一种miRNA、检测及调控红树植物次生生长速度的方法、检测试剂盒及其应用技术

本发明专利技术提供了一种miRNA、检测红树植物次生生长速度的方法、检测试剂盒及其应用、调控红树植物次生生长速度的方法，所述红树植物为红海榄，所述miRNA为novel

【技术实现步骤摘要】
一种miRNA、检测及调控红树植物次生生长速度的方法、检测试剂盒及其应用


[0001]本专利技术属于分子遗传学
，具体涉及一种miRNA、检测及调控红树植物次生生长速度的方法、检测试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]红树作为当今海岸湿地生态系统中惟一的一类木本植物，在净化海水、防风消浪、控制海岸侵蚀等方面发挥着极为重要的作用。然而，红树林不断受到人类活动的直接或间接破坏，导致红树林面积急剧减少。虽然近年来红树林保护修复取得积极进展，但红树总体面积偏小、生境退化等问题还比较突出。树木的生长发育包括纵向延伸的初生生长以及径向增粗的次生生长。树木次生生长即次生木质部细胞不断形成和增加的过程。阐明红树植物次生生长的分子遗传机制，通过进一步选育出新型速生红树新品种来增加红树种质资源供应，对实现红树林湿地生态系统的恢复具有重要的现实意义。
[0003]miRNA是一类长度为21nt左右的内源性非编码小分子RNA，能够通过碱基互补配对方式与靶基因mRNA分子结合负调控基因的表达。研究发现，miRNA在个体生长发育、细胞分裂分化、应激反应等各种生物活动中起着重要调节作用。尤其是，相关研究证实，miRNA同样是树木次生生长过程的重要调控因子。如Ptr
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miR397a在杨树中过表达后，会下调其靶基因漆酶基因的表达，导致木质素合成受阻。近些年随着基因组测序技术的发展，RNA测序技术被广泛用于一些与重要性状相关的关键miRNAs的寻找与鉴定。尤其是，第三代测序技术的实现，为基因组信息尚未完善的物种进行生长过程重要基因鉴定和功能挖掘提供了有效手段。红海榄是红树科红树属植物，为常绿灌木或小乔木，高7～8m，生长于热带及亚热带的沿海滩涂湿地，主要分布于广西、香港、广东和海南等地，是沿海红树林生态恢复的优选树种。然而，目前关于调控红海榄次生生长的miRNA相关研究工作尚未开展。

技术实现思路

[0004]针对上述存在的技术问题，本专利技术提供了一种miRNA、检测红树植物次生生长速度的方法、检测试剂盒及其应用、调控红树植物次生生长速度的方法，发现了如SEQ ID NO.1所示的novel
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Rst
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miR26与红树植物次生生长速度相关，其可用于开发次生生长的辅助选择标记或提高红树植物次生生长速度，也可用于制备验证红树植物次生生长快慢的检测试剂盒。
[0005]一方面，本专利技术提供了一种与红树植物次生生长相关的miRNA，所述红树植物为红海榄，所述miRNA为novel
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Rst
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miR26，其前体结构的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，成熟区序列为前体序列第71
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91位碱基。
[0006]再一方面，本专利技术提供了一种检测红树植物次生生长速度的方法，其方法包括检测红树植物次生木质部中SEQ ID NO.1所示的miRNA的表达量，SEQ IDNO.1所示的miRNA的表达量与红树植物次生生长速度呈负相关，以验证红树植物次生生长速度的快慢。
[0007]进一步的，红树植物次生木质部中SEQ ID NO.1所示的miRNA的表达量通过Stem
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loop实时荧光定量PCR检测得到。
[0008]再一方面，本专利技术提供了一种检测试剂盒，所述检测试剂盒中包括用于检测如SEQ ID NO.1所示的novel
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miR26表达量的检测试剂。
[0009]进一步的，所述检测试剂盒包括如SEQ ID NO.2所示的novel
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Rst
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miR26茎环反转录引物，反转录扩增缓冲液，PrimeScript RT Enzyme Mix I，无RNAase水构成的反转录PCR扩增试剂。
[0010]进一步的，所述检测试剂盒还包括如SEQ ID NO.3所示的novel
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Rst
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miR26正向扩增引物，如SEQ ID NO.4所示的反向通用引物，如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的内参U6的实时荧光定量PCR扩增引物，以及模板cDNA，SYBRPremix Ex Taq II(Tli RNaseH Plus)(2
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)和双蒸水。
[0011]再一方面，本专利技术提供了如上所述检测试剂盒在验证红树植物生长速度中的应用。
[0012]进一步的，提取红树植物RNA，采用检测试剂盒检测SEQ ID NO.1所示的miRNA表达量检测，实时荧光定量PCR的反应程序设置为：预变性95℃，30s；95℃/5s
→
60℃/30s，共计40个循环。
[0013]再一方面，本专利技术提供了一种调控红树植物次生生长速度的方法，其方法包括增加或降低红树植物的novel
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Rst
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miR26表达量。
[0014]本专利技术以红海榄快—慢植株生长模型为基础，联合使用二代RNA和三代全长转录组测序技术及相关生物信息学手段，首次在红树植物中鉴定获得影响次生生长过程的miRNA，即novel
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miR26，可用于miRNA介导的红树植物次生生长调控机制的研究，同时用于红树植物次生生长性状辅助选择标记的开发；此外，基于该miRNA进一步研发获得了一种检测试剂盒，可用于判定novel
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Rst
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miR26在红树植物次生木质部中的表达量水平，检测方法简单快捷，以此验证其次生生长的快慢。本专利技术还可利用对于novel
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Rst
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miR26的表达量的调控以控制红树植物次生生长的快慢，在实际滨海湿地生态建设中提高红树植物的生长速度。
附图说明
[0015]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0016]图1为快长型红海榄和慢长型红海榄的novel
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Rst
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miR26表达水平的RNA
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seq和qRT
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PCR验证结果。
具体实施方式
[0017]下面将结合本专利技术中的附图，对本专利技术中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本
专利技术保护的范围。
[0018]本专利技术一实施例提供了一种与红树植物次生生长相关的miRNA，所述红树植物为红海榄，所述miRNA为novel
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Rst
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种与红树植物次生生长相关的miRNA，其特征在于，所述红树植物为红海榄，所述miRNA为novel
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miR26，其前体结构的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示，成熟区序列为前体序列第71
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91位碱基。2.一种检测红树植物次生生长速度的方法，其特征在于，其方法包括检测红树植物次生木质部中SEQ ID NO.1所示的miRNA的表达量，SEQ ID NO.1所示的miRNA的表达量与红树植物次生生长速度呈负相关，以验证红树植物次生生长速度的快慢。3.根据所述权利要求2所述的检测红树植物次生生长速度的方法，其特征在于，红树植物次生木质部中SEQ ID NO.1所示的miRNA的表达量通过Stem
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loop实时荧光定量PCR检测得到。4.一种检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒中包括用于检测如SEQ IDNO.1所示的novel
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miR26表达量的检测试剂。5.根据所述权利要求4所述的一种检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括如SEQ ID NO.2所示的novel
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Rst
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miR26茎环反转...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈蓓蓓，肖晓，杨转英，莫玉剑，刘素青，曾晓彤，
申请(专利权)人：广东海洋大学，
类型：发明
国别省市：