一种高效生产全雄黄姑鱼三倍体的诱导方法技术

本发明专利技术公开了一种高效生产全雄黄姑鱼三倍体的诱导方法，属于全雄黄姑鱼三倍体诱导技术领域，具体涉及对性成熟的伪雄黄姑鱼和黄姑鱼雌鱼进行营养调控和光温调控，取精取卵；人工授精获得受精卵，并浸于海水中处理后进行孵化培育，最后再进行全雄三倍体黄姑鱼的诱导培育；在人工授精及孵化培育中在将受精卵浸入海水中时，可以在海水中加入嘌呤衍生物对受精卵进行处理，提高黄姑鱼的三倍体诱导成功率。本发明专利技术方法对黄姑鱼三倍体的诱导成功率高，并在后续诱导下成功得到全雄黄姑鱼三倍体。后续诱导下成功得到全雄黄姑鱼三倍体。后续诱导下成功得到全雄黄姑鱼三倍体。

【技术实现步骤摘要】
一种高效生产全雄黄姑鱼三倍体的诱导方法


[0001]本专利技术属于全雄黄姑鱼三倍体诱导
，具体涉及一种高效生产全雄黄姑鱼三倍体的诱导方法。

技术介绍

[0002]人工诱导鱼类染色体三倍体化和性别控制可以改变相应的生物学性状，如生长速率、雌雄性别、性腺发育等，是鱼类遗传改良的重要技术手段。尤其是在一些具有性二态生长的鱼类中，染色体三倍体化和性别控制技术的联合使用能够进一步加速生长等性能的提升，提高养殖效益。目前，这两项技术在莫桑比克尼罗非鱼和虹鳟等鱼类中已经得到了应用。通过对生长性能进行分析，研究表明对具有性二态的鱼类进行三倍体化和性别控制能够显著提高它们养殖效益。因此，在鱼类养殖中，为了获得较高的养殖效益，可以对各类具有性二态生长等特征的鱼类展开三倍体化和性别控制的研究和应用。此外，三倍体鱼类性腺表现为不育特征，是生殖细胞移植操作中的理想受体，因此，人为诱导鱼类三倍体在生殖细胞移植中也具有重要的应用价值。同时，目前移植受体主要以仔鱼和幼鱼为主，但是在这个时期无法从外部形态分辨雌雄，且在移植后，所产生供体后代的性别是由受体的性别决定，因此，为了准确获得预期性别的子代也需要进一步对三倍体受体进行性别控制。
[0003]黄姑鱼具有典型的性二态性生长特征，雌鱼生长速率显著高于雄鱼。因此，黄姑鱼的三倍体化和性别控制不仅在黄姑鱼的养殖生产中具有潜在的经济效益，而且在石首鱼类的生殖细胞移植、基因编辑育种等研究中也具有重要的应用价值。本方法建立了全雄黄姑鱼三倍体的诱导方法，为黄姑鱼等石首科鱼类的性别控制育种和多倍体育种开辟了新途径，同时，该方法也可以推广到其它鱼类中，促进海水鱼类的三倍体育种和性别控制研究与应用。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种诱导三倍体成功率高的、效果好的高效生产全雄黄姑鱼三倍体的诱导方法。
[0005]本专利技术为实现上述目的所采取的技术方案为：一种高效生产全雄黄姑鱼三倍体的诱导方法，包括：对性成熟的伪雄黄姑鱼和黄姑鱼雌鱼进行营养调控和光温调控，取精取卵；人工授精获得受精卵，并浸于海水中处理后进行孵化培育，最后再进行全雄三倍体黄姑鱼的诱导培育；受精卵浸入3
‑
12℃的海水中处理5
‑
20min，然后在13
‑
16℃海水过渡3
‑
10min，最后放入20
‑
25℃海水中孵化培育；诱导培育中使用含有芳香化酶抑制剂来曲唑的配合饲料。
[0006]优选地，处理受精卵的海水中含有嘌呤衍生物。
[0007]更优选地，嘌呤衍生物为甲氧基嘌呤酯或甲氧基嘌呤异羟肟酸；甲氧基嘌呤酯由6
‑
甲氧基嘌呤与2
‑
溴乙酸乙酯反应制备；甲氧基嘌呤异羟肟酸由甲氧基嘌呤酯与盐酸羟胺反应制备。
[0008]进一步优选地，甲氧基嘌呤酯的制备中，将6
‑
甲氧基嘌呤加入DMF中，加入碳酸钾，加入2
‑
溴乙酸乙酯，在20
‑
40℃下反应8
‑
24h，反应完成后调节pH至中性，乙酸乙酯萃取，饱和氯化钠溶液洗涤，硫酸镁干燥，旋干，硅胶柱层析纯化，得到甲氧基嘌呤酯。
[0009]本专利技术在诱导制备得到黄姑鱼三倍体时，在3
‑
12℃的温度下，再加入微量的嘌呤衍生物之后，可以提高黄姑鱼三倍体的诱导成功率，并且具有异羟肟酸基团的嘌呤衍生物的诱导成功率更高，而在嘌呤衍生物的嘌呤上具有羟基时，同样可以提高黄姑鱼三倍体的诱导成功率，而在嘌呤衍生物的嘌呤上具有羟基的同时还具有异羟肟酸基团时，所得黄姑鱼三倍体的成功率更高。
[0010]更进一步优选地，甲氧基嘌呤酯的制备中，6
‑
甲氧基嘌呤的使用量为DMF的8
‑
12wt%。
[0011]更进一步优选地，甲氧基嘌呤酯的制备中，碳酸钾的使用量为DMF的10
‑
15wt%。
[0012]更进一步优选地，甲氧基嘌呤酯的制备中，2
‑
溴乙酸乙酯的使用量为6
‑
甲氧基嘌呤的100
‑
150wt%。
[0013]更进一步优选地，甲氧基嘌呤酯的制备中，柱层析洗脱剂为乙酸乙酯和石油醚以质量比1：5
‑
20的比例混合。
[0014]进一步优选地，甲氧基嘌呤异羟肟酸的制备中，将盐酸羟胺加入无水甲醇中，然后加入甲醇钠，在20
‑
40℃下反应20
‑
60min，反应完成后冷却，过滤除去固体，将甲氧基嘌呤酯加入滤液中，在50
‑
60℃下反应4
‑
12h，反应完成后调节pH至5
‑
6，浓缩搅拌，硅胶柱层析纯化，得到甲氧基嘌呤异羟肟酸。
[0015]更进一步优选地，甲氧基嘌呤异羟肟酸的制备中，盐酸羟胺的使用量为无水甲醇的0.5
‑
2wt%。
[0016]更进一步优选地，甲氧基嘌呤异羟肟酸的制备中，甲醇钠的使用量为盐酸羟胺的80
‑
120wt%。
[0017]更进一步优选地，甲氧基嘌呤异羟肟酸的制备中，甲氧基嘌呤酯的使用量为盐酸羟胺的150
‑
300wt%。
[0018]更进一步优选地，甲氧基嘌呤异羟肟酸的制备中，柱层析洗脱剂为甲醇和乙酸乙酯以质量比1：1
‑
3的比例混合。
[0019]更优选地，嘌呤衍生物为羟基嘌呤酯或羟基嘌呤异羟肟酸；羟基嘌呤酯由6
‑
羟基嘌呤与2
‑
溴乙酸乙酯反应制备；羟基嘌呤异羟肟酸由羟基嘌呤酯与盐酸羟胺反应制备。
[0020]进一步优选地，本专利技术还可制备得到一种羟基嘌呤酯，羟基嘌呤酯的制备与甲氧基嘌呤酯的制备相比，不同之处在于，将6
‑
甲氧基嘌呤替换为6
‑
羟基嘌呤。
[0021]本专利技术还可制备得到一种羟基嘌呤异羟肟酸，羟基嘌呤异羟肟酸的制备与甲氧基嘌呤异羟肟酸的制备相比，不同之处在于，将甲氧基嘌呤酯替换为羟基嘌呤酯。
[0022]更优选地，处理受精卵的海水中的嘌呤衍生物的含量为0.02
‑
0.2wt%。
[0023]优选地，营养调控中以沙蚕和鱿鱼为饵料进行培育，饵料中加入3
‑
5wt%的维生素C和1
‑
2wt%维生素E。
[0024]优选地，光温调控中的光照强度为60
‑
650lux，光照时间12
‑
16小时/天，水温为18
‑
22℃。
[0025]优选地，配合饲料中芳香化酶抑制剂来曲唑的量为5
‑
20mg/kg。
[0026]优选地，伪雄黄姑鱼和黄姑鱼雌鱼的培育中，挑选已经性成熟的2龄伪雄鱼和正常雌鱼放置在水泥池中，对正常雌鱼进行营养调控和光温调控。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高效生产全雄黄姑鱼三倍体的诱导方法，包括：对性成熟的伪雄黄姑鱼和黄姑鱼雌鱼进行营养调控和光温调控，取精取卵；人工授精获得受精卵，并浸于海水中处理后进行孵化培育，最后再进行全雄三倍体黄姑鱼的诱导培育；所述受精卵浸入3
‑
12℃的海水中处理5
‑
20min，然后在13
‑
16℃海水过渡3
‑
10min，最后放入20
‑
25℃海水中孵化培育；诱导培育中使用含有芳香化酶抑制剂来曲唑的配合饲料。2.根据权利要求1所述的一种高效生产全雄黄姑鱼三倍体的诱导方法，其特征是：所述处理受精卵的海水中含有嘌呤衍生物。3.根据权利要求2所述的一种高效生产全雄黄姑鱼三倍体的诱导方法，其特征是：所述嘌呤衍生物为甲氧基嘌呤酯或甲氧基嘌呤异羟肟酸；所述甲氧基嘌呤酯由6
‑
甲氧基嘌呤与2
‑
溴乙酸乙酯反应制备；所述甲氧基嘌呤异羟肟酸由甲氧基嘌呤酯与盐酸羟胺反应制备。4.根据权利要求2所述的一种高效生产全雄黄姑鱼三倍体的诱导方法，其特征是：所述嘌呤衍生物为羟基嘌呤酯或羟基嘌呤异羟肟酸；所述羟基嘌呤酯由6
‑
羟基嘌呤与2
‑
溴乙酸乙酯反应制备；所述羟基嘌呤异羟肟酸由羟基嘌呤酯与盐酸羟胺反应制备。5.根据权利要求2
‑
4中任一所述的一种高效生产全雄黄姑...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐冬冬，卢磊，杨阳，陈睿毅，胡伟华，俞烈超，
申请(专利权)人：浙江省海洋水产研究所，
类型：发明
国别省市：