一株兼具低温耐受与生防拮抗特性的植物乳杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株兼具低温耐受与生防拮抗特性的植物乳杆菌及其应用，属于生物技术领域。本发明专利技术提供的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CTB2022，保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC M 2022858，保藏日期为2022年6月10日。该植物乳杆菌分离于大连地区海参人工养殖水体环境，在15

【技术实现步骤摘要】
一株兼具低温耐受与生防拮抗特性的植物乳杆菌及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，涉及一株兼具低温耐受与生防拮抗特性的植物乳杆菌及其应用。

技术介绍

[0002]植物乳杆菌是一种广泛存在于发酵食品及动物肠道中的兼性厌氧细菌，适宜生长温度在30～35℃，最适pH6.5左右。植物乳杆菌作为一种乳酸菌，可以合成多种有益物质，如细菌素、胞外多糖等，具有调节免疫、维持菌群平衡、提高免疫力等功能，是一种极具有研究价值的益生菌。不仅被广泛应用在食品生产领域，而且它在饲料生产和医学领域均起着不可替代的作用。细菌素是其自身的次级代谢产物，具有无毒副作用、可被蛋白水解酶分解、维持肠道稳定的特性，在养殖领域具备作为抗生素替代物的使用价值。
[0003]目前植物乳杆菌在养殖业中主要添加在饲料原料中生产发酵饲料，适用温度在30
‑
35℃，而海参养殖环境温度为15
‑
25℃，且植物乳杆菌发酵菌液中，具有抑菌拮抗作用的细菌素主要来源于发酵中后期，因而兼顾生防抑菌作用与低温下菌株活性两方面特性筛选优良植物乳杆菌菌株尤为重要。例如，中国专利CN114107120A中公开了一种秸秆发酵垫料用微生物菌剂及其在生猪健康养殖中的应用，乳酸菌发酵体系包含植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌，在温度33
‑
37℃、pH4.0
‑
5.5、转速150
‑
200rpm、发酵36
‑
48h，乳酸菌活菌数CFU为6.0
×
10
10<br/>。中国专利CN113403227A中公开了一株植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)Kmust
‑
Li01，按体积比2％
‑
5％的接种量将植物乳杆菌种子液接种到MRS液体培养基中，在35
‑
38℃、pH6.2
‑
6.4、搅拌、溶氧量小于1％条件下高密度发酵24
‑
48h，有效活菌数达到10
11
。
[0004]现普遍使用的植物乳杆菌在水产养殖低温环境下，由于温度降低，导致植物乳杆菌活性下降，发酵速率减慢，次级代谢产物含量降低，抑制病原菌效果减弱。因此植物乳杆菌具有良好的低温耐受特性，更有利于提高水产养殖产能、饲料利用与致病菌生防拮抗效果。

技术实现思路

[0005]为解决现有植物乳杆菌菌种在海参等低温水产养殖环境中(15
‑
25℃)，由于低温耐受性不足，造成细胞生长速率缓慢、有效活菌数低，进而影响生长与生防效果的实际问题，本专利技术提供了一株兼具低温耐受与生防拮抗特性的植物乳杆菌，并提供了该菌株在低温环境中的水产致病菌拮抗应用。
[0006]本专利技术一方面提供了一株植物乳杆菌，分离于大连地区海参人工养殖水体环境，该菌株分类命名为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CTB2022，该菌株已于2022年6月10日在中国典型培养物保藏中心保藏(地址为：湖北省武汉市武昌区八一路299号，邮编430072)，保藏编号为：CCTCC M 2022858。
[0007]进一步地，所述的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CTB2022在低温环境下的水产致病菌拮抗应用。
[0008]上述应用中，所述的水产养殖致病菌，包括溶藻弧菌、副溶血弧菌、迟缓爱德华氏菌、黄海希瓦氏菌或哈维氏弧菌等。
[0009]进一步地，所述的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CTB2022生防应用方法，即添加使用1％
‑
10％发酵菌剂，所述发酵菌剂的有效成分为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CTB2022及其发酵产物，或植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CTB2022发酵菌液。
[0010]进一步地，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CTB2022发酵温度为15
‑
25℃，24
‑
48h内发酵菌液有效活菌数≥10
10
cfu/mL
[0011]进一步地，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CTB2022发酵菌液制备方法，包括以下步骤：
[0012](1)无菌条件下将植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CTB2022保藏液稀释涂布于MRS固体平板培养基上，30
‑
37℃恒温静置培养24
‑
36h后，使用无菌水收集平板培养基上孢子，制备孢子浓度108‑
10
10
个/mL的孢子悬液；
[0013](2)在无菌条件下将上述步骤(1)中孢子悬液接种到液体种子培养基中，30
‑
37℃，150
‑
200rpm振荡培养24
‑
48h，制备液体种子液；
[0014](3)在无菌条件下，将上述步骤(2)中液体种子液按体积比5％～10％接入液体发酵培养基中，15
‑
25℃，150
‑
200rpm，通入氮气发酵培养24
‑
48h，得到发酵菌液，所得发酵菌液中植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CTB2022有效活菌数≥10
10
cfu/mL。
[0015]进一步地，所述种子培养基或发酵培养基的组成为：蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、酵母浸粉5g/L、葡萄糖40g/L、磷酸氢二钾2g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、乙酸钠5g/L、硫酸镁0.58g/L、硫酸锰0.25g/L、吐温80 1mL/L，1000mL蒸馏水，调节pH为6.2～6.4，115℃灭菌20min。
[0016]本专利技术所提供的兼具低温耐受与生防拮抗特性的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CTB2022，在15
‑
25℃培养温度下具有良好的低温耐受性，生长快速且有效活菌数高，液体发酵24
‑
48h即可实现有效活菌≥10
10
cfu/mL，较对照组植物乳杆菌发酵有效活菌数提高了4
‑
16.7倍。此外，本专利技术植物乳杆菌CTB2022及其发酵产物、或植物乳杆菌CTB2022发酵菌液对低温水产养殖致病菌如溶藻弧菌、副溶血弧菌、迟缓爱德华氏菌、黄海希瓦氏菌和哈维氏弧菌等具有高效的生防拮抗作用。本专利技术中植物乳杆菌CTB2022具有的潜在应用优势在于，能够显著提高低温环境下益生菌活力及其生物效价、提升低温水产养殖产能。本专利技术提供的兼具低温耐受与生防拮抗特性的植物乳杆菌及其发酵菌剂，一方面丰富了优势菌种资源与种类，拓宽了水产养殖制剂产品的功能化发展，另一方面很好地兼顾了菌株低温耐受及生防拮抗特性，为绿色水产养殖发展提供了新思路。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株兼具低温耐受与生防拮抗特性的植物乳杆菌，分离于大连地区海参人工养殖水体环境，命名为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CTB2022，保藏编号为：CCTCC M 2022858。2.权利要求1所述的植物乳杆菌，在低温环境下的水产致病菌拮抗应用。3.根据权利要求2所述的水产致病菌拮抗应用，其特征在于：所述的致病菌，包括溶藻弧菌、副溶血弧菌、迟缓爱德华氏菌、黄海希瓦氏菌或哈维氏弧菌。4.根据权利要求2或3所述的水产致病菌拮抗应用，其特征在于：添加使用1％
‑
10％发酵菌剂，所述发酵菌剂的有效成分为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CTB2022及其发酵产物，或植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CTB2022发酵菌液。5.根据权利要求4所述的水产致病菌拮抗应用，其特征在于，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CTB2022发酵温度为15
‑
25℃，24
‑
48h内发酵菌液有效活菌数≥10
10
cfu/mL。6.根据权利要求4或5所述的水产致病菌拮抗应用,其特征在于：所述的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CTB2022的发酵菌液制备，包括以下步骤：(1)无菌条件下将植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴又多，王国旭，薛闯，
申请(专利权)人：大连理工大学宁波研究院，
类型：发明
国别省市：