基于3D培养的人鼻黏膜间充质干细胞批量诱导分化为神经干细胞的方法技术

本发明专利技术涉及了基于3D培养的人鼻黏膜间充质干细胞批量诱导分化为神经干细胞的方法，该方法包括以下步骤：(1)将人鼻息肉作为组织来源获得人鼻黏膜间充质干细胞；(2)将所述的人鼻黏膜间充质干细胞进行3D培养，批量诱导分化为神经干细胞。本发明专利技术由人鼻黏膜间充质干细胞向神经干细胞的诱导分化方法，并基于3D培养的方式实现批量生产。因而本发明专利技术为治疗帕金森病等因神经元缺失导致的神经退行性疾病提供了细胞制备方法。细胞制备方法。细胞制备方法。

【技术实现步骤摘要】
基于3D培养的人鼻黏膜间充质干细胞批量诱导分化为神经干细胞的方法


[0001]本专利技术属于细胞生物学
，涉及基于3D培养的人鼻黏膜间充质干细胞批量诱导分化为神经干细胞的方法。本专利技术涉及经神经干细胞和其制备方法及其批量生产。本研究解决了神经干细胞在医学应用中来源受伦理学影响、相对获取困难的问题，同时提升了神经干细胞诱导异质性和产量低的问题，可以用于帕金森病及其他神经系统疾病的防治。

技术介绍

[0002]神经退行性疾病，如阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿舞蹈症和肌萎缩性侧索硬化症，是高度致残且最终致命的疾病，影响全球数百万人，发病率和患病率不断上升。但目前尚无治愈性疗法可用于阻止或逆转其进展。因此，迫切需要有效的治疗方法。神经干细胞移植已被研究为一种潜在的治疗方法，因为它有可能在中枢神经系统内作为“种子”细胞，能够在哺乳动物中枢神经系统发育过程中自我更新并产生神经元和神经胶质细胞，并且通过不同的机制改善神经损伤。因此，如何获取大量且性能稳定的神经干细胞是影响治疗效果的先决条件。
[0003]王东梅等在间充质干细胞治疗的安全性及伦本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.基于3D培养的人鼻黏膜间充质干细胞批量诱导分化为神经干细胞的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)将人鼻息肉作为组织来源获得人鼻黏膜间充质干细胞；(2)将所述的人鼻黏膜间充质干细胞进行3D培养，批量诱导分化为神经干细胞。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述将人鼻息肉作为组织来源获得人鼻黏膜间充质干细胞包括：清洗鼻息肉，去除粘液和血丝，将鼻息肉切成多个1～2mm组织块，置于培养皿中，在每个组织块用少量完全培养基浸润；2h后将培养皿中的组织块完全浸没于完全培养基中，36～37℃的培养箱中放置10～12小时，随后每两天更换培养基；再过6～7天细胞开始从组织块中生长出来并侵入培养皿，当达到80～90％汇合时使用胰蛋白酶
‑
EDTA消化液消化将细胞离心分离收取细胞，即获得P0代人鼻黏膜间充质干细胞。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述完全培养基的制备方法如下：将青霉素、链霉素、两性霉素B和胎牛血清加到DMEM/F12中，制得所述完全培养基，完全培养基中：胎牛血清浓度为9～10％体积比，青霉素浓度为90IU/ml～100IU/ml，链霉素的浓度为90IU/ml～100IU/ml，两性霉素B浓度为0.23～0.25μg/ml。4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，将所述的人鼻黏膜间充质干细胞进行3D培养，批量诱导分化为神经干细胞包括：将步骤(1)中所得的P0代人鼻黏膜间充质干细胞接种到含有神经基础培养基和微载体的3D生物反应器中进行动态培养，所述的P0代人鼻黏膜间充质干细胞经神经基础培养基诱导分化，得到神经干细胞；优选地，设置3D生物反应器的搅拌器的速度为第一天33～35rpm/min匀速搅拌5～6分钟暂停2～3小时，第二天搅拌器的速度为恒速40～45rpm/min，第三天至第14天搅拌器的速度为恒速50～55rpm/min，细胞在5体...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈田，杨鑫，牛丕业，
申请(专利权)人：首都医科大学，
类型：发明
国别省市：