山茶品种亲缘关系鉴定用引物组及方法技术

本发明专利技术涉及分子生物学领域，公开了山茶品种亲缘关系鉴定用引物组，包括17条引物；还公开了利用17条引物组鉴定山茶花品种多样性的方法。本发明专利技术筛选到17条引物对本申请所提到的53个山茶品种的种质可进行遗传多样性分析，且多态性位点比率极高，也证明了CDDP分子标记技术可用于人工驯化的山茶品种的亲缘关系鉴定，为后续从分子层面分析山茶品种的亲缘关系奠定了基础。定了基础。定了基础。

【技术实现步骤摘要】
山茶品种亲缘关系鉴定用引物组及方法


[0001]本专利技术涉及分子生物学领域，具体涉及山茶品种亲缘关系鉴定用引物组及方法。

技术介绍

[0002]山茶花又名：山茶、茶花，山茶科、山茶属植物属常绿灌木和小乔木，古名海石榴，有玉茗花、耐冬或曼陀罗等别名，又被分为华东山茶、川茶花和晚山茶。茶花的品种极多，是中国传统的观赏花卉，“十大名花”中排名第七，亦是世界名贵花木之一。中国是山茶属植物的世界分布中心，种质资源极其丰富，但是长期的引种和杂交，使茶花品种的遗传背景模糊，品种间亲缘关系难以鉴定，不利于对山茶的进一步研究和品种优化。CDDP(conserved DNA
‑
derived polymorphism)分子标记技术是依据植物中功能基因和基因家族的保守氨基酸序列设计引物，实现快速鉴定不同物种的分子标记手段。由于CDDP是基于功能基因片段设计的引物，因此扩增得到的标记片段可能是目的基因的一部分或与基因紧密连锁，是一种显性标记，具有良好的多态性，在分子标记辅助育种、遗传多样性分析和种质资源鉴定等方面有重要的应用价值。隽逸豪对山东青岛的6个山茶居群做了CDDP分子标记亲缘关系分析，结果表明其遗传多样性水平较高，而目前针对人工驯化的山茶品种的CDDP并无报导。因此，本专利技术利用CDDP分子标记技术对山茶花多个品种进行CDDP分子标记，从分子层面分析山茶品种的亲缘关系。

技术实现思路

[0003]基于以上问题，本专利技术提供山茶品种亲缘关系鉴定用引物组及方法，本专利技术筛选到17条引物对本申请所提到的53个山茶品种的种质可进行遗传多样性分析，为后续从分子层面分析山茶品种的亲缘关系奠定了基础。
[0004]为解决以上技术问题，本专利技术提供了山茶品种亲缘关系鉴定用引物组，包括如下引物：WRKY
‑
R2引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；WRKY
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R3引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；WRKY
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R2B引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；WRKY
‑
R3B引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；MYB1引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示；MYB2引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示；ERF1引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示；ERF2引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示；ERF3引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示；KNOX
‑
1引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示；KNOX
‑
2引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示；KNOX
‑
3引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:12所示；MADS
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1引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:13所示；MADS
‑
2引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:14所示；MADS
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4引，核苷酸序列如SEQ ID NO:15所示；ABP1
‑
1引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:16所示；ABPI
‑
3引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:17所示；
[0005]上述17条引物可用于鉴定如下53个山茶花品种的遗传多样性：花牡丹，九曲，胭脂牡丹，贝拉，红粉佳人，乔依，财神，羞奇，绯爪芙蓉，六角大红，玛瑟蒂安娜，状元红，超级玫瑰，黄达，叠红玫瑰，心愿，花鹤翎，红十八学士，伯拜范，雪蒂，烈香，午夜飘云，火瀑布，美国大红，欧七，春秋战国，琳布蕾，西利米切尔，红叶贝拉，玉丹，花仙子，六角白，幸福假日，赛
牡丹，牛西奥美玉，迷茫的春天，孔雀椿，松子，白十八学士，美人茶，赤丹，狮子笑，午夜，克瑞墨大牡丹，鸳鸯凤冠，火龙珠，芙蓉香波，杰作，金碧辉煌，红露珍，情人节，黄的旋律，秋牡丹。
[0006]为解决以上技术问题，本专利技术还提供了引物组鉴定山茶花品种多样性的方法，包括如下步骤：
[0007]S1：采用CTAB法提取山茶花总DNA；
[0008]S2：将步骤S1中提取的DNA稀释成40ng/μL，之后进行CDDP PCR，PCR体系如下：总体系20μL，其中DNA模板0.8μL，引物0.8μL，2
×
Pro Taq Master Mix(dye plus)10μL，ddH2O 8.4μL；PCR反应程序如下：94℃预变性3min，94℃变性，退火温度1min，72℃延伸2min，40个循环，72℃后延伸5min；
[0009]S3：扩增产物电泳检测
[0010]取5μL步骤S2中的PCR产物，加入2％琼脂糖凝胶孔中，产物加完后，将电泳槽盖上，110V电压，进行电泳45min，后通过凝胶成像仪采集图片进行分析即可。
[0011]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术筛选到17条引物对本申请所提到的53个山茶品种的种质可进行遗传多样性分析，且多态性位点比率极高，也证明了CDDP分子标记技术可用于人工驯化的山茶品种的亲缘关系鉴定，为后续从分子层面分析山茶品种的亲缘关系奠定了基础。
附图说明
[0012]图1为本专利技术的实施例的山茶1
‑
45品种DNA电泳图；
[0013]图2为本专利技术的实施例的山茶46
‑
53品种DNA电泳图；
[0014]图3为本专利技术的实施例的WRKY
‑
R2引物1
‑
45品种CDDP电泳图；
[0015]图4为本专利技术的实施例的WRKY
‑
R3引物1
‑
45品种CDDP电泳图；
[0016]图5为本专利技术的实施例的WRKY
‑
R2B引物1
‑
45品种CDDP电泳图；
[0017]图6为本专利技术的实施例的WRKY
‑
R3B引物1
‑
45品种CDDP电泳图；
[0018]图7为本专利技术的实施例的MYB1引物1
‑
45品种CDDP电泳图；
[0019]图8为本专利技术的实施例的MYB2引物1
‑
45品种CDDP电泳图；
[0020]图9为本专利技术的实施例的ERF2引物1
‑
45品种CDDP电泳图；
[0021]图10为本专利技术的实施例的KNOX
‑
1引物1
‑
21品种和22
‑
45品种CDDP电泳图；
[0022]图11为本专利技术的实施例的KNOX
‑
2引物1
‑
45品种CDDP电泳图；
[0023]图12为本专利技术的实施例的KNOX
‑
3引物1
‑
45品种CDDP电泳图；
[0024]图13为本专利技术的实施例的ERF3引物1～45品种CDDP电泳图；
[0025]图14为本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.山茶品种亲缘关系鉴定用引物组，其特征在于，包括如下引物：WRKY
‑
R2引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；WRKY
‑
R3引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；WRKY
‑
R2B引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；WRKY
‑
R3B引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；MYB1引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示；MYB2引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示；ERF1引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示；ERF2引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示；ERF3引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示；KNOX
‑
1引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示；KNOX
‑
2引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示；KNOX
‑
3引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:12所示；MADS
‑
1引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:13所示；MADS
‑
2引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:14所示；MADS
‑
4引，核苷酸序列如SEQ ID NO:15所示；ABP1
‑
1引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:16所示；ABP...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏云华，潘宏，张燕青，潘若，赖呈纯，陈艺荃，李章汀，林方喜，
申请(专利权)人：福建省农业科学院农业工程技术研究所，
类型：发明
国别省市：