基于CRISPR/Cas12a系统的家蚕微孢子虫可视化检测方法及其试剂盒技术方案

本发明专利技术公开基于CRISPR/Cas12a系统的家蚕微孢子虫可视化检测方法及其试剂盒，试剂盒包括能够识别家蚕微孢子虫微孢子虫小亚基rRNA基因的RPA引物、crRNA、AsCas12a蛋白及ssDNA报告分子；同时本发明专利技术提出，在CRISPR/Cas12a荧光检测体系中，L

【技术实现步骤摘要】
基于CRISPR/Cas12a系统的家蚕微孢子虫可视化检测方法及其试剂盒


[0001]本专利技术属于病原检测
，具体涉及基于CRISPR/Cas12a系统的家蚕微孢子虫可视化检测方法及其试剂盒。

技术介绍

[0002]蚕病的种类较多，其中，家蚕微粒子病可通过经口与创伤等感染途径在家蚕群体内发生大规模传染，5
‑
7天内引起家蚕的大批死亡，并可经蚕卵垂直传播给下一代。历史上，法国、意大利等欧洲国家的蚕桑产业就是毁于这种疫病，因此，家蚕微粒子病被列为蚕种生产唯一的检验检疫对象。目前，家蚕病原菌的诊断技术相对落后，世界各国仍然沿用法国科学家巴斯德于1865年创建的母蛾镜检方法，该方法耗时耗力，且在准确性、时效性和灵敏性上均存在不足。近年来，虽然国内外研究者对于家蚕病原菌的诊断方法进行了大量的研究，包括免疫学技术检测、电镜检测、PCR检测、环介导等温扩增技术(loop
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mediated isothermal amplification，LAMP)等，这些方法的检测特异性和灵敏性虽较传统方法均有较大提高，但都存在本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种crRNA，其特征在于，所述crRNA识别的靶点序列为家蚕微孢子虫小亚基rRNA基因Nbssu的第61bp～第83bp位点的核苷酸序列；所述第61bp～第83bp位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；所述基因Nbssu的Gene ID为AY259631.1。2.扩增权利要求1所述的crRNA的引物对，其特征在于，所述crRNA的引物对序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。3.一种基于CRISPR/Cas12a系统的家蚕微孢子虫可视化检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的crRNA、AsCas12a和ssDNA报告分子。4.根据权利要求3所述的基于CRISPR/Cas12a系统的家蚕微孢子虫可视化检测试剂盒，其特征在于，还包括0.1M～0.2M的L
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脯氨酸、体积百分比为1％～10％的甘油。5.根据权利要求3所述的基于CRISPR/Cas12a系统的家蚕微孢子虫可视化检测试剂盒，其特征在于，所述ssDNA报告分子为Nbssu
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61
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FD，序列为5
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FAM
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TTATT
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IABKFQ
‑3’
；或者为Nbssu
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61
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ID，序列为5
’‑
FAM
‑
TTATT
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Biotin
‑3’
。6.一种家蚕微孢子虫的荧光检测方法，其特征在于，所述家蚕微孢子虫荧光检测方法包括以下步骤：(1)从待测样本家蚕中提取基因组DNA；(2)将步骤(1)所述的基因组DNA，利用RPA特异性引物扩增获得特异性产物；(3)将步骤(2)所述特异性产物与权利要求3或4所述的试剂盒中的试剂反应，其中ssDNA报告...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴萍，赵志梦，周雪敏，吴伊湘，沈中元，赵卫国，
申请(专利权)人：江苏科技大学，
类型：发明
国别省市：