具有改变的特异性的工程化的N-糖基转移酶制造技术

本发明专利技术公开了用于在体外和体内合成糖蛋白或重组糖蛋白的组合物、系统和方法。特别地，本发明专利技术涉及修饰的N

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有改变的特异性的工程化的N
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糖基转移酶
关于联邦资助研究或开发的声明
[0001]本专利技术是在美国国防威胁降低局授予的11631647(HDTRA1
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15
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10052/P00011)和美国国家科学基金会授予的DGE
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1324585的政府支持下完成的。美国政府对本专利技术有一定的权利。相关专利申请的交叉引用
[0002]本申请根据35 U.S.C.
§
119(e)要求在2020年7月14日提交的美国临时申请号63/051,825的优先权，其内容通过引用并入本文。
专利

[0003]本专利技术一般地涉及用于糖蛋白蛋白合成的组分、系统和方法。特别地，本专利技术涉及具有改变的特异性的新型N
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糖基转移酶的鉴定及其在细胞中、使用纯化的酶或在无细胞蛋白质合成(CFPS)中合成糖蛋白和重组糖蛋的用途。专利技术背景
[0004]蛋白质糖基化在调节蛋白质治疗剂的活性和功效方面发挥的重要作用推动了活细菌中和在体外的合成糖基化系统的发本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种修饰的N
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糖基转移酶(NGT)，其选自下组或其同源物：(i)在氨基酸位置F39、R177、H214、D215、M218、H219、Y222、H272、H277、S278、I279、R281、M349、G370、H371、T438、T439、M440、K441、A469(Q469)、H495、P497、Y498、F517、N521和D525处包含一个或多个取代的放线杆菌属物种(Actinobacillus spp.)(任选地修饰的SEQ ID NO:1的胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae)的NGT)；(ii)在氨基酸位置F42、R181、H218、D219、M222、H219、Y223、H276、H281、S282、I283、R285、M354、G375、H376、T443、T444、M445、K446、A474(Q474)、H500、P502、Y503、F522、N526和D530处包含一个或多个取代的金氏菌属物种(Kingella spp.)(任选地修饰的SEQ ID NO:2的金氏金格杆菌(Kingella kingae)的NGT)；(iii)在氨基酸位置F68、R204、H241、D242、M245、H246、Y249、H298、H303、S304、I305、R307、M375、G396、H397、T464、T465、M466、K467、A495(Q495)、H521、P523、Y524、F543、N547和D551处包含一个或多个取代的嗜血杆菌属物种(Haemophilus spp.)(任选地修饰的SEQ ID NO:3的肺炎嗜血杆菌(Haemophilus pneumoniae)的NGT)；(iv)在氨基酸位置F39、R177、H214、D215、M218、H219、Y222、H270、H275、S276、I277、R279、M348、G369、H370、T437、T438、M439、K440、A468(Q468)、H494、P496、Y497、F516、N520和D524处包含一个或多个取代的聚集杆菌属物种(Aggregatibacter spp.)(任选地修饰的SEQ IDNO:4的嗜沫聚集杆菌(Aggregatibacter aphrophilus)的NGT)；(v)在氨基酸位置F39、R177、H214、D215、M218、H219、Y222、H272、H277、S278、I279、R281、M349、G370、H371、T438、T439、M440、K441、A469(Q469)、H495、P497、Y498、F517、N521和D525处包含一个或多个取代的曼氏杆菌属物种(Mannheimia spp.)(任选地修饰的SEQ ID NO:5的溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica)的NGT)；(vi)在氨基酸位置F40、R180、H217、D218、M221、H222、Y225、H274、H279、S280、I281、R283、M351、G372、H373、T440、T441、M442、K443、A471(Q471)、H497、P499、Y500、F519、N523和D527处包含一个或多个取代的百伯史坦菌属物种(Bibersteinia spp.)(任选地修饰的SEQ IDNO:6的海藻百伯史坦菌(Bibersteinia trehalosi)的NGT)；和(vii)在氨基酸位置F38、R176、H213、D214、M217、H218、Y221、H271、H276、S277、I278、R280、M348、G369、H370、T437、T438、M439、K440、A468(Q468)、H494、P496、Y497、F516、N520和D524处包含一个或多个取代的嗜血杆菌属物种(任选地修饰的SEQ ID NO:7的杜克雷嗜血杆菌(Haemophilus ducreyi)的NGT)。2.权利要求1所述的修饰的NGT，其中参考SEQ ID NO:1，氨基酸取代位于选自由H219、T438、A696和H495或其同源位置组成的组的一个或多个位置。3.权利要求1所述的修饰的NGT，其中参考SEQ ID NO:1，氨基酸取代位于选自由以下组成的组的一个或多个位置：H219F或H219W；T438S或T438E；A696G或A696I；和H495D或其同源位置。4.权利要求1所述的修饰的NGT，其中野生型NGT包含SEQ ID NO:1
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7中的任何一个，并且参考SEQ ID NO:1，修饰的NGT在选自由以下组成的组的位置处包含至少一个取代突变：H219F、H219W、T438S、T439E、A469G、A469I、H495D、H219F
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T438S、H219F
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H495D、H219W
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T438S、H219W
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H495D、A469G
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H495D和A469I
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H495D或其同源位置；其中H219F
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T438S、H219F
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H495D、H219W
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T438S、H219...

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：西北大学，
类型：发明
国别省市：