一种三叶斑潜蝇预蛹期浸泡dsRNA抑制靶标基因表达的方法技术

本发明专利技术公开了一种三叶斑潜蝇预蛹期浸泡dsRNA抑制靶标基因表达的方法，包括dsRNA的浸泡递送和靶标基因的抑制效率检测两个部分，具体为：通过靶标基因的筛选验证，dsRNA的合成，不同浓度下dsRNA的预蛹浸泡以及靶基因抑制效率检测。本发明专利技术不仅摸索出了三叶斑潜蝇中预蛹浸泡dsRNA的最佳浓度，而且系统和全面建立了三叶斑潜蝇预蛹浸泡dsRNA的RNA干扰(RNAi)体系，这将在斑潜蝇基因功能研究及基于RNAi的斑潜蝇防控技术研究具有重要的意义。潜蝇防控技术研究具有重要的意义。潜蝇防控技术研究具有重要的意义。

【技术实现步骤摘要】
一种三叶斑潜蝇预蛹期浸泡dsRNA抑制靶标基因表达的方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种三叶斑潜蝇预蛹期浸泡dsRNA抑制靶标基因表达的方法。

技术介绍

[0002]三叶斑潜蝇Liriomyza trifolii(Burgess)隶属双翅目Diptera、潜蝇科Agromyzidae，是一种园艺蔬菜上危害严重的世界性害虫，同时也是我国重要的外来入侵有害生物(Spencer，1973；Wan&Yang，2016)。近些年随着设施农业的发展，斑潜蝇类的害虫危害严重趋势愈显，如今已经逐渐成为园艺及蔬菜生产上的重要害虫。目前防控三叶斑潜蝇常用策略还是施用化学农药，但农药的不合理使用已经导致三叶斑潜蝇抗药性的产生，而抗药性和其它因素一起导致三叶斑潜蝇与其近缘种竞争取代格局的变化，给三叶斑潜蝇的防治带来挑战。
[0003]RNA干扰(RNAi)表现出一种高度特异的特点，可以通过促进同源RNA转录物的降解来抑制目的基因在转录后水平上的表达。RNAi是研究靶标基因功能的重要方法，同时由于摄入的双链RNA(dsRNA本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种三叶斑潜蝇预蛹期浸泡dsRNA抑制靶标基因表达的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)dsRNA的浸泡递送：通过靶标基因的获得、dsRNA的合成，然后使用不同浓度的dsRNA+核酸转染试剂浸泡预蛹；2)靶标基因的抑制效率检测：在浸泡dsRNA后，待其化蛹，并用qRT
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PCR法测定蛹中目的基因的表达情况。2.根据权利要求1所述的三叶斑潜蝇预蛹期浸泡dsRNA抑制靶标基因表达的方法，其特征在于，步骤1)中的所述靶标基因的获得是通过将靶标基因几丁质合成酶部分基因序列作为模板进行PCR扩增，回收纯化、克隆和测序即得，其中几丁质合成酶部分基因序列为SEQ ID NO.1。3.根据权利要求2所述的三叶斑潜蝇预蛹期浸泡dsRNA抑制靶标基因表达的方法，其特征在于，步骤1)中所述靶标基因PCR扩增的引物对如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示。4.根据权利要求1所述的三叶斑潜蝇预蛹期浸泡dsRNA抑制靶标基因表达的方法，其特征在于，步骤1)中所述dsRNA的合成是将得到的靶基因与转录试剂混合孵育得到dsRNA，再利用核酸酶消化靶标基因中的DNA和ssRNA，沉淀纯化获得dsRNA，dsRNA的合成引物对如SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5所示。5.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：常亚文，闫玉卿，杜予州，谢洪芳，袁登荣，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：