用于损伤修复的脐带间充质干细胞上清液、其产品及制法制造技术

本发明专利技术属于生物医疗美容产品技术领域，具体涉及一种用于损伤修复的脐带间充质干细胞上清液、其产品及制法。所述的用于损伤修复的脐带间充质干细胞上清液的制备方法包括：(1)原代培养；(2)传代培养；(3)饥饿培养。本发明专利技术方法制备的上清液中含有多达几百种细胞因子以及外泌体在内的丰富的细胞活性物质，具有突出地平衡调节细胞生长活化作用，用于损伤修复效果显著，且不含外来培养基和细胞组分，皮肤使用安全性高，产品批次之间质量稳定，并且可进一步制成活性物质保存完好的冻干粉形式长期保存。保存。保存。

【技术实现步骤摘要】
用于损伤修复的脐带间充质干细胞上清液、其产品及制法


[0001]本专利技术属于生物医疗美容产品
，具体涉及一种用于损伤修复的脐带间充质干细胞上清液、其产品及制法。

技术介绍

[0002]间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是一类具有自我更新、增殖和多向分化潜能的多能干细胞，具有自我复制和分化潜能的干细胞共性，可刺激组织生长和修复，增强组织的再生能力，影响免疫调节，在细胞治疗领域有着极为广阔的应用前景。间充质干细胞具有强大的旁分泌作用，干细胞的旁分泌效应，能够表达、合成、分泌各类生长因子、细胞因子、调节因子、趋化因子、信号肽等多种生物活性因子。
[0003]细胞上清液是细胞培养的营养液，细胞增殖过程中的营养吸收和活性因子的分泌都是在上清液中进行交换和完成的。所以，培养间充质干细胞的培养上清液中含有多种有效的细胞因子和外泌体。
[0004]细胞因子：由干细胞合成、分泌的一类具有广泛生物学活性的小分子蛋白质，是上清液中富含细胞活性关键的信息传递物质，对体内受到损伤的组织和细胞的功能恢复起到重要作本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于损伤修复的脐带间充质干细胞上清液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)原代培养：从脐带中分离华通氏胶组织并剪成组织块，铺至培养瓶中，然后加入培养基进行贴壁培养至脐带间充质干细胞长满50
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60％培养瓶底面积，得到P0代脐带间充质干细胞；(2)传代培养：a)弃去培养基，然后依次加入洗涤液洗涤、加入消化液消化、加入终止消化液终止消化、离心收集细胞沉淀，以及用培养基将细胞沉淀重悬后，接种至新的培养瓶中进行传代培养；b)待脐带间充质干细胞长满70
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80％培养瓶底面积时重复步骤a)，经连续5次传代培养，得到P5代脐带间充质干细胞；(3)饥饿培养：待P5代脐带间充质干细胞长满培养瓶70
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80％面积时，弃去培养基进行饥饿培养，所得培养液离心去除细胞沉淀后，即得到所述用于损伤修复的脐带间充质干细胞上清液；所述原代培养和传代培养中采用的培养基均为无血清培养基，所述无血清培养基包括：基础培养基Biological IndustriesMSCXF Basal Medium、重组因子MSCXF Suppl.Mix和血清替代物HELIOS UltraGRO
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PURE GI，所述的基础培养基、重组因子和血清替代物的体积比为500:3:10。2.根据权利要求1所述用于损伤修复的脐带间充质干细胞上清液的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，将组织块均匀铺到T225通气细胞培养瓶中，每瓶加入10mL培养基，置于37℃、5％CO2细胞培养箱中培养，每2
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3天补加培养基3
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4mL。3.根据权利要求1所述用于损伤修复的脐带间充质干细胞上清液的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，洗涤液为HBSS，洗涤次数为2次；消化液为...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙洪涛，牛翰婕，王景景，任党利，李泽萌，李锐，屈阳，李建伟，刁云锋，陈翀，
申请(专利权)人：中国人民武装警察部队特色医学中心，
类型：发明
国别省市：