从Raffaelealauricola中提取2,3-丁二醇单葡萄糖苷的方法技术

本发明专利技术涉及一种提取2,3

【技术实现步骤摘要】
从Raffaelea lauricola中提取2,3
‑
丁二醇单葡萄糖苷的方法


[0001]本专利技术属于从菌株分离活性物质的
，具体涉及一种从Raffaelea lauricola中提取2,3
‑
丁二醇单葡萄糖苷的方法。

技术介绍

[0002]烷基葡萄糖苷是一类多功能的洗涤剂和化妆品原料，因其无毒、无刺激、生物降解性好、杀菌、提高酶活性及降低其他表面活性剂刺激性等出色的生态学和毒理学性质而受到广泛关注。2,3
‑
丁二醇单葡萄糖苷是一种多元醇普葡萄糖苷，其具有很强的亲水性和持水性，同时又无毒副作用，在化学领域及化妆品中有着较好的应用。
[0003]Raffaelea lauricola是食菌小蠹（Ambrosia beetle）携带的高致病性伴生真菌，是引起树木枯萎病的病原真菌，目前对于该属微生物次级代谢的产物还鲜有报道，因此，研究提取其代谢物2,3
‑
丁二醇单葡萄糖苷具有重要意义。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种从Raffaelea lauricola中提取2,3
‑
丁二醇单葡萄糖苷的方法，以促进其进一步在医药领域的研究和开发。
[0005]为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案如下：一种从Raffaelea lauricola中提取2,3
‑
丁二醇单葡萄糖苷的方法包括以下步骤：1)将Raffaelea lauricola活化后，取菌块接种到PDB培养基中，在，在140～180 r/min、20~28℃条件下连续培养5~10天即初级培养，按15wt%~20wt%接种量转接到改良的大米培养基中，继续在20～28℃条件下静置培养28～40天即次级培养，得到菌丝体。2）将步骤1）得到的菌丝体在室温下干燥后研磨粉碎，用1~2倍体积的乙酸乙酯浸泡12~24小时，超声40~60分钟，收集萃取液，残渣中再加入菌丝体1~2倍体积的乙酸乙酯，超声40~60分钟，收集萃取液，重复以上步骤，共得到三份萃取液合并浓缩得到粗提物浸膏。
[0006]3）将浸膏用氯仿或二氯甲烷溶解，然后用反相硅胶C
18
进行拌样，干法装柱，以甲醇：水自体积比1:9
→
9:1梯度洗脱，收集甲醇：水体积比为[1] 9:1部分洗脱液，旋蒸浓缩得组分A，将组分A通过HPLC制备分离，以流动相体积百分比4%色谱级甲醇：96%纯水等度洗脱，流速2 mL/min,保留时间t
R
=9.6min,收集9.0 min
‑
10.0 min洗脱液，悬蒸得到白色粉末状2,3
‑
丁二醇单葡萄糖苷，其结构式如下：
。
[0007]进一步地，所述步骤1）中改良的大米培养基：大米100 g，木屑10 g，加入纯水120 mL，121℃高压灭菌，20 min。
[0008]进一步地，所述步骤1）中接种菌块的大小为0.5
×
0.5 cm，接种量为4块。
[0009]进一步地，所述步骤2）中超声的功率为400 W，频率为35 KHz。
[0010]进一步地，所述步骤3）中使用的反相硅胶C
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粒径40
‑
60 μm，孔径120
ꢀÅ
。
[0011]进一步地，所述步骤3）中HPLC制备所用的色谱柱为YMC C
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色谱柱250 mm
×
4.6 mm, 5μm。
[0012]进一步地，所述步骤3）中梯度洗脱比例为甲醇：水体积比1:9, 2:8, 3:7, 4:6, 6:4, 7:3, 8:2, 9:1。
[0013]本专利技术的显著优点：本专利技术原料取材方便，分离纯化简单，成本低；制得的化合物纯度高，且重复性好。
附图说明
[0014]图1为2,3
‑
丁二醇单葡萄糖苷的1H NMR谱（CD3OD）；图2为2,3
‑
丁二醇单葡萄糖苷的
13
C NMR谱（CD3OD）；图3为2,3
‑
丁二醇单葡萄糖苷的DEPT135谱（CD3OD）；图4为2,3
‑
丁二醇单葡萄糖苷的COSY谱（CD3OD）；图5为2,3
‑
丁二醇单葡萄糖苷的HMBC谱（CD3OD）；图6为2,3
‑
丁二醇单葡萄糖苷的HSQC谱（CD3OD）。
具体实施方式
[0015]为让本专利技术的上述特征和优点能更明显易懂，下文特举实施例，作详细说明。本专利技术的方法如无特殊说明，均为本领域常规方法。
[0016]本专利技术所使用的Raffaelea lauricola菌株编号为Hulcr7161。
[0017]实施例11)取Raffaelea lauricola为材料，无菌条件下挑取大小为0.5
×
0.5 cm的菌块4块接种到PDB培养基（马铃薯葡萄糖粉3.9 g,纯水100 mL,装入250 mL锥形瓶，在121℃高压下灭菌20 min）中，在160 r/min、28℃条件下连续培养7天即初级培养，按20wt%接种量转接到改良的大米培养基（大米100 g,木屑10 g,加入纯水120 mL，121℃高压灭菌，20 min）中，继续在28℃条件下静置培养30天即次级培养。
[0018]2)收集培养30天菌丝体在室温下干燥之后研磨粉碎，加1.5倍体积的乙酸乙酯浸泡12小时，超声60分钟，过滤得萃取液，旋蒸得浸膏，残渣中再加入菌丝体1倍体积的乙酸乙酯，超声60分钟，收集萃取液，再次重复上述步骤，共得到三份萃取液合并浓缩得到粗提物
浸膏。
[0019]3)将浸膏溶解于氯仿，使用40
‑
60 μm粒径反相C
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硅胶拌样，进行减压粗分，以甲醇：水自1:9体积比开始梯度洗脱（甲醇：水比例为1:9, 2:8, 3:7, 4:6, 6:4, 7:3, 8:2, 9:1），收集甲醇：水9:1部分旋蒸得粗品。
[0020]4)粗品用体积百分比6%甲醇/水溶解，通过HPLC制备分离，色谱柱:YMC C
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色谱柱(250 mm
×
4.6 mm, 5 μm),以流动相体积百分比4%甲醇：96%纯水等度洗脱，流速2 mL/min，保留时间t
R
=9.6 min，收集9.0 min
‑
10.0 min洗脱液，旋蒸得到白色粉末状产物即2,3
‑
丁二醇单葡萄糖苷。
[0021]5)经计算其提取率为1.110%（提取率%=重量/菌丝体浸膏总量
×
100%）。
[0022]实施例2各种型号色谱柱纯化效果1）将实施例1中的粗品减压浓缩后，将体积等分成4份（每份100 mL，含产品0.50 g），分别导入平衡好的HPLC（色谱柱规格均为2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种从Raffaelea lauricola中提取2,3
‑
丁二醇单葡萄糖苷的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）将Raffaelea lauricola活化后，取菌块接种到PDB培养基中，在160～180 r/min、20~28℃条件下连续培养5~10天，按15wt%~20wt%接种量转接到大米培养基中，继续在20～28℃条件下静置培养28～40天即次级培养，得到菌丝体；2）将步骤1）得到的菌丝体在35~40℃下干燥后研磨成粉状，用1~2倍体积乙酸乙酯浸泡12~24小时，超声40~60分钟，收集萃取液，残渣中再加入菌丝体1~2倍体积的乙酸乙酯，超声40~60分钟，收集萃取液，重复以上步骤，共得到三份萃取液合并浓缩得到粗提物浸膏；3）将粗提物浸膏用氯仿或二氯甲烷溶解，然后用反相硅胶C
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进行拌样，干法装柱，以甲醇：水体积比1:9
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9:1梯度洗脱，收集甲醇：水体积比为9:1部位洗脱液，旋蒸浓缩得组分A；4）将组分A通过HPLC制备分离，以流动相体积百分比4%色谱级甲醇：96%纯水等度洗脱，流速2 mL/min，保留时间t
R
=9.6 min，收集9.0 min
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10.0 min洗脱液，悬蒸得到白色粉末状2,3
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丁二醇单葡萄糖苷。2.根据权利要求1所述的从Raffaelea lauricola中提取2,3
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丁二醇单葡萄糖苷的方法，其特征在于：步骤1）中菌块的大小为0....

【专利技术属性】
技术研发人员：邱君志，朱志强，谭震，蒲慧丽，陈宇熹，刘森，杨晨杰，王玲，陈金慧，赖芃宇，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：