一种预防或治疗慢性疼痛的miRNA靶点及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种预防或治疗慢性疼痛的miRNA靶点及其应用，属于生物技术领域。本发明专利技术提供了miRNA

【技术实现步骤摘要】
一种预防或治疗慢性疼痛的miRNA靶点及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，尤其涉及一种预防或治疗慢性疼痛的miRNA靶点及其应用。

技术介绍

[0002]慢性疼痛(如三叉神经痛、坐骨神经痛、肿瘤疼痛、偏头痛等)是严重危害人类身心健康和生活质量的慢性疾病，被喻为“不死的癌症”，其反复发作、迁延难治的特征使患者长期遭受折磨，而且会诱发焦虑、抑郁和恐惧等恶性情绪或精神异常，甚至会引起个体产生自杀倾向，严重危害患者的生命及生活质量。流行病学数据显示，全球约五分之一人口患有慢性疼痛，且在老年群体中尤为严重。中国慢性疼痛患者已超过3亿人。在众多能缓解疼痛的制剂中，根据药理作用机制，主要可分为两类：阿片受体激动药及非甾体类抗炎镇痛药，但前者对慢性神经性痛疗效差，且患者长期使用后机体产生耐受及药物成瘾；而后者仅对轻中度疼痛有效，用药后可能会有心血管疾病和消化道出血等严重副作用。因此，寻求新的安全有效的止痛药物，且能避免成瘾依赖及严重副作用的新的镇痛药物制剂显得极为迫切。
[0003]表观遗传学涉及基因表达或细胞表型的遗传性改变，却不改变潜在的DNA序列，是组织炎症、损伤和疾病状态等不良因素刺激导致慢性疼痛形成的重要机制。微小RNA(miRNA)是内源性的长度约为22个核苷酸的单链非编码小RNA。根据miRNA前体两个臂(5
’
端臂和3
’
端臂)加工的不同，分别产生以
“‑
5p”和
“‑
3p”命名的有功能的成熟miRNA。对于相似度较高，但又不完全相同(相差1
‑
2个碱基)的成熟miRNA，加上一个英文小写字母(a，b，c)以示区别。功能上，miRNA广泛地参与到基因的转录后调节，在表观遗传调控中发挥着重要的作用。研究表明，miRNA在慢性疼痛形成的过程中发挥着不可替代的作用，靶向miRNA的药物已经在科研，甚至临床应用中得到重视。miR
‑
203a
‑
3p作为一类微小非编码RNA，通过靶向沉默哺乳动物配对的mRNA，主要参与了男性生殖系统发育、肝脏代谢及肿瘤发生。然而，miR
‑
203a
‑
3p是否在疼痛中具有作用，以及是否参与疼痛调节，目前仍未可知。

技术实现思路

[0004]为解决上述问题，本专利技术以大鼠眶下神经慢性压迫性损伤(CCI
‑
ION)诱导的三叉神经痛为疼痛模型，首先通过高通量全基因组测序，发现下丘脑弓状核(arcuate nucleus,ARC)组织中有157个差异表达miRNA(100个上调，57个下调)，筛选出ARC中稳定高表达且差异表达上调的miRNA，再应用种属间保守性筛选及实时定量PCR方法验证，在国内外首次发现了疼痛模型中差异性升高最为显著的miR
‑
203a
‑
3p，并发现ARC核团定位注射miR
‑
203a
‑
3p的抑制剂可显著翻转模型大鼠痛敏反应。因此其可作为慢性疼痛新的治疗靶点，为慢性疼痛的治疗以及临床辅助诊断技术提供了新的方向。
[0005]本专利技术的第一个目的是提供一种慢性疼痛靶点，所述靶点为miR
‑
203a
‑
3p。
[0006]本专利技术的第二个目的是提供miR
‑
203a
‑
3p抑制剂在制备慢性疼痛治疗或预防药物中的应用。
[0007]进一步地，所述miR
‑
203a
‑
3p抑制剂选自反义寡核苷酸、shRNA、siRNA等。其中，反义寡核苷酸靶向结合miR
‑
203a
‑
3p并阻断其对下游基因的靶向调节作用。
[0008]进一步地，所述反义寡核苷酸为antagomir
‑
203a。
[0009]进一步地，所述antagomir
‑
203a包含如下所示的核苷酸序列：5
′‑
CUAGUGGUCCUAAACAUUUCAC
‑3′
。
[0010]进一步地，所述反义寡核苷酸包含一个或多个悬挂碱基TT。
[0011]进一步地，所述悬挂碱基TT位于反义寡核苷酸的5
′‑
或3
′‑
末端。
[0012]进一步地，所述miR
‑
203a
‑
3p抑制剂采用胆固醇、磷酸化、甲基化、假尿嘧啶化、聚乙二醇、巯基化中的一种或多种方式进行修饰。
[0013]进一步地，所述慢性疼痛包括但不限于三叉神经痛、坐骨神经痛、神经病理性疼痛、偏头痛、肿瘤疼痛等。
[0014]本专利技术的第二个目的是提供一种预防或治疗慢性疼痛的药物，该药物以miR
‑
203a
‑
3p为靶点进行设计，抑制miR
‑
203a
‑
3p的表达。
[0015]进一步地，所述慢性疼痛治疗或预防药物由0.1
‑
100％的miR
‑
203a
‑
3p抑制剂和99.9
‑
0％的药用辅料组成。
[0016]本专利技术的有益效果：
[0017]本专利技术首先通过高通量基因测序技术，发现ARC组织中表达丰度高、且差异性增高的miRNA，通过种属保守性筛选及实时定量PCR方法进行验证，首次发现了在疼痛模型中特异性、差异性高表达的miR
‑
203a
‑
3p。行为学结果显示，注射以miR
‑
203a
‑
3p为靶点设计的药物可显著翻转慢性疼痛模型大鼠机械性痛敏反应。本专利技术发现miR
‑
203a
‑
3p高表达于慢性疼痛患者中，是独立的不利因素，因此miR
‑
203a
‑
3p可作为慢性疼痛相关的生物标志物，在慢性疼痛的预防、治疗、药物筛选等方面具有巨大的潜力。
附图说明
[0018]图1为眶下神经慢性压迫性损伤(CCI
‑
ION)模型大鼠中miRNA表达差异；其中，A为眶下神经慢性压迫性损伤(CCI
‑
ION)模型大鼠机械性痛阈值图；B为高通量测序结果显示种属间保守、且CCI
‑
ION模型大鼠ARC组织差异性高表达的miRNAs；
[0019]图2为CCI
‑
ION模型大鼠ARC组织miR
‑
203a
‑
3p表达情况；其中，A为RT
‑
PCR检测CCI
‑
ION模型大鼠ARC及TG组织miR
‑
203a
‑
3p表达对比；B为荧光定量PCR检测CCI
‑
ION模型大鼠本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种慢性疼痛靶点，其特征在于：所述靶点为miR
‑
203a
‑
3p。2.miR
‑
203a
‑
3p抑制剂在制备慢性疼痛治疗或预防药物中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述miR
‑
203a
‑
3p抑制剂选自反义寡核苷酸、shRNA、siRNA中的一种或多种。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述反义寡核苷酸包含如下所示的核苷酸序列：5
′‑
CUAGUGGUCCUAAACAUUUCAC
‑3′
。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述反义寡核苷酸包含一个或多个悬挂碱基TT。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述悬挂碱基TT位于反义寡核苷酸的5
′
或3
′

【专利技术属性】
技术研发人员：陶金，陶禹，孙玉芳，张园，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：