用于诊断和治疗癌症的免疫组织化学(IHC)方案和方法技术

在替代实施方式中，提供了用于可再现地对组织样品中蛋白质Ki

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于诊断和治疗癌症的免疫组织化学(IHC)方案和方法
[0001]相关申请
[0002]本专利合作条约(Patent Convention Treaty,PCT)国际专利申请根据35U.S.C.
§
119(e)要求2020年9月9日的美国临时专利申请序列号(USSN)63/076,079；和2020年11月17日的美国临时专利申请序列号USSN 63/114,949的优先权权益。上述申请出于所有目的而全文以引用方式明确并入本文。


[0003]本专利技术总体上涉及癌症治疗、伴随或补充诊断和免疫组织化学方法。在替代实施方式中，提供了用于可再现地对组织样品中蛋白质Ki
‑
67(也称为MKI67)的核表达程度进行确定和评分的免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)方法。在替代实施方式中，提供了用于使用如本文所提供的IHC方法诊断、治疗或改善癌症或肿瘤或评估所述癌症或肿瘤的复发风险的方法。在替代实施方式中，提供了试剂盒，所述试剂盒包括用于实践如本文所提供的方法的组分和使用说明书。本申请描述了用于对Ki
‑
67表达进行评分并利用评分作为伴随或补充诊断或治疗或改善癌症或肿瘤的方法。

技术介绍

[0004]Ki
‑
67抗原(也称为通过单克隆抗体Ki
‑
67鉴定的抗原)是一种在哺乳动物细胞周期的所有活跃期(G1期、S期、G2期和M期)期间表达并在静息细胞(G0期)中下调的核蛋白。在间期期间，该抗原只能在细胞核内检测到，而在有丝分裂中，大部分蛋白质会被重定位到染色体表面。Ki
‑
67抗原的定位与不同的功能相关。在间期期间，Ki
‑
67是异染色质的正常细胞分布和核仁缔合所必需的。在有丝分裂期间，Ki
‑
67在染色体周缘层的形成中发挥作用，并防止有丝分裂染色体的聚集。在DNA修复过程期间，随着细胞进入非增殖状态，抗原迅速降解，并且如通过免疫组织化学(IHC)检测到的，似乎没有Ki
‑
67的表达。

技术实现思路

[0005]在替代实施方式中，提供了用于对组织样品中蛋白质Ki
‑
67(也称为MKI67)的核表达程度进行确定和评分的免疫组织化学(IHC)方法，所述方法包括：
[0006](a)用特异性结合Ki
‑
67的抗体对组织样品进行染色；和
[0007](b)确定具有抗Ki
‑
67核染色的有活力侵袭性肿瘤或癌细胞的总数，并确定所述组织样品的至少一部分中染色和未染色的有活力侵袭性肿瘤或癌细胞的总数，
[0008]其中如果有令人信服的和完全的核抗
‑
Ki
‑
67染色，并且如果侵袭性肿瘤或癌细胞以任何高于定义阈值的强度的抗Ki
‑
67核染色显示，则所述侵袭性肿瘤或癌细胞被计数为抗Ki
‑
67阳性染色，和
[0009](c)确定Ki
‑
67评分(％)，
[0010]其中所述Ki
‑
67评分(％)是在所述组织样品中发现的Ki
‑
67染色的有活力侵袭性肿瘤或癌细胞的数目除以染色和非染色的有活力侵袭性肿瘤或癌细胞的总数，再乘以100。
[0011]在如本文所提供的IHC方法的替代实施方式中：
[0012]‑
确定组织切片是否足以用于对蛋白质Ki
‑
67的核表达量进行确定和评分，并且如果存在约100个或更多个Ki
‑
67染色的有活力侵袭性肿瘤或癌细胞，则认为所述组织切片足以用于进行评估；
[0013]‑
所述Ki
‑
67评分(％)是在所述组织样品中发现的Ki
‑
67染色的有活力侵袭性肿瘤或癌细胞的数目除以染色和非染色的有活力侵袭性肿瘤或癌细胞的总数，再乘以100；
[0014]‑
如果有令人信服的和完全的核抗
‑
Ki
‑
67染色，并且如果侵袭性肿瘤或癌细胞以1+或更高的任何强度的抗Ki
‑
67核染色显示，则所述侵袭性肿瘤或癌细胞被计数为抗Ki
‑
67阳性染色；
[0015]‑
在载玻片或等同物上制备所述组织样品的切片或部分，并在所述载玻片上对所述组织样品的所述切片或部分进行染色；
[0016]‑
特异性结合Ki
‑
67的所述抗体包括单克隆小鼠抗Ki
‑
67抗体；
[0017]‑
抗Ki
‑
67包括单克隆小鼠抗Ki
‑
67克隆MIB
‑
1(可从Agilent Technologies,Inc.,Santa Clara,CA获得)；
[0018]‑
抗Ki
‑
67包括基本上分离或基本上纯化的单克隆小鼠抗Ki
‑
67克隆MIB
‑
1k；
[0019]‑
在高放大倍率下评估Ki
‑
67染色的有活力侵袭性肿瘤或癌细胞的总数；
[0020]‑
所述高放大倍率为至少约10倍放大倍率，或介于约10倍放大倍率与40倍放大倍率之间，或介于约10倍放大倍率与60倍放大倍率之间；
[0021]‑
如果有令人信服和完全的核抗Ki
‑
67染色，并且所述侵袭性肿瘤细胞和癌细胞被以1+或更高的任何强度的抗Ki
‑
67核染色计数，则所述侵袭性肿瘤或癌细胞被计数为抗Ki
‑
67阳性染色；
[0022]‑
当出现以下情况时，则存在有令人信服和完全的核抗Ki
‑
67染色，并且有处于1+或更高的任何强度的抗Ki
‑
67核染色：
[0023](a)染色信号是明确棕色的，或者
[0024](b)所述染色对应于细胞核，或者
[0025](c)所述染色覆盖了所述细胞核内的整个染色质分布，或者
[0026](d)在所述细胞核中呈现灰色的细胞被认为未被抗Ki
‑
67染色，或者
[0027](e)(a)至(d)中的两项或更多项的任意组合；
[0028]‑
当出现以下情况时，则存在有令人信服和完全的核抗Ki
‑
67染色，并且有处于1+或更高的任何强度的抗Ki
‑
67核染色：(a)染色信号是明确棕色的，(b)所述染色对应于细胞核，(c)所述染色覆盖了所述细胞核内的整个染色质分布，和(d)在所述细胞核中呈现灰色的细胞被认为未被抗Ki
‑
67染色；
[0029]‑
所述方法进一步包括从所述Ki
‑
6本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于评估肿瘤或癌症中Ki
‑
67表达程度的方法，所述方法包括：使来自患有肿瘤或癌症的个体的组织样品或其部分与特异性结合Ki
‑
67的抗体或其部分接触；以及通过以下方式来确定Ki
‑
67评分(％)：将由所述抗体特异性结合的Ki
‑
67染色的有活力肿瘤或癌细胞的数目除以染色和未染色的有活力肿瘤或癌细胞的总数并将结果乘以100，从而获得所述Ki
‑
67评分(％)。2.一种用于对组织样品中蛋白质Ki
‑
67(也称为MKI67)的核表达程度进行确定和评分的免疫组织化学(IHC)方法，所述方法包括：(a)用特异性结合Ki
‑
67的抗体对组织样品进行染色；和(b)确定具有抗Ki
‑
67核染色的有活力侵袭性肿瘤或癌细胞的总数，并确定所述组织样品的至少一部分中染色和未染色的有活力侵袭性肿瘤或癌细胞的总数，其中如果有令人信服的和完全的核抗
‑
Ki
‑
67染色，并且如果侵袭性肿瘤或癌细胞以任何高于定义阈值的强度的抗Ki
‑
67核染色显示，则所述侵袭性肿瘤或癌细胞被计数为抗Ki
‑
67阳性染色，和(c)确定Ki
‑
67评分(％)，其中所述Ki
‑
67评分(％)是在所述组织样品中发现的Ki
‑
67染色的有活力侵袭性肿瘤或癌细胞的数目除以染色和非染色的有活力侵袭性肿瘤或癌细胞的总数，再乘以100。3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述癌或肿瘤细胞是有活力侵袭性乳癌或乳腺癌细胞。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，所述方法进一步包括确定所述Ki
‑
67评分(％)是否为10或更高；或者，确定所述Ki
‑
67评分(％)是否为20或更高。5.根据权利要求1至4中任一项或前述权利要求中任一项所述的方法，其中确定Ki
‑
67阳性有活力肿瘤或癌细胞的数目包括确定以下有活力肿瘤或癌细胞的数目：在细胞核中具有Ki
‑
67染色，或者在所述细胞核的整个染色质分布中具有Ki
‑
67染色。6.根据权利要求1至5中任一项或前述权利要求中任一项所述的方法，所述方法进一步包括：确定反映所述抗体与Ki
‑
67结合的颜色是否为预期颜色，其中任选地所述预期颜色是棕色，或所述棕色是通过用3,3'
‑
二氨基联苯胺(DAB)染色生成的。7.根据权利要求1至6中任一项或前述权利要求中任一项所述的方法，所述方法进一步包括：(a)从所述Ki
‑
67阳性肿瘤或癌细胞中排除选自由以下组成的组的至少一种类型的细胞：仅具有细胞质或膜染色的肿瘤细胞或癌细胞；非侵袭性肿瘤或原位癌细胞、无活力或坏死的肿瘤或癌细胞、凋亡细胞核或核碎片、不良保存的组织区域中的肿瘤或癌细胞、良性上皮细胞细胞、具有核染色的非赘生性细胞和/或淋巴细胞、凋亡细胞、坏死细胞、未呈现预期颜色的细胞、在所述细胞核中的所述整个染色质分布中不存在反映所述抗体与Ki
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67结合的染色的细胞、表现出膜染色的细胞、表现出细胞质染色的细胞、淋巴细胞和基质细胞；或者(b)从确定所述Ki
‑
67评分(％)的所述组织样品的部分中排除表现出选自由以下组成的组的至少一种伪影的所述组织样品的部分：扭曲形态伪影、不良固定伪影、挤压伪影和烧灼伪影。8.根据权利要求1至7中任一项或前述权利要求中任一项所述的方法，其中：
(a)所述Ki
‑
67评分(％)是在包括至少100个细胞的所述组织样品的部分中计算的，或者是在包括至少200个细胞的所述组织样品的部分中计算的；或者(b)所述方法进一步包括基于所述Ki
‑
67评分(％)施用癌症治疗剂，并且任选地，所述癌症治疗剂是细胞周期蛋白依赖性激酶的ATP竞争性抑制剂，或者所述细胞周期蛋白依赖性激酶的ATP竞争性抑制剂是阿贝西利，或者所述癌症治疗剂包括帕博西尼或瑞博西尼。9.根据权利要求1至8中任一项或前述权利要求中任一项所述的方法，其中：(a)所述组织样品来自患有淋巴结阳性、早期、切除激素受体阳性(HR+)、人表皮生长因子受体2阴性(HER2
‑
)乳腺癌的患者；或者(b)所述方法进一步包括如果所述Ki
‑
67评分(％)高于阈值，并且任选地，所述阈值为约1％、约5％、约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、或约介于1％与50％之间的任何数目，则确定受试者可能对用癌症治疗剂治疗有利地应答；或者(c)所述癌症治疗剂是细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂，并且任选地，所述细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂是CDK4或CDK6抑制剂，或者所述细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂是阿贝西利、帕博西尼或瑞博西尼；或者(d)所述癌症是乳腺癌或乳癌、头颈癌、结直肠癌、膀胱癌、肺癌、胃肠道间质瘤(GIST)、前列腺癌、宫颈癌或肾细胞癌，或所述癌症是转移性乳腺癌；或者(e)所述方法进一步包括如果所述Ki
‑
67评分(％)高于所述阈值，则施用所述癌症治疗剂；或者(f)所述方法进一步包括如果所述Ki
‑
67评分(％)低于所述阈值，则施用除细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂以外的治疗。10.根据权利要求1至9中任一项或前述权利要求中任一项所述的方法，其中确定组织切片是否足以用于对蛋白质Ki
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67的核表达量进行确定和评分，并且如果存在约100个或更多个Ki
‑
67染色的有活力侵袭性肿瘤或癌细胞，则认为所述组织切片足以用于进行评估。11.根据权利要求1至10中任一项或前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述Ki
‑
67评分(％)是在所述组织样品中发现的Ki
‑
67染色的有活力侵袭性肿瘤或癌细胞的数目除以染色和非染色的有活力侵袭性肿瘤或癌细胞的总数，再乘以100。12.根据权利要求1至11中任一项或前述权利要求中任一项所述的方法，其中如果有令人信服的和完全的核抗
‑
Ki
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67染色，并且如果侵袭性肿瘤或癌细胞以1+或更高的任何强度的抗Ki

【专利技术属性】
技术研发人员：马克，
申请(专利权)人：伊莱利利公司，
类型：发明
国别省市：