【技术实现步骤摘要】
一种基于噬菌体修饰磁性类过氧化物酶的金黄色葡萄球菌比色分析方法
[0001]本专利技术涉及一种基于噬菌体修饰磁性类过氧化物酶的金黄色葡萄球菌比色分析方法,属于生物
技术介绍
[0002]金黄色葡萄球菌是人类和动物共生菌群的一部分,可导致从轻微的皮肤感染到危及生命的疾病,如肺炎、中毒性休克综合征和败血症。MDR和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)因其表型可塑性和适应性,在临床和牲畜相关的环境和食物链中经常被检测到。因此,准确、快速地检测和识别金黄色葡萄球菌不仅在公共卫生方面,而且在医疗诊断、食品安全、环境监测方面都具有特别重要的意义。
[0003]快速、有效、准确地诊断金黄色葡萄球菌对于快速治疗感染患者、防止感染传播和减少耐药菌株的形成具有重要意义。以培养为基础的传统检测金黄色葡萄球菌的方法,虽然便宜、简单并可以获得定性和定量的结果,但其费力、耗时、操作复杂且很难满足实际需求。近年来,许多非培养技术检测病原菌的方法快速发展并应用,例如,分子生物学方法(如DNA芯片)和免疫学方法(如酶联免疫吸附测定法)。尽管这些方法检测金黄色葡萄球菌具有特异性好、灵敏度高等优点,但却需要昂贵的设备和训练有素的实验室分析人员,以及复杂的样品制备过程。因此,制备出一种能克服干扰且快速、简便、特异、灵敏的金黄色葡萄球菌检测方法具有重要的现实意义。
技术实现思路
[0004]本专利技术的目的是针对以上
技术介绍
中的技术问题,提供一种基于噬菌体修饰磁性类过氧化物酶的金黄色葡萄球菌比色分析方法。
[0005 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种检测金黄色葡萄球菌的噬菌体修饰磁性类过氧化物酶,其特征在于,包括金黄色葡萄球菌噬菌体SapYZUalpha、聚乙烯亚胺和Fe3O4,金黄色葡萄球菌噬菌体SapYZUalpha以金黄色葡萄球菌ATCC 29213为宿主菌,通过静电作用,利用聚乙烯亚胺将金黄色葡萄球菌噬菌体SapYZUalpha头部固定在Fe3O4表面,金黄色葡萄球菌噬菌体SapYZUalpha尾部裸露在外,能够特异性捕获金黄色葡萄球菌。2.权利要求1所述的噬菌体修饰磁性类过氧化物酶的制备方法,其特征在于,所述方法如下:步骤S1:噬菌体的分离与纯化,得到噬菌体悬液;步骤S2:制备PEI@Fe3O4溶液;步骤S3:取步骤S1中得到的噬菌体悬液与步骤S2中得到的PEI@Fe3O4溶液进行混合,孵化,得到SapYZU15@PEI@Fe3O4溶液。3.根据权利要求2所述的噬菌体修饰磁性类过氧化物酶的制备方法,其特征在于,所述步骤S1具体如下:步骤S1
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1:采集扬州市某菜市场及周边污水,取50mL污水,离心机中8000rpm离心10min,依次用0.45μm和0.22μm无菌滤膜过滤杂质,取上清液;步骤S1
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2:取步骤S1
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1中的上清液3mL与等量的2
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LB液体培养基混合,并加入100μL金黄色葡萄球菌ATCC 29213菌悬液,37℃下过夜培养,离心过滤得到粗噬菌体裂解液;步骤S1
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3:向含有5mL的LB半固体培养基的无菌离心管中加入步骤S1
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2中的裂解液和金黄色葡萄球菌ATCC 29213菌悬液各100μL,立即倾倒在底层LB固体培养基上,制成双层平板,在37℃下过夜培养;步骤S1
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4:挑取单个步骤S1
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3中双层平板的噬菌体空斑于含有100μL金黄色葡萄球菌ATCC 29213菌悬液的LB试管中,置于37℃、125rpm条件下培养,次日取出,离心过滤得到噬菌体裂解液;步骤S1
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4:将步骤S1
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4中的裂解液按照步骤S1
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3和步骤S1
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4中的方法交替进行,直至双层平板上形成的明亮清澈、大小均一的噬菌体空斑,制成噬菌体悬液。4.根据权利要求2所述的噬菌体修饰磁性类过氧化物酶的制备方法,其特征在于,所述步骤S2具体如下:步骤S2
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1:将5.63g...
【专利技术属性】
技术研发人员:徐雪超,周文渊,温花,杨眷俪,杨振泉,
申请(专利权)人:扬州大学,
类型:发明
国别省市:
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