一种卵泡刺激素β亚基活性肽及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种卵泡刺激素β亚基活性肽及其应用。该活性肽具有以下序列：X

【技术实现步骤摘要】
一种卵泡刺激素
β
亚基活性肽及其应用


[0001]本专利技术属于生物工程
，具体涉及一种卵泡刺激素β亚基活性肽及其应用。

技术介绍

[0002]卵泡刺激素(Follicle stimulating hormone，FSH)是由垂体合成和分泌的一种由α与β两条多肽组成的异源二聚体糖蛋白，对雌性动物卵泡发育和雄性动物精子发生起关键调控作用。除调控生殖功能外，近年研究证实高水平的FSH是导致妇女绝经后肥胖、高血糖、高血脂、骨质疏松等代谢疾病发生的关键原因。
[0003]在临床上，FSH主要用于治疗不孕不育症，以及在辅助生殖技术中作为超数排卵的关键药物。目前，临床所用的FSH主要从绝经妇女的尿液中提取或通过基因重组技术生产。通过尿液提取FSH，首先绝经妇女尿液来源有限且FSH含量低，提取量有限，产品价格昂贵。此外，尿液源FSH有时含病原体或尿蛋白污染物，进入人体后存在引起疾病的风险。而通过基因重组技术生产FSH时，需考虑FSHα和β亚基翻译后复杂的糖基化修饰。糖基化修饰对FSH活性及半衰期具有重要影响。其次，在临床使中，通过尿液提取或基因重组技术生产的FSH，进入机体后均可能发生α与β亚基解离，从而失去生物活性。第三，通过尿液提取或基因重组技术生产的FSH均都具有较高的分子量和较强的免疫原性，通常进入机体后会引起不良的免疫反应。因此，一种安全有效、质量稳定、价格低廉、纯度高且生产简便的新FSH制剂成为临床应用的迫切需求。

技术实现思路

[0004]针对现有技术中的上述不足，本专利技术提供一种卵泡刺激素β亚基活性肽及其应用，本专利技术提供了一种卵泡刺激素β亚基活性肽，可显著激活FSHR下游信号，从而发挥FSH类似物的作用。本专利技术提供的活性肽可作为一种安全有效、质量稳定、价格低廉、纯度高且生产简便的新FSH制剂。使用人工合成的FSHβ活性肽，可避免通过经绝经妇女的尿液中提取或基因重组技术生产FSH的弊端。
[0005]为实现上述目的，本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：
[0006]一种卵泡刺激素β亚基活性肽，该活性肽具有以下序列：X
m
‑
Y
n
‑
Z
c
；X包括T、R、D和L中的至少3种氨基酸；
[0007]Y为肽段LVYKDPARP；
[0008]Z包括K、I、T、Q和N中的至少1种氨基酸，以及位于活性肽3
’
端的K；
[0009]其中，0≤m≤4，n＝0或1，0≤c≤4，且m和n不同时为0。
[0010]进一步地，n和c为0，m取值为4，其活性肽序列为TRDL(SEQ ID NO.9)。
[0011]进一步地，m为0，n＝1，c为4，其活性肽序列为LVYKDPARPZ
c
。
[0012]进一步地，活性肽序列如SEQ ID NO.5～8所示。
[0013]进一步地，m取值为3，n＝1，c取值为4，其活性肽序列为X3‑
LVYKDPARP
‑
Z4。
[0014]进一步地，活性肽序列如SEQ ID NO.1～4所示。
[0015]上述活性肽在制备调控生殖功能的药物中的应用。
[0016]进一步地，药物可促进卵泡发育或精子生成。
[0017]上述活性肽在制备FSH拮抗剂或FSH激活剂中的应用。
[0018]上述活性肽在制备治疗FSH异常分泌导致的疾病的药物中的应用。
[0019]进一步，该活性肽可缓解或治疗由高浓度FSH引起的肥胖、高血脂、高血糖、骨质疏松等疾病。
[0020]本专利技术的有益效果：
[0021]FSH的生理功能通过其受体(FSH receptor,FSR)介导实现。其中，FSHβ亚基在介导FSH与FSHR结合并激活下游信号中发挥核心作用。本专利技术筛查到了FSHβ与FSHR结合的关键氨基酸位点序列
‑‑‑
FSHβ活性肽。经人工合成的FSHβ活性肽，可显著激活FSHR下游信号，从而发挥FSH类似物的作用。FSHβ活性肽可作为一种安全有效、质量稳定、价格低廉、纯度高且生产简便的新FSH制剂。使用人工合成的FSHβ活性肽，可避免通过经绝经妇女的尿液中提取或基因重组技术生产FSH的弊端。
附图说明
[0022]图1为FSHβ活性多肽对小鼠颗粒细胞增殖的影响；
[0023]图2为FSHβ活性多肽对小鼠颗粒细胞雌二醇合成的影响；
[0024]图3为FSHβ活性多肽对雄性幼鼠青春期启动和精子发生的影响；
[0025]图4为FSHβ活性多肽对雌性幼鼠青春期启动和卵巢卵泡发育的影响；
[0026]图5为FSHβ活性多肽对成年雌性小鼠生殖功能的影响。
具体实施方式
[0027]下面对本专利技术的具体实施方式进行描述，以便于本
的技术人员理解本专利技术，但应该清楚，本专利技术不限于具体实施方式的范围，对本
的普通技术人员来讲，只要各种变化在所附的权利要求限定和确定的本专利技术的精神和范围内，这些变化是显而易见的，一切利用本专利技术构思的专利技术创造均在保护之列。
[0028]实施例1合成FSHβ活性肽序列
[0029]以CTC Resin树脂为原料，采用基于Fmoc的固相多肽合成法合成FSHβ活性肽序列，多肽由上海强耀生物科技有限公司合成，具体序列见表1。
[0030]表1 FSHβ活性肽序列
[0031][0032][0033]实施例2 FSHβ活性肽功能验证
[0034]1、离体细胞培养确证FSHβ活性肽可与FSHR结合并激活其下游信号
[0035]选取25日龄雌性C57BL/6小鼠，断颈处死后迅速分离小鼠卵巢并置于4℃4℃预冷的PBS溶液(含有2％青链霉素混合液)中。在显微镜下用针头剔除卵巢周围脂肪，用PBS溶液冲洗卵巢2
‑
3次后将其移至DMEM/F12培养基(添加3％FBS和1％青链霉素混合液)。用针头刺破卵巢以充分释放卵泡中的颗粒细胞。将含有颗粒细胞的DMEM/F12培养基用40μm细胞筛网过滤并收集至15mL离心管。1000r/min离心5min，弃去上清，重复2
‑
3次，以彻底清洗杂质。将清洗的细胞重悬于含有10％FBS的DMEM/F12培养基。将分离得到的卵巢颗粒细胞以5
×
103/孔的浓度接种至96孔细胞培养板，于含5％CO2的培养箱37℃过夜培养。待细胞贴壁后，移去培养基，然后分别添加含100ng/mL不同FSHβ活性肽(表1)的DMEM/F12培养基，并以不含多肽的DMEM/F12培养基(Vehicle)为对照。向每个孔添加10μL CCK
‑
8分析溶液(购自于Boster公司，货号为AR1160)，并在处理0、6、12、18、24、30和36h后用酶标仪测定每孔的吸光值，测定波长为450nm。
[0036]结果显示，添加9种不同FSHβ活性肽(表1)本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种卵泡刺激素β亚基活性肽，其特征在于，所述活性肽具有以下序列：X
m
‑
Y
n
‑
Z
c
；所述X包括T、R、D和L中的至少3种氨基酸；所述Y为肽段LVYKDPARP；所述Z包括K、I、T、Q和N中的至少1种氨基酸，以及位于活性肽3
’
端的K；其中，0≤m≤4，n＝0或1，0≤c≤4，且m和n不同时为0。2.根据权利要求1所述的卵泡刺激素β亚基活性肽，其特征在于，所述n和c为0，m取值为4，其活性肽序列为TRDL。3.根据权利要求1所述的卵泡刺激素β亚基活性肽，其特征在于，所述m为0，n＝1，c为4，其活性肽序列为LVYKDPARPZ
c
。4.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩兴发，曾宪垠，孟风艳，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：