其中N45表示中间为45bp随机序列；以SEQ ID NO：8
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9所示的核苷酸序列的引物对制备次级文库；（2）单链DNA文库经变性后依次经正常肝脏细胞进行阴性筛选、HSC细胞进行阳性筛选获得第一轮筛选产物，所述的正常肝脏细胞包括肝细胞、肝窦内皮细胞或枯否细胞；（3）以SEQ ID NO：8
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9所示的核苷酸序列的引物对第一轮筛选产物进行PCR扩增，获得第二轮筛选产物；（4）依次类推，由上一轮核酸适配体文库经变性、正常肝细胞进行阴性筛选、HSC细胞进行阳性筛选获得上一轮筛选产物，然后以步骤(1)所述引物对上一轮筛选产物进行PCR扩增获得下一轮核酸适配体文库；共筛选5轮，最终获得核酸适配体，所述的核酸适配体的核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示的DNA片段的核苷酸序列。2.根据权利要求1所述的靶向活化肝星状细胞核酸适配体的筛选方法，其特征在于，阴性筛选过程中在37℃的恒温摇床下，以120
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150rpm孵育30
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50min；阳性筛选过程中，HSC细胞经消化、稀释后制得细胞悬液，将该细胞悬液在37℃的恒温摇床下，以120
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150rpm孵育60
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80min。3.根据权利要求1所述的靶向活化肝星状细胞核酸适配体的筛选方法，其特征在于，所述PCR扩增条件为：95℃5min；94℃30c，56
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67℃30s，72℃30s，35个循环；72℃5min；所述PCR循环条件为：95℃5min；94℃30c，55
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66℃30s，72℃30s，19
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3...
【专利技术属性】
技术研发人员：马岚，杨雪，吴江锋，柳长柏，谭勇，倪毅然，
申请(专利权)人：三峡大学，
类型：发明
国别省市：
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