用于靶向亨廷汀mRNA的寡核苷酸化合物制造技术

本公开涉及新型亨廷汀(huntingtin)靶标。还提供了用于治疗亨廷顿病的新型寡核苷酸。还提供了用于治疗亨廷顿病的新型寡核苷酸。

【技术实现步骤摘要】
vitro and in vivo studies.NeuroReport 9,793
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798(1998)；Dass,C.R.Cytotoxicity issues pertinent to lipoplex
‑
mediated gene therapy in
‑
vivo.Journal of Pharmacy and Pharmacology 1
–
9(2010)；Masotti,A等人.Comparison of different commercially available cationic liposome
–
DNA lipoplexes:Parameters influencing toxicity and transfection efficiency.Colloids and Surfaces B:Biointerfaces 68,136
–
144(2009)；Zou,L.L等人.Liposome
‑
mediated NGF gene transfection following neuronal injury:potential therapeutic applications.Gene Ther 6,994
–
1005(1999))。疏水性修饰的siRNA也已经被用作细胞和脑部递送的替代物(Sah,见上文；Soutschek,J等人.Therapeutic silencing of an endogenous gene by systemic administration of modified siRNAs.Nature 432,173
–
178(2004)；Cheng,K.,Ye,Z.,Guntaka,R.V.&Mahato,R.I.Enhanced hepatic uptake and bioactivity of type alpha1(I)collagen gene promoter
‑
specific triplex
‑
forming oligonucleotides after conjugation with cholesterol.Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics 317,797
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805(2006)；Byrne,M等人.Novel Hydrophobically Modified Asymmetric RNAi Compounds(sd
‑
rxRNA)Demonstrate Robust Efficacy in the Eye.Journal of Ocular Pharmacology and Therapeutics 29,855
–
864(2013))，并且这些化合物中的一些甚至已经在临床获得成功，但确保化学稳定性和最低毒性又同时使递送最大化，仍然是困难的任务。目前RNAi技术中的障碍限制了其用于功能基因组学研究和治疗学的能力，从而为将其应用于体外和体内的神经科学领域时改善其设计提供了机会。
[0011]概述
[0012]因此，本文提供了新型亨廷汀(huntingtin)靶序列。本文还提供了靶向新型亨廷汀靶序列的新型RNA分子(例如，siRNA)。所述新型RNA分子(例如，siRNA)在单次低剂量注射后，在小鼠脑部的体外和体内原代神经元中均显示出功效和效力。
[0013]在一个方面，提供了长度为15至30个碱基或者长度为15至35个碱基的RNA分子，其包含与5'CAGUAAAGAGAUUAA 3'(SEQ ID NO:1)基本上互补的互补性区域。
[0014]在某些实施方案中，RNA分子为单链(ss)RNA或双链(ds)RNA。在某些实施方案中，dsRNA包含有义链和反义链，其中所述反义链包含与5'CAGUAAAGAGAUUAA 3'(SEQ ID NO:1)基本上互补的互补性区域。
[0015]在某些实施方案中，dsRNA的长度为30至35个碱基对。在某些实施方案中，互补性区域与SEQ ID NO:1的至少10、11、12或13个连续核苷酸互补。在某些实施方案中，互补性区域含有不超过3个与SEQ ID NO:1的错配。在某些实施方案中，互补性区域与SEQ ID NO:1完全互补。
[0016]在某些实施方案中，dsRNA为平端的。在某些实施方案中，dsRNA包含至少一个单链核苷酸悬突。在某些实施方案中，dsRNA包含天然存在的核苷酸。
[0017]在某些实施方案中，dsRNA包含至少一个修饰的核苷酸。在某些实施方案中，修饰的核苷酸选自：2'
‑
O
‑
甲基修饰的核苷酸、包含5'硫代磷酸酯基团的核苷酸和与胆固醇基衍生物或十二烷酸双癸酰胺基团连接的末端核苷酸。在某些实施方案中，修饰的核苷酸选自：2'
‑
脱氧
‑
2'
‑
氟修饰的核苷酸、2'
‑
脱氧
‑
修饰的核苷酸、锁核苷酸、脱碱基核苷酸、2'
‑
氨基
‑
修饰的核苷酸、2'
‑
烷基
‑
修饰的核苷酸、吗啉代核苷酸、包含氨基磷酸酯的核苷酸和包含非天然碱基的核苷酸。在某些实施方案中，dsRNA包含至少一个2'
‑
O
‑
甲基修饰的核苷酸和至少一个包含5'硫代磷酸酯基团的核苷酸。
[0018]在某些实施方案中，RNA分子包含5
’
端、3
’
端并且具有与靶标的互补性，其中：(1)所述RNA分子包含交替的2
’‑
甲氧基
‑
核糖核苷酸和2
’‑
氟
‑
核糖核苷酸；(2)自5
’
端第2位和第14位的核苷酸不是2
’‑
甲氧基
‑
核糖核苷酸；(3)所述核苷酸经由磷酸二酯键或硫代磷酸酯键连接；和(4)自3
’
端第1
‑
6位的核苷酸或自3
’
端第1
‑
7位的核苷酸经由硫代磷酸酯键与相邻核苷酸连接。
[0019]在某些实施方案中，dsRNA具有5
’
端、3
’
端和与靶标的互补性，并且包含第一寡核苷酸和第二寡核苷酸，其中：(1)所述第一寡核苷酸包含SEQ ID NO:1示出的序列；(2)所述第一寡核苷酸的一部分与所述第二寡核苷酸的一部分互补；(3)所述第二寡核苷酸包含交替的2
’‑
甲氧基
‑
核糖核苷酸和2
’‑
氟
‑
核糖核苷酸；(4)自所述第二寡核苷酸3<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.长度为15至35个碱基的RNA分子，其包含与5'CAGUAAAGAGAUUAA 3'(SEQ ID NO:1)基本上互补的互补性区域。2.如权利要求1所述的RNA分子，其中所述RNA分子为单链(ss)RNA或双链(ds)RNA。3.用于抑制生物体中亨廷汀(HTT)基因表达的药物组合物，其包含权利要求2所述的dsRNA和药学可接受的载体。4.抑制细胞中HTT基因表达的方法，所述方法包括：(a)向所述细胞中引入权利要求2所述的双链核糖核酸(dsRNA)；和(b)将步骤(a)中产生的细胞维持足以获得所述HTT基因的mRNA转录本降解的时间，从而抑制所述细胞中HTT基因的表达。5.治疗或管理亨廷顿病的方法，其包括向需要此类治疗或管理的患者施用治疗有效量的权利要求2所述的dsRNA。6.抑制细胞中HTT基因表达的载体，所述载...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿纳斯塔西娅，
申请(专利权)人：马萨诸塞大学，
类型：发明
国别省市：