一种霸王ZxPDS基因VIGS沉默体系及其构建方法和应用技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体为一种霸王ZxPDS基因VIGS沉默体系及其构建方法和应用，本发明专利技术通过构建含有ZxPDS报告基因特异性片段的pTRV2病毒沉默表达载体，该载体经农杆菌转化后，使霸王内源ZxPDS基因发生沉默，有效降低了霸王ZxPDS基因的表达水平。本发明专利技术建立了霸王ZxPDS的VIGS沉默体系，为开展霸王基因功能研究提供了新途径，并且应用该体系成功沉默了基因ZxOSCA1.2。基因ZxOSCA1.2。基因ZxOSCA1.2。

【技术实现步骤摘要】
一种霸王ZxPDS基因VIGS沉默体系及其构建方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种霸王ZxPDS基因VIGS沉默体系及其构建方法和应用。

技术介绍

[0002]病毒诱导的基因沉默(Virus
‑
inducedgenesilencing，VIGS)，属于转录后基因沉默技术(Post
‑
TranscriptionalGeneSilencing，PTGS)，是一种利用植物体内自身的抗病毒防御机制，通过将携带目的基因片段的病毒载体侵入植物后，利用沉默复合体中与目的基因互补的原理降低植物内源性基因表达水平，从而沉默植物基因，达到反向验证植物基因功能的目的。与其他遗传转化体系相比，VIGS技术因操作步骤简单，周期短，转化效率高，以及无需转化体系的特点，广泛应用于植物基因功能的研究。
[0003]霸王(Zygophyllumxanthoxylon)是蒺藜科霸王属的一种多年生肉质灌木，具有极强的抗旱性，是西北荒漠地区的建群种之一，具有防风固沙的能力，可以用来保护脆弱的沙漠生态系统；叶肉质化本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种霸王ZxPDS基因特异性片段，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.一种霸王ZxPDS基因的VIGS沉默体系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取霸王叶片RNA，并反转录为cDNA，用特异性引物PCR扩增并回收所述ZxPDS报告基因特异性核苷酸片段，所述ZxPDS基因特异性片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；(2)将所述ZxPDS报告基因特异性片段连接至VIGS病毒载体pTRV2中，构建获得重组病毒载体pTRV2
‑
ZxPDS；(3)将包含重组病毒载体pTRV2
‑
ZxPDS的农杆菌菌液与包含pTRV1的农杆菌菌液等体积混合，加入质量分数为0.01％的Silwet，摇匀，制成混合菌液；(4)用茎尖注射法将步骤(3)的混合菌液侵染霸王植株，即构建得到霸王ZxPDS基因的VIGS沉默体系。(5)将浸染后的霸王植株避光培养24h，之后在光照30000lx，昼夜温度25℃/23℃，昼夜时间16h/8h，湿度60％的条件下培养，观察植株的表型，并检测霸王植株中ZxPDS的表达情况。3.根据权利要求2所述的一种霸王ZxPDS基因的VIGS沉默体系的构建方法，其特征在于，步骤(1)中所述特异性引物具体如下：ZxPDS
‑
XbaI
‑
F：5
’‑
GCTCTAGAGCAGAATACCTATCGCAAAC
‑3’
，ZxPDS
‑
BamHI
‑
R：5
’‑
CGGGATCCACTCTTCAGTAA...

【专利技术属性】
技术研发人员：张林静，王越，李琳，付高飞，胡光洁，郭海洋，苏小芳，
申请(专利权)人：山西师范大学，
类型：发明
国别省市：