一种刺梨白粉病复合生防菌剂制造技术

本发明专利技术公开了一种刺梨白粉病复合生防菌剂，是由刺梨白粉病复合生防菌液与复合菌水分散粒剂的载体按在1:2比例混合均匀后再进行加工制得。所述复合生防菌液由芽孢杆菌发酵液、Rhizobacteria固氮菌发酵液和AMF共生真菌发酵液按照1:1:3的菌数比混合组配成而成。本发明专利技术的复合生防菌剂中芽孢杆菌具有抑菌性，Rhizobacteria固氮菌发酵液和AMF共生真菌协同可以增强芽孢杆菌的定殖和复制能力，进一步提高抑菌效果。提高抑菌效果。

【技术实现步骤摘要】
一种刺梨白粉病复合生防菌剂


[0001]本专利技术属于微生物菌剂
，具体涉及一种刺梨白粉病复合生防菌剂。

技术介绍

[0002]刺梨生于海拔500米
‑
2500米的向阳山坡、沟谷、路旁以及灌木丛中，是贵州省的特色精品水果。然而，刺梨的产量受虫病害影响严重，其主要病虫害包括白粉病、褐斑病、烟煤病、梨小食心虫、食叶害虫、月季长管蚜、白粉虱等，致使刺梨品质降低产量减少。其中白粉病使我国刺梨遭受到极大损失，严重影响了我国农业的发展。人们发现，白粉病发生后，寄主受害部位生长受抑制，逐渐退绿变黄，出现枯斑至最后全叶枯干，如果许多叶片同时受害，也可以使植株早枯。病害后期，由菌丝和分生孢子构成的白粉状霉层中，常出现许多散生的黑色粒状的闭囊壳，并以此越冬，次春以子囊孢子进行初侵染。白粉病菌的分生孢子在10
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30℃均可萌发，对湿度要求不高，正常情况下10天即可完成一次侵染循环，农作物一个生长季节能反复受到侵染，一旦发生就会很快传播蔓延。因此，如何有效防止白粉病的发生和传播就成为刺梨种植领域中的重要问题。
[0003]近年来，随着生物技术手段的进步，植物白粉病开始得到一定的控制。研究出了能够保证稳定而高效的防治白粉病，同时可以避免化学农药防治带来的污染问题的菌剂，包括暹罗芽孢杆菌X在特定培养基中的发酵液或其菌悬液或其培养液或其发酵液产物或含有其的菌剂(张振荣etal.,2017)，以及荧光假单胞菌的微生物制剂有效遏制植物白粉病(宗睿etal.,2016)。还研究出了一种包含腈菌唑、苯醚菌酯、三唑酮、缬氨酸、丁子香酚、硫酸镁和谷氨酸的营养型农药(严凯etal.,2020)以防治刺梨白粉病。这种农药能够有效防止白粉病的发生和传播。此外，有报道显示，解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)、空气芽孢杆菌(Bacillusaerius)、哈茨木霉菌(Trichodermaharzianum)等微生物能有效抵抗刺梨白粉病病原菌。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术旨在现有杀菌菌剂基础之上，提供一种刺梨白粉病复合生防菌剂，进一步提高杀菌效果。
[0005]本专利技术采取的具体技术方案是：
[0006]一种刺梨白粉病复合生防菌液，所述菌液由芽孢杆菌发酵液、Rhizobacteria固氮菌发酵液和AMF共生真菌发酵液按照1:1:3的菌数比混合组配成而成。
[0007]进一步地，上述刺梨白粉病复合生防菌液中，所述芽孢杆菌发酵液的具体制备方法为：将冷干管保存的芽孢杆菌菌株使用无菌水稀释后，于LB平板上划线，并置于34℃恒温培养24h；用接种环挑取菌落并接种至50mLLB液体培养基中，34℃、220r/min摇床培养12h，得到芽孢杆菌种子液；接种芽孢杆菌种子液中1.0％的菌种接种量至发酵培养基中，其发酵培养基为K2HPO45g/L、KH2PO45g/L、MgSO410g/L、可溶性淀粉30.2g/L、蛋白胨23.6g/L、玉米浆18.2g/L，发酵液初始pH7.0，37℃下发酵培养2
‑
3天，获得发酵液，发酵液的有效芽孢活菌
数均≥50亿/mL，将发酵液稀释5
‑
20倍即得芽孢杆菌发酵液。
[0008]进一步地，上述刺梨白粉病复合生防菌液中，所述Rhizobacteria固氮菌发酵液的具体制备方法为：将冷干管保存的Rhizobacteria固氮菌菌株使用无菌水稀释后，取0.1mL菌悬液转接到一支试管斜面中，涂匀，置于30℃下恒温培养；连续活化2次，用无菌水连续冲洗试管,取10mL菌悬液接种到发酵培养基内，其发酵培养基为蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化钠2.5g、葡萄糖15g、蒸馏水1000mL，发酵液初始pH7.0，30℃、180r/min下恒温摇床培养，最后制得Rhizobacteria固氮菌发酵液。
[0009]进一步地，上述刺梨白粉病复合生防菌液中，所述AMF共生真菌发酵液的具体制备方法为：将AMF真菌进行活化后，挑取单菌落于YEP液体培养基中，YEP液体培养基为牛肉浸膏5g/L、酵母膏1g/L、蛋白胨5g/L、蔗糖5g/L、NaCl5g/L、MgSO4
·
7H2O4g/L,pH7.0，28℃黑暗培养1天，200r/min。用移液枪吸取1mL菌液加入到MS液体培养基中，pH为5.5，震荡培养5h；当OD600值为0.7时，制备成AMF共生真菌发酵液。
[0010]相应地，本专利技术还提供了一种刺梨白粉病复合生防菌剂，由上述的刺梨白粉病复合生防菌液与复合菌水分散粒剂的载体按在1:2比例混合均匀并进行研磨粉碎得到可湿性粉剂，然后加入适量水分和粘结剂进行捏合造粒，制成水分散粒剂的初级产物，最后再对初级产物进行挤压造粒和干燥，筛分后得到。
[0011]进一步地，所述复合菌水分散粒剂的载体由以下质量百分比的原料组成：82％的硅藻土、4％的十二烷基硫酸钠、6％的羧甲基纤维素钠、4％的硫酸铵和4％的聚乙二醇。
[0012]本专利技术的有益效果：本专利技术的复合生防菌剂中芽孢杆菌具有抑菌性，Rhizobacteria固氮菌发酵液和AMF共生真菌协同可以增强芽孢杆菌的定殖和复制能力，进一步提高抑菌效果。
具体实施方式
[0013]下面结合实施例对本专利技术作进一步地详细说明，但本专利技术的实施方式不限于此，在不脱离本专利技术上述技术思想情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段，做出各种替换和变更，均应包括在本专利技术的范围内。
[0014]实施例1
[0015]枯草芽孢杆菌发酵液的具体制备：将冷干管保存的枯草芽孢杆菌菌株使用无菌水稀释后，于LB平板上划线，并置于34℃恒温培养24h；用接种环挑取菌落并接种至50mLLB液体培养基中，34℃、220r/min摇床培养12h，得到枯草芽孢杆菌种子液；接种枯草芽孢杆菌种子液中1.0％的菌种接种量至发酵培养基中，其发酵培养基为K2HPO45g/L、KH2PO45g/L、MgSO410g/L、可溶性淀粉30.2g/L、蛋白胨23.6g/L、玉米浆18.2g/L，发酵液初始pH7.0，37℃下发酵培养2
‑
3天，获得发酵液，发酵液的有效芽孢活菌数均≥50亿/mL，将发酵液稀释5
‑
20倍即得枯草芽孢杆菌发酵液。
[0016]Rhizobacteria固氮菌发酵液的具体制备：将冷干管保存的Rhizobacteria固氮菌菌株使用无菌水稀释后，取0.1mL菌悬液转接到一支试管斜面中，涂匀，置于30℃下恒温培养；连续活化2次，用无菌水连续冲洗试管,取10mL菌悬液接种到发酵培养基内，其发酵培养基为蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化钠2.5g、葡萄糖15g、蒸馏水1000mL，发酵液初始pH7.0，30℃、180r/min下恒温摇床培养，最后制得Rhizobacteria固氮菌发酵液。
[0017]AMF共生真菌发酵液的具体制备：将AMF真菌进行活化后，挑取单菌落于YEP液体培养基中，YEP液体培本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种刺梨白粉病复合生防菌液，其特征在于，所述菌液由芽孢杆菌发酵液、Rhizobacteria固氮菌发酵液和AMF共生真菌发酵液按照1:1:3的菌数比混合组配成而成。2.根据权利要求1所述一种刺梨白粉病复合生防菌液，其特征在于，所述芽孢杆菌发酵液的具体制备方法为：将冷干管保存的芽孢杆菌菌株使用无菌水稀释后，于LB平板上划线，并置于34℃恒温培养24h；用接种环挑取菌落并接种至50mLLB液体培养基中，34℃、220r/min摇床培养12h，得到芽孢杆菌种子液；接种芽孢杆菌种子液中1.0％的菌种接种量至发酵培养基中，其发酵培养基为K2HPO45g/L、KH2PO45g/L、MgSO410g/L、可溶性淀粉30.2g/L、蛋白胨23.6g/L、玉米浆18.2g/L，发酵液初始pH7.0，37℃下发酵培养2
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3天，获得发酵液，发酵液的有效芽孢活菌数均≥50亿/mL，将发酵液稀释5
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20倍即得芽孢杆菌发酵液。3.根据权利要求1所述一种刺梨白粉病复合生防菌液，其特征在于，所述Rhizobacteria固氮菌发酵液的具体制备方法为：将冷干管保存的Rhizobacteria固氮菌菌株使用无菌水稀释后，取0.1mL菌悬液转接到一支试管斜面中，涂匀，置于30℃下恒温培养；连续活化2次，用无菌水连续冲洗试管,取10mL菌悬液接种到发酵培养基...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵小琼，甘春梅，李双宇，张紫玉，唐婷，李梅，
申请(专利权)人：贵州大学，
类型：发明
国别省市：